研究目的高甘油三酯血癥是急性胰腺炎的發(fā)病原因之一，但目前對其發(fā)病機制仍未完全明確。本實驗通過體內(nèi)試驗和體外試驗，分別觀察：胰腺腺泡細(xì)胞在游離脂肪酸棕櫚酸存在的情況下對細(xì)胞的損傷、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路在細(xì)胞損傷中的作用及其產(chǎn)生的機制；通過高脂飲食誘導(dǎo)建立高脂（以血甘油三酯升高為主）大鼠動物模型，雨蛙肽誘發(fā)急性胰腺炎，研究內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路在發(fā)病中的作用。從而闡明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在高甘油三酯血癥合并急性胰腺炎大鼠發(fā)病中的作用。研究方法一、體外試驗部分：1、膠原酶法分離大鼠的胰腺腺泡細(xì)胞，給予八肽膽囊收縮素（cholecystokinin-octopeptide，CCK-8）刺激胰腺腺泡細(xì)胞，測定細(xì)胞的淀粉酶釋放比例，觀察胰腺腺泡細(xì)胞的外分泌功能。2、膠原酶法分離大鼠的胰腺腺泡細(xì)胞，分別與0.05mmol／L、0.1mmol／L的棕櫚酸共同培育1、2、3小時后，再給予CCK-8刺激胰腺腺泡細(xì)胞半小時，測定細(xì)胞淀粉酶釋放比例，觀察胰腺腺泡細(xì)胞在棕櫚酸存在的情況下，細(xì)胞外分泌功能的改變情況。3、透射電鏡觀察在棕櫚酸存在下，胰腺腺泡細(xì)胞的凋亡情況。4、半定量RT-PCR檢測GRP78／Bip、XBP-1、GADD... 

【文章來源】：復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1一1分離的胰腺腺泡細(xì)胞(X400倍)

穿月大1貸麟Z研夕之里‘不甘丈第一淑分正常胰腺腺泡細(xì)胞加入100pm的CCK一8后，細(xì)胞腫脹，胞內(nèi)酶原顆粒增多，并出現(xiàn)空泡，部分細(xì)胞存在凋亡和壞死(見圖1一3A)。當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)3小時后，再加入100Pm的ccK一8后，細(xì)胞內(nèi)也有大量的酶原顆粒，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)極度擴張。出現(xiàn)大量的凋亡細(xì)胞:胞質(zhì)固縮，染色質(zhì)濃縮成半月形附于核膜(見圖1一 3BCD)。圖1一3電鏡下胰腺腺泡細(xì)胞的表現(xiàn)A:胰腺腺泡細(xì)胞3h+CCK一 81Oopm0.shX4000倍B:胰腺腺泡細(xì)胞3h+棕擱酸0.IM+CCK一 8IOOpm0.shx3000倍C，D:胰腺腺泡細(xì)胞3h+棕擱酸0.zM+eeK一 8loopm0.shxZ000倍5、細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的伴侶蛋白分子GRp78/Bip、xBP一1、cHoP/GADD153的耐州A表達(dá):RT一PCR結(jié)果顯示，胰腺腺泡細(xì)胞與棕擱酸0.Ilnlnol/L共同培養(yǎng)3小時，當(dāng)加入IOOpmol/L的CCK一 80.5小時后，細(xì)胞的GRp78/Bip、CHOP/GADD153、Caspase一2的mRNA表達(dá)都有增強;xBP一1出現(xiàn)剪接

圖1一5與棕擱酸培養(yǎng)2小時給予100pmol/L刺激后大鼠胰腺腺泡細(xì)胞內(nèi)鈣的變化圖1一6所示，黑色線條表示正常胰腺腺泡細(xì)胞培養(yǎng)3小時后給予IOOpmol/L的CCK一8刺激后鈣離子(F/F。)隨時間變化的曲線;蘭色線條表示的是胰腺腺泡細(xì)胞與棕桐酸0.05tI’irno1/L共同培養(yǎng)3小時后，給予IO0pmol/L的CCK一8后細(xì)胞內(nèi)鈣離子(F/F。)變化曲線;紅色線條表示胰腺腺泡細(xì)胞與棕擱酸0.lrnfnol/L共同培養(yǎng)3小時后，給予10Opmol/L的CCK一8后細(xì)胞內(nèi)鈣離子(F/F。)變化曲線。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，三組細(xì)胞內(nèi)鈣是呈現(xiàn)緩慢增高并達(dá)到高峰，并長時間維持高水平。當(dāng)細(xì)胞與棕擱酸0.Ilnlnol/L共同培養(yǎng)3小時后，用10Opmol/L的CCK一8刺激細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)鈣離子的峰值達(dá)到最高

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3091075