目的:通過建立人臍帶間質(zhì)干細胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,huc MSCs）修復葡聚糖硫酸鈉（Dextran Sulfate Sodium Salt,DSS）誘導的小鼠炎癥性腸病（inflammatory bowel disease,IBD）模型以及白喉毒素（diphtheria toxin,DT）誘導的巨噬細胞清除模型,明確巨噬細胞在huc MSCs修復IBD中的作用,探討huc MSCs調(diào)控巨噬細胞修復IBD的作用機制,以提高huc MSCs治療IBD的療效。方法:1)將純合子CD11b-DTR轉基因小鼠進行配籠繁殖,使用聚合酶鏈式反應（PCR）技術和瓊脂糖凝膠電泳技術篩選出純合子小鼠用于后續(xù)實驗。2)選取6周雄性CD11b-DTR轉基因小鼠,預先饑餓24h后腹腔注射DT（給藥濃度為25ng/g）以構建巨噬細胞清除模型。24h后提取小鼠腹腔巨噬細胞,進行F4/80、CD11b抗體染色,并使用流式細胞儀檢測F4/80、CD11b雙陽性細胞,分析其比率。3)選取6周、20g左右的雄性CD11b-DTR轉基因小鼠,飲用含3%D... 

【文章來源】：江蘇大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

建立巨噬細胞清除模型

江蘇大學碩士學位論文組小鼠巨噬細胞清除后，小鼠體重減輕程度明顯提高（圖 2.2B）但 DAI 有所降低，第七天后 DSS 組小鼠便血明顯加�。▓D 2.2C）。DT+DSS 組小鼠結直腸長度與 DSS 組相比無顯著差異，但脾臟體積略小于 DSS 組（圖 2.2D）。同時 H&E染色結果顯示，DSS 組小鼠腸黏膜和脾臟結節(jié)結構均十分紊亂，而 DT 處理后，DSS 誘導的 IBD 小鼠其結直腸組織和脾臟結節(jié)結構完整性均得到一定程度的重建，但紊亂依然存在（圖 2.2E）。上述結果證明，巨噬細胞清除后 DSS 誘導的IBD 發(fā)生發(fā)展會有所改變。

HucMSCs 調(diào)控巨噬細胞 15-LOX-1 表達促進炎癥性腸病修復的機制研究Figure 2.2 Macrophage depletion affected the development of DSS induced IBD The design of model group. (B) The body weight loss of mice in each group, ***P<0.001. (C DAI of mice in each group, ***P<0.001. (D) The colon lengths and spleen size of mice in group. (E) H&E staining of the tissues of mice (100×)..3. 巨噬細胞清除影響 IBD 小鼠結直腸、脾臟炎癥因子表達水平上述結果在組織學水平證明了巨噬細胞清除會影響 IBD 的發(fā)生發(fā)展。為進驗證這一結論，使用 qRT-PCR 進一步檢測了各組小鼠結直腸與脾臟中炎癥(TNF-α、IL-1β、IL-6）表達水平。實驗結果顯示，巨噬細胞清除后，IBD結直腸與脾臟中大部分炎癥因子的表達有所降低。綜上所述，巨噬細胞清除然炎癥依然存在，但 DSS 誘導的 IBD 有所緩解，其發(fā)生發(fā)展有所改變。換，巨噬細胞參與了 DSS 誘導的 IBD 的發(fā)生發(fā)展。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Mesenchymal stem cells-derived exosomal microRNAs contribute to wound inflammation[J]. Dongdong Ti,Haojie Hao,Xiaobing Fu,Weidong Han.  Science China（Life Sciences）. 2016(12)
[2]Diet and nutritional factors in inflammatory bowel diseases[J]. Danuta Owczarek,Tomasz Rodacki,Renata Domaga?a-Rodacka,Dorota Cibor,Tomasz Mach.  World Journal of Gastroenterology. 2016(03)



本文編號：2991230