發(fā)布時間：2020-11-20 01:37

　　 HBV感染是世界范圍內(nèi)重大的健康問題之一，部分的乙肝病毒感染者最終發(fā)展為肝硬化或肝癌。前期的研究認(rèn)為在慢性乙型肝炎的發(fā)展過程中細(xì)胞免疫發(fā)揮了重要作用，尤其是HBV特異性的CD4+T以及CD8+T細(xì)胞在對HBV感染的控制中起至關(guān)重要的作用。隨著免疫學(xué)研究的進(jìn)展，越來越多的免疫細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)，它們通過復(fù)雜的機(jī)制，在慢性乙型肝炎的發(fā)生發(fā)展及臨床轉(zhuǎn)歸過程中發(fā)揮著重要作用。Th17和Treg細(xì)胞是兩種新發(fā)現(xiàn)的CD4+T細(xì)胞亞群，在功能上分別為促進(jìn)和抑制免疫應(yīng)答，研究發(fā)現(xiàn)在正常情況下兩種細(xì)胞處于一種免疫平衡狀態(tài)，但我們前期的研究結(jié)果顯示在慢性乙型肝炎患者體內(nèi)這種平衡被打破。本實驗旨在探索聚乙二醇干擾素治療慢性乙肝的過程中，T輔助細(xì)胞(Th1、Th2、Th17和Treg細(xì)胞)的變化特征以及在抗病毒治療過程中的動態(tài)變化規(guī)律，并分析Th17/Treg細(xì)胞免疫平衡在HBV持續(xù)感染的過程中所發(fā)揮的作用。 方法 選取未經(jīng)抗HBV治療的HBeAg+慢性乙型肝炎患者11例，按常規(guī)劑量和方法給予聚乙二醇干擾素抗病毒治療48w，收集患者在基線、治療4、8、12、24、32、40、48周時的外周血，采用流式抗體進(jìn)行細(xì)胞膜表面和胞內(nèi)染色技術(shù)，運用流式細(xì)胞儀對其單個核細(xì)胞（PBMC）中Th1、Th2、Th17、Treg等細(xì)胞的表達(dá)水平進(jìn)行動態(tài)檢測，同時在每個治療時間點檢測受試者的相關(guān)臨床指標(biāo)（ALT，HBV-DNA，TB及乙肝表面標(biāo)志物等），分析在抗病毒治療過程中各細(xì)胞的變化趨勢，并觀察相互之間是否具有相關(guān)性，及與HBV-DNA定量和ALT水平之間是否具有相關(guān)性。同時選取健康志愿者20例作為對照組。 結(jié)果 1.干擾素治療過程各時間點外周血Th17、Treg、Th1、Th2細(xì)胞的變化趨勢：在治療前8周，Th17細(xì)胞呈上升趨勢，在8周至40周期間呈現(xiàn)為折線形波動，至48周時又出現(xiàn)緩慢升高。Treg細(xì)胞則于前4周快速升高，4周到8周時又迅速下降，前8周內(nèi)以第4周為分界出現(xiàn)倒"V"形變化，隨后呈緩慢波動，無明顯升降趨勢。在治療過程中，Th17細(xì)胞在4周、8周、48周時的表達(dá)頻率與基線相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p0.05），其中24周時的表達(dá)頻率較基線相比差異更為明顯（p0.01）。Treg細(xì)胞僅治療4周時的表達(dá)頻率與基線相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p0.05）。在干擾素治療前4周，Th1細(xì)胞呈快速下降趨勢，治療4-24周期間，其表達(dá)出現(xiàn)緩慢波動，24周后又呈現(xiàn)出明顯升高趨勢，至40周后則快速下降，Th2細(xì)胞在治療過程中表現(xiàn)為水平狀波動趨勢，無明顯變化。在治療過程中，Th1細(xì)胞在4周、8周、12周、24周、48周時的表達(dá)頻率與基線相比有明顯統(tǒng)計學(xué)差異（p0.001），治療32周、40周時的表達(dá)頻率較基線相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p0.05）。Th2細(xì)胞在治療8周、24周、40周時的表達(dá)頻率與基線相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p0.05）。統(tǒng)計結(jié)果顯示，Th17細(xì)胞在CHB患者中的表達(dá)頻率明顯高于健康對照組（p0.05），Th2細(xì)胞在CHB組中的表達(dá)明顯高于HC組(p0.05)。CHB組中的Th17/Treg比率與HC組相比明顯升高（p0.01），Th1/Th2細(xì)胞比率與HC組相比降低（p0.05）。 2.以治療48周時HBeAg下降至1COI為界分為eAg陽性組（1COI）和eAg轉(zhuǎn)換組（1COI），分析eAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換患者及eAg陽性患者外周血各細(xì)胞比例的差異：在干擾素治療前4周，兩組中的Th1細(xì)胞均呈現(xiàn)明顯下降趨勢，在治療4周到40周期間表現(xiàn)為波動狀上升趨勢，至治療48周時，兩組中Th1細(xì)胞的表達(dá)又迅速降低，整體表現(xiàn)為下降趨勢，兩組沒有明顯差別（p0.05）。在治療前8周，eAg轉(zhuǎn)換組中Th2細(xì)胞呈明顯上升趨勢，之后出現(xiàn)緩慢波動，至治療40周后明顯下降，eAg陽性組則始終表現(xiàn)為水平波動趨勢，至治療40周后，也表現(xiàn)為明顯下降。在治療前8周，兩組中Th17細(xì)胞均表現(xiàn)為明顯上升趨勢，之后eAg陽性組繼續(xù)出現(xiàn)上升趨勢，至治療24周后明顯下降,eAg轉(zhuǎn)換組則始終呈水平波動趨勢，兩組在治療48周時Th17細(xì)胞的比例達(dá)到相似水平。在治療前4周，兩組中Treg細(xì)胞呈明顯上升趨勢，之后兩組均呈現(xiàn)波動狀下降趨勢。 3.在peg-IFN治療過程中外周血中各細(xì)胞比例與HBV-DNA、ALT的相關(guān)性分析：經(jīng)Pearson correlation統(tǒng)計分析，結(jié)果顯示Th1與Treg細(xì)胞比例在基線時表現(xiàn)為顯著正相關(guān)性(p0.001)，TH2與TH17細(xì)胞在基線時也表現(xiàn)為正相關(guān)（p0.05），在治療過程中Th17與Treg細(xì)胞、Th1與Th2細(xì)胞的變化均呈相反趨勢，Th17細(xì)胞與Treg細(xì)胞在治療24周、32周時呈負(fù)相關(guān)性（p0.05），Th1細(xì)胞與Th2細(xì)胞在治療24周時表現(xiàn)為負(fù)相關(guān)（p0.05）。在治療12周及24周時，Th17/Treg比例與HBV-DNA之間呈負(fù)相關(guān)(p0.05)，Th1/Th2比例與HBV-DNA之間無明顯相關(guān)性, Th1細(xì)胞與Th17細(xì)胞在治療12周時均與HBV-DNA定量間存在正相關(guān)性(p0.05)。 結(jié)論 在慢性乙型肝炎患者體內(nèi)，Th17細(xì)胞處于功能活躍狀態(tài)，而Treg細(xì)胞處于功能抑制狀態(tài)，這一平衡紊亂在一定程度上與病情嚴(yán)重程度相關(guān)。在聚乙二醇干擾素抗病毒治療的過程中，Th17與Treg細(xì)胞、Th1與Th2細(xì)胞的變化均呈相反趨勢，統(tǒng)計結(jié)果顯示在治療12周和24周時Th17/Treg比值與HBV-DNA載量呈負(fù)相關(guān)，故我們推測這一比率的變化在治療過程中與乙肝病毒載量下降有關(guān)，Th17/Treg不平衡在乙肝病毒持續(xù)存在的過程中扮演了重要角色。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2012
【中圖分類】：R512.62
【部分圖文】：

