目的:肝損傷是最常見(jiàn)的肝病類型,被認(rèn)為是諸多肝病的誘因。目前,引發(fā)肝損傷的原因得到了深入的探究,然而觸發(fā)肝損傷的分子機(jī)制尚不明確,治療方法也很局限。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)降解（Endoplasmic Reticulum-associated deficiency,ERAD）是真核細(xì)胞中的一種蛋白質(zhì)質(zhì)量控制系統(tǒng),負(fù)責(zé)清除未折疊蛋白,恢復(fù)細(xì)胞穩(wěn)態(tài),然而ERAD在肝損傷過(guò)程中的作用尚不清楚。因此,本研究意在探索ERAD功能缺失在肝損傷發(fā)病機(jī)理中的作用,并探討Mg2+在預(yù)防肝損傷中的潛在作用。方法:1、利用CRISPR-Cas9技術(shù)構(gòu)建ERAD功能缺失的HepG2細(xì)胞。2、通過(guò)對(duì)正常小鼠和ERAD功能缺失小鼠的血漿生化指標(biāo)和組織切片分析,檢測(cè)小鼠肝損傷情況。3、利用Western blot和Co-IP技術(shù)分析ERAD功能缺失的HepG2細(xì)胞中未折疊蛋白的降解及聚集情況。4、通過(guò)油紅O染色分析ERAD功能缺失的HepG2細(xì)胞中脂肪代謝情況。5、通過(guò)Mg2+干預(yù),檢測(cè)ERAD功能缺失的HepG2細(xì)胞相對(duì)細(xì)胞活力的變化。結(jié)果:1、ERAD功能缺失的HepG2細(xì)胞和小鼠模型構(gòu)建成功。2、ERAD功能缺失導(dǎo)致小鼠發(fā)... 

【文章來(lái)源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．?ＥＲＡＤ功能缺失的小鼠肝損傷情況檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析?內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)降解功能缺失導(dǎo)致的肝損傷發(fā)生機(jī)制與干預(yù)措施研宄??進(jìn)行計(jì)算，并利用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ軟件繪制變化曲線，結(jié)果顯示（圖３．Ａ－Ｄ），??在ＨｅｐＧ２?ｃｏｎｔｒｏ丨組細(xì)胞中，加入ＣＨＸ抑制蛋白合成后，未折疊蛋白ＮＨＫ－ＧＦＰ??蛋白的降解不受抑制，隨著ＣＨＸ加入時(shí)間的延長(zhǎng)，ＮＨＫ－ＧＦＰ蛋白在細(xì)胞中的??量會(huì)越來(lái)越少，說(shuō)明在ＨｅｐＧ２?ｃｏｎｔｒｏｌ細(xì)胞中未折疊蛋白降解正常。然而ＨｅｐＧ２??Ｈｒｃｉｌ?Ｋ０細(xì)胞和ＨｅｐＧ２?ＳｅｌｌＬ?Ｋ０細(xì)胞在蛋白質(zhì)合成受到抑制的情況下，未折疊??蛋白ＮＨＫ－ＧＦＰ的降解也存在障礙，并不會(huì)隨ＣＨＸ加入時(shí)間的延長(zhǎng)而使細(xì)胞中??聚集的未折疊蛋白發(fā)生明顯的變化，這樣就會(huì)導(dǎo)致大量的未折疊蛋白聚集在內(nèi)質(zhì)??網(wǎng)中，影響細(xì)胞功能，使得內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中蛋白過(guò)載，進(jìn)一步加強(qiáng)ＥＲＳ。??Ａ?ＨｅｐＧ２ｃｏｎｔｒｏｌ?ＨｅｐＳＳＳｅＭＬＫＯ?＾?＾ｃｏｎｔｒｏｌ??ＮＨＫ＇ＧＦＰ?Ｊ?？?Ｍ?０?？?９０?ＣＨＸ（ｍｉｎ）?１＇°１＾?－?ＨｅｐＧ２Ｓｅｌ１ＬＫＯ????Ｃ?????ｊ：??ｐ－ａｃｔｉｎ?°＇５ｉ—Ｓ－？?Ｔｏｏ??ＣＨＸ?ｃｈａｓｅ（ｍｔｎ）??Ｃ?ＨｅｐＧ２?ｃｏｎｔｒｏｌ?ＨｅｐＧ２?Ｈｒｄｌ?ＫＯ?Ｄ?１２?？?ＨｅｐＧ２?ｃｏｎｔｒｏｌ??ＮＨＫ－６ＦＰ?＋?＋?＋?＋?＋?￣ＨｅｐＧ２Ｈｒｄ１ＫＯ??０?４５?９０?０?４５?９０?ＣＨＸ?Ｃｈａｓｅ（ｍｉｎ）?ｉ??—??—??１１－°－?——■??ＮＨＫ－６ＦＰ?＿ｉ?麵》■？?＿§?爾．７３ｋＤ?｜?０．９．????ｓ?０８．??Ｍｃｔｉｎ?ｍｍ?４３ｋＤ?

圖４．?ＥＲＡＤ?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Apoptosis and non-alcoholic fatty liver diseases[J]. Tatsuo Kanda,Shunichi Matsuoka,Motomi Yamazaki,Toshikatsu Shibata,Kazushige Nirei,Hiroshi Takahashi,Tomohiro Kaneko,Mariko Fujisawa,Teruhisa Higuchi,Hitomi Nakamura,Naoki Matsumoto,Hiroaki Yamagami,Masahiro Ogawa,Hiroo Imazu,Kazumichi Kuroda,Mitsuhiko Moriyama.  World Journal of Gastroenterology. 2018(25)



本文編號(hào)：3329236