目的探討IFN-α和IL-29在HepG2.2.15細(xì)胞中抗乙肝病毒的作用機制。 方法培養(yǎng)HepG2.2.15細(xì)胞,并使用IL-29和IFN-α處理細(xì)胞,通過RT-PCR、普通PCR與Real-time PCR,從mRNA水平探討IL-29抗乙肝病毒的效果;并分析IL-29和IFN-α誘導(dǎo)抗病毒蛋白MxA、2',5'-OAS和PKR的mRNA表達水平。同時使用Western-Blot分析IL-29和IFN-α激活的信號通路。再使用相關(guān)信號通路的特異性阻斷劑,阻斷IL-29和IFN-α激活的相關(guān)信號通路,從而探討信號通路與抗病毒蛋白轉(zhuǎn)錄表達之間的關(guān)系。 結(jié)果IL-29和IFN-α能明顯降低HepG2.2.15細(xì)胞中乙肝病毒mRNA的表達水平,且能夠上調(diào)抗病毒蛋白MxA和2',5'-OAS的mRNA表達(IFN-α還能夠上調(diào)PKR的轉(zhuǎn)錄),并能促進AKT和ERK的磷酸化。使用LY294002(50μM)和PD98059 (100μM)能夠分別有效抑制HepG2.2.15細(xì)胞中AKT和ERK的磷酸化,并且當(dāng)預(yù)先使用LY294002和PD98059處理細(xì)胞1小時,再加入IL-29或IFN-α刺激HepG2.2.15細(xì)胞后,使用Western Blot技術(shù)無法檢測到P-AKT和P-ERK的存在。當(dāng)AKT磷酸化被抑制時,抗病毒蛋白2’, 5’-OAS、MxA和PKR轉(zhuǎn)錄水平的表達也相應(yīng)降低;當(dāng)ERK磷酸化被阻斷時,MxA轉(zhuǎn)錄顯著增強,但是2’, 5’-OAS和PKR的表達卻無明顯變化。 結(jié)論在HepG2.2.15細(xì)胞中IL-29和IFN-α有顯著的抗乙肝病毒作用。在機制研究中我們首次發(fā)現(xiàn)抗病毒蛋白2’, 5’-OAS、MxA和PKR轉(zhuǎn)錄水平的表達和PI3K-AKT信號通路呈正相關(guān);Raf-MEK-ERK信號通路與MxA轉(zhuǎn)錄呈負(fù)相關(guān),但是與2’, 5’-OAS和PKR卻無顯著的關(guān)系。
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R512.62
【部分圖文】：

（圖3）信號通路[9-12]。PI3K-AKT信號通路在細(xì)胞內(nèi)外的信號傳導(dǎo)中起重要作用。它能夠把細(xì)胞外界物質(zhì)（如：生長因子、激素、有絲分裂原和細(xì)胞因子等）的刺激傳遞到細(xì)胞內(nèi)部，從而抑制細(xì)胞凋亡促進生長。LY294002（圖1）是PI3K的特異性抑制劑，它能夠阻斷PI3K下游物質(zhì)的活化，包括AKT的激活[13, 14]。Raf-MEK-ERK信號通路是由Ras、Raf、MEK和ERK組成的信號通路，在細(xì)胞的增殖、分化、轉(zhuǎn)錄調(diào)控中起重要作用。PD98059（圖1）是Raf-MEK-ERK信號通路的特異性抑制劑。它能和MEK1結(jié)合形成沒有活力的MEK1的復(fù)合體，從而選擇性的

中起著關(guān)鍵性作用，包括對MxA、2’,5’-OAS和PKR表達的誘導(dǎo)[4-7]。但是單一的JAK-STAT信號通路是不足以解釋干擾素誘導(dǎo)的所有生物學(xué)效應(yīng)[8]。據(jù)報道，IFNs能夠在一些細(xì)胞中也能夠激活PI3K-AKT (圖2)和Raf-MEK-ERK（圖3）信號通路[9-12]。PI3K-AKT信號通路在細(xì)胞內(nèi)外的信號傳導(dǎo)中起重要作用。它能夠把細(xì)胞外界物質(zhì)（如：生長因子、激素、有絲分裂原和細(xì)胞因子等）的刺激傳遞到細(xì)胞內(nèi)部，從而抑制細(xì)胞凋亡促進生長。LY294002（圖1）是PI3K的特異性抑制劑，它能夠阻斷PI3K下游物質(zhì)的活化，包括AKT的激活[13, 14]。Raf-MEK-ERK信號通路是由Ras、Raf、MEