研究背景與實驗目的:原發(fā)性膽汁性膽管炎（Primary biliary cholangitis,PBC）是一種器官特異性自身免疫性肝病,其特征是存在抗線粒體抗體,炎癥和小葉間膽管破壞。95%以上的PBC患者的血清中存在抗M2型線粒體抗體（Anti-mitochondrial antibody,AMA）,其所針對的抗原主要是線粒體中的丙酮酸脫氫酶E2亞基（PDC-E2）。雖然PBC疾病的發(fā)病機制尚未完全清楚,易感基因和環(huán)境危險因素在PBC的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。對自身組織（抗原）喪失免疫耐受是PBC疾病發(fā)生的基礎。T淋巴細胞在這一過程中發(fā)揮著關鍵性的作用。T細胞受體（T cell receptor,TCR）是T細胞表面的一種特異性受體,負責識別由主要組織相容性復合體（major histocompatibility complex,MHC）所呈遞的抗原和介導免疫應答,是T細胞識別不同的抗原及被激活的中心環(huán)節(jié)。而TCR的抗原特異性主要由β受體鏈的高變互補決定區(qū) 3（complementary determining regions 3,CDR3）決定。我們研究 PBC患者的初始和記憶... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：116 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

測序結果的穩(wěn)定性和可靠性評估

我們通過繪制散點圖從整體水平分析ＰＢＣ患者組和正常對照組（Ｎｏｒｍａ丨??ｃｏｎｔｒｏｌ，?ＮＣ）外周血中ＣＤ４＋記憶細胞和ＣＤ『記憶細胞的ＴＣＲｐ?ＣＤＲ３核苷酸序??列的克隆擴增程度（圖２）。我們發(fā)現無論是ＣＤ４＋記憶細胞還是ＣＤ８＋記憶細胞，??絕大部分ＴＣＲＰＣＤＲ３序列的頻率較低，表明這些序列尚未經歷大規(guī)模克隆性擴??增。而在每個個體的ＴＣＲｐＣＤＲ３圖譜中都發(fā)現一些高頻序列。總的來說，ＰＢＣ??患者的ＴＣＲＰＣＤＲ３核苷酸序列的克隆擴增程度與正常對照組沒有顯著差異

散點圖展示ＰＢＣ患者與健康者的ＣＤ８＋記憶Ｔ細胞的克隆擴增程度。??我們采用３種評估方法比較ＰＢＣ患者組和正常對照組ＣＤ４＋記憶細胞和ＣＤ８’??記憶細胞的ＴＣＲｐＣＤＲ３免疫圖譜的多樣性（圖３），發(fā)現克隆數／ＣＤＲ３總序列數??的百分比在?ＮＣ－４ＲＯ，?ＰＢＣ－４ＲＯ，?ＮＣ－８ＲＯ?和?ＰＢＣ－８ＲＯ?組分別為?４．４３?±?丨．５３％，?３．４５??±０．９９％，丨．０３土０．４０°／〇和丨．００±０．３２％。該值越大說明說明樣本的多樣性越大，反??之越小。結果表明ＰＢＣ患者組的ＴＣＲ（３ＣＤＲ３免疫圖譜多祥性小于正常對照組，??但差異不顯著。但無論在ＰＢＣ患者組還是正常對照組，ＣＤ４＋記憶細胞的多樣性??遠大于ＣＤ８＋記憶細胞的多樣性。此外，ＣＤｔ記憶細胞的前Ｉ００位克隆的累計頻??率為２０％，而在ＣＤ８＊記憶細胞中該累計頻率達到６０％，進一步證明了?ＣＤ４＋記憶??細胞的ＴＣＲＰＣＤＲ３免疫圖譜多樣性較大，克隆擴增程度較小。香農墑分析也顯示??了類似的結果。??１９??


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