19圖 3-1 a) Th17 細(xì)胞（CD4+IFN-γ+T）的比例；b)Treg 細(xì)胞（CD4+I細(xì)胞（CD4+IL-17+T）的比例；d)Th1 細(xì)胞（CD4+CD25+Foxp3+T）Fig3-1 a)The gating of Th17 cells (CD4+IL-17+T) proportion; b)The g(CD4+CD25+Foxp3+T)proportion; c)The gating of Th1 cells (CD4+IFNd)The gating of Th2 cells (CD4+IL-4+T) proportion

20圖 3-2 (A)健康對照和 CHB 患者體內(nèi) Th17 細(xì)胞和 Treg 細(xì)胞的百分比；(B)健康對照和 患者體內(nèi) Th1 細(xì)胞和 Th2 細(xì)胞的百分比；(C)健康對照和 CHB 患者體內(nèi) Th17/Treg 細(xì)胞Th1/Th2 細(xì)胞的比率Fig3-2 (A)Pooled data indicate the percentages of Th17 cells and Treg cells in HC and CHpatients. (B)Pooled data indicate the percentages of Th1 cells and Th2 cells in HC and CHpatients. (C)The ratio fo circulating Th17 cells to Treg cells, Th1 cells to Th2 cells in HC anCHB patients. Horizontal bars represent the median values of indicated index.如圖 3-1 所示，我們用流式細(xì)胞儀檢測了健康人群及慢乙肝患者外周血中

圖 3-4 (A) Th17/Treg 細(xì)胞的比值在干擾素治療各時間點的變化趨勢；(B)Th1/Th2 細(xì)胞的比值在干擾素治療各時間點的變化趨勢Fig3-4(A) The change trend of Th17 /Treg ratios at each time point treated by interferon; (B)The change trend of Th1 /Th2 ratios at each time point treated by interferonNotes: Value with *and**differ significantly at P<0.05 and P<0.01 respectively compared withthe baseline.將干擾素治療各時間點 Th1/Th2 細(xì)胞以及 Th17/Treg 細(xì)胞比值的變化趨勢進(jìn)行分析，圖 3-4(A)顯示，在治療前 8 周，Th17/Treg 細(xì)胞比值逐漸上升，在 8 周至40 周期間呈現(xiàn)為"W"折線形波動，40 周至 48 周時呈水平狀態(tài)。圖 3-4(B)所示，Th1/Th2 細(xì)胞比例于治療前 8 周內(nèi)快速升高，至第 8 周時下降至最低點，隨后緩慢升高至 40 周，40 到 48 周時又出現(xiàn)下降趨勢。如圖可見在治療過程中，Th17/Treg細(xì)胞比率在 8 周、24 周時與基線相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）。Th1/Th2 細(xì)胞比率在治療 4 周、24 周、40 周時與基線相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05），在 8周時差異更為明顯（p<0.01）。
【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2890741