全世界大約20億人曾經(jīng)感染過或者現(xiàn)在感染了乙型肝炎病毒,超過了3億五千萬人是乙肝病毒攜帶者。該病毒雖然是最常見的人類病原之一,但是它卻引起了非常嚴重的公眾健康問題。然而由HBV感染所導(dǎo)致的肝癌的發(fā)生機理目前尚不完全清楚。研究表明,病毒與宿主因子之間的相互作用可激活致瘤信號通路并引起一系列的細胞轉(zhuǎn)化,如細胞染色體不穩(wěn)定性的提高、端粒磨損、基因突變等。而且,研究發(fā)現(xiàn),HBV基因組所編碼的HBx在誘導(dǎo)宿主基因組不穩(wěn)定性方面發(fā)揮著重要功能。RecQ DNA家族解螺旋酶在進化中是高度保守的,在維持細胞基因組的完整性方面具重要功能。微生物如大腸桿菌、釀酒酵母僅僅只有一種RecQ解螺旋酶,但高等真核生物卻含有幾種RecQ解旋酶,如在人細胞中,目前發(fā)現(xiàn)了五種RecQ解螺旋酶,即RECQL、BLM, WRN、RTS和RecQ4。RecQ解螺旋酶定位在細胞核里,在DNA復(fù)制、重組和修復(fù)中發(fā)揮重要作用。為了進一步揭示HBx的生物學(xué)功能及其在肝癌誘導(dǎo)發(fā)生中的作用,本研究通過酵母雙雜交方法篩選到了一個可以與HBx發(fā)生相互作用的人解螺旋酶蛋白（DNA helicase Q1-like, RECQL）。為了進一步驗... 

【文章來源】：湖北大學(xué)湖北省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
一、緒論
    1 乙型肝炎病毒X蛋白
        1.1 HBx的生物學(xué)功能
            1.1.1 HBx的反式激活作用和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)功能
            1.1.2 HBx在肝癌中的誘導(dǎo)與轉(zhuǎn)化
            1.1.3 HBx在細胞凋亡中的調(diào)控機制
                1.1.3.1 HBx抑制肝細胞凋亡
                1.1.3.2 HBx促進細胞凋亡
    2 染色體穩(wěn)定性下降可導(dǎo)致腫瘤發(fā)生
    3 RECQL解螺旋酶
        3.1 RECQ的結(jié)構(gòu)與生物學(xué)特性
            3.1.1 RECQL在DNA復(fù)制,重組,修復(fù)中的作用
            3.1.2 RECQL在抑制癌癥和腫瘤方面的作用
    4 研究的目的與意義
二、材料與方法
    1 材料
        1.1 細胞系、質(zhì)粒、菌株和引物
            1.1.1 細胞系
            1.1.2 質(zhì)粒
            1.1.3 菌株
            1.1.4 引物
        1.2 培養(yǎng)基
        1.3 試劑和酶
        1.4 主要緩沖液
    2 方法
        2.1 PCR
        2.2 質(zhì)粒DNA的抽提
        2.3 大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備
        2.4 大腸桿菌的常規(guī)轉(zhuǎn)化
        2.5 大腸桿菌的快速轉(zhuǎn)化
        2.6 SDS-PAGE
        2.7 免疫印記
        2.8 哺乳動物細胞HEK293的復(fù)蘇
        2.9 哺乳動物細胞HEK293的凍存
        2.10 哺乳動物細胞HEK293的組織培養(yǎng)
        2.11 哺乳動物細胞的轉(zhuǎn)染（以sofast轉(zhuǎn)染試劑為列）
        2.12 免疫共沉淀
三、結(jié)果與分析
    1 HBx相互作用蛋白的篩選
    2 表達載體的構(gòu)建
    3 免疫共沉淀驗證HBx與RECQL之間的相互作用
    4 HBx與RECQL共定位在細胞中
    5 HBx與RECQL缺失突變體的構(gòu)建
四、討論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]乙型肝炎病毒X基因?qū)φ８渭毎鸋L7702凋亡影響的初步探討[J]. 石紅麗,范寶峰,尤紅娟,劉曉梅,史震,湯仁仙.  徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2008(04)
[2]染色體不穩(wěn)定分子機制及其與腫瘤發(fā)生研究的新進展[J]. 晏光榮.  癌癥. 2004(03)
[3]p73β inhibits transcriptional activities of enhancer I and X promoter in hepatitis B virus more efficiently than p73α[J]. Tsai-Ping Li.  World Journal of Gastroenterology. 2002(06)



本文編號：3143513