siRNA（small interfering RNA）是RNA干擾發(fā)揮效應(yīng)的必須因子，它是一類長(zhǎng)約21-25nt的非編碼小RNA分子，由Dicer酶剪切加工而成。siRNA是RISC （RNA-induced silencing complex）的主要成員，能夠激發(fā)與之互補(bǔ)的目標(biāo)mRNA沉默，參與轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)的調(diào)控。siRNA已被證實(shí)能夠在許多生物學(xué)過程中起重要作用，然而目前面臨的最主要問題是如何將siRNA片段導(dǎo)入到靶細(xì)胞中，讓其安全、高效、穩(wěn)定地表達(dá)目的基因。本研究嘗試構(gòu)建表達(dá)siRNA的小環(huán)載體，并初步鑒定其對(duì)乙肝病毒（hepatitis B virus， HBV）復(fù)制及其基因表達(dá)的抑制作用。設(shè)計(jì)并合成靶向HBV S區(qū)的siRNA，將其克隆到小環(huán)載體pMC.BESPX-MCS2上，測(cè)序正確后將重組體pMC-H1-siHBS-U6轉(zhuǎn)化入感受態(tài)E.coliZYCY10P3S2T，然后在培養(yǎng)基中加入L-阿拉伯糖，誘導(dǎo)其降解細(xì)菌骨架，獲取只含有目的基因表達(dá)盒的小環(huán)RNA干擾載體pmc-H1-siHBS-U6。將小環(huán)RNA干擾載體與HBV的真核表達(dá)質(zhì)粒pHBV1.3共轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞Hu... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 小環(huán) RNA 干擾載體 pmc-H1-siHBS-U6 的構(gòu)建及鑒定
    1 實(shí)驗(yàn)材料
    2 實(shí)驗(yàn)方法
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
第二部分 pmc-H1-siHBS-U6 對(duì)乙肝病毒復(fù)制和表達(dá)的抑制作用
    1 實(shí)驗(yàn)材料
    2 實(shí)驗(yàn)方法
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
討論
全文總結(jié)
文獻(xiàn)綜述
參考文獻(xiàn)
致謝
碩士期間發(fā)表論文情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Combination of small interfering RNAs mediates greater inhibition of human hepatitis B virus replication and antigen expression[J]. 陳喆,許則豐,葉景佳,姚航平,鄭樹,丁佳逸.  Journal of Zhejiang University Science. 2005(04)
[2]Cost-effective method of siRNA preparation and its application to inhibit hepatitis B virus replication in HepG2 cells[J]. Zhi-Kang Qian, Bao-Qin Xuan, Tai-Shan Min, Jian-Feng Xu, Lin Li, Wei-Da Huang, Department of Biochemistry, School of Life Sciences, Fudan University, 220 Handan Road, Shanghai 200433, China.  World Journal of Gastroenterology. 2005(09)
[3]RNA干擾技術(shù)抑制A549細(xì)胞表皮生長(zhǎng)因子受體表達(dá)的研究[J]. 張敏,張新,白春學(xué),陳杰,MinQ.Wei.  中華腫瘤雜志. 2004(12)
[4]病毒性肝炎防治方案[J].   中華傳染病雜志. 2001(01)



本文編號(hào)：3152470