發(fā)布時間：2021-02-19 11:31

　　第一部分小鼠原代肝細胞的分離與培養(yǎng)目的：肝臟是脂質代謝的重要器官，建立小鼠原代肝細胞的體外培養(yǎng)技術，用于后續(xù)脂代謝研究。方法：采用IV型膠原酶原位二步灌流法分離小鼠原代肝細胞。用臺盼藍試劑對新鮮分離的細胞進行染色以檢測細胞活率，并在不同時間點觀察細胞貼壁情況和培養(yǎng)基中白蛋白的分泌情況。通過對肝細胞白蛋白進行免疫細胞化學染色和糖原染色，完成對肝細胞的鑒定。結果：臺盼藍結果顯示:本法所制得的小鼠原代肝細胞活率最高可達90%。剛分離的肝細胞大多數呈單個球形，具有一定立體感。4小時后肝細胞已基本貼壁，可見肝細胞的典型的雙核結構，胞質呈扁平狀。1天后雙核更加明顯，核仁清晰可見，胞質貼壁更加扁平，2天后細胞成多邊形，并維持此形態(tài)數天。免疫細胞化學染色和糖原染色顯示，所培養(yǎng)細胞基本均可合成白蛋白和糖原，并且一周以內都可以在培養(yǎng)基中檢測到細胞分泌的白蛋白。結論：小鼠原代肝細胞的分離與培養(yǎng)技術建立成功，在一周內具有較好的形態(tài)和功能，可進行后續(xù)實驗。第二部分炎癥因子對小鼠原代肝細胞脂質積聚及損傷的影響目的：近年來的研究發(fā)現(xiàn)，慢性系統(tǒng)性炎癥在代謝性疾病的發(fā)生和發(fā)展中有十分重要的作用。我們通過建立原代肝細胞分... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

通過臺盼藍染色染色觀察細胞活率

g. 5 d h. 6 d i. 7 d圖 1.2 在不同的時間點觀察肝細胞的貼壁情況Figure 1.2 The attachment of primary hepatocytes was observed at different time points. ×2002.3 小鼠原代肝細胞的鑒定結果2.3.1 小鼠原代肝細胞免疫細胞化學結果白蛋白由肝實質細胞合成。對白蛋白進行免疫細胞化學染色后發(fā)現(xiàn)，所培養(yǎng)的細胞胞漿中均含有有大量棕黃色顆粒（見圖 1.3.1 a），并且空白對照無黃染顆粒（見圖 1.3.1 b），說明本法培養(yǎng)所得細胞基本均為肝實質細胞,小鼠原代肝細胞分離與培養(yǎng)技術建立成功。

g. 5 d h. 6 d i. 7 d圖 1.2 在不同的時間點觀察肝細胞的貼壁情況1.2 The attachment of primary hepatocytes was observed at different time po鼠原代肝細胞的鑒定結果鼠原代肝細胞免疫細胞化學結果蛋白由肝實質細胞合成。對白蛋白進行免疫細胞化學染色后發(fā)現(xiàn)，胞漿中均含有有大量棕黃色顆粒（見圖 1.3.1 a），并且空白對照無圖 1.3.1 b），說明本法培養(yǎng)所得細胞基本均為肝實質細胞,小鼠原代培養(yǎng)技術建立成功。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]非酒精性脂肪肝發(fā)病機制——“二次打擊”學說研究進展[J]. 董姝,劉平,孫明瑜.  臨床肝膽病雜志. 2012(07)
[2]Role of cytokines and chemokines in non-alcoholic fatty liver disease[J]. Vincent Braunersreuther,Giorgio Luciano Viviani,Franois Mach,Fabrizio Montecucco.  World Journal of Gastroenterology. 2012(08)



本文編號：3041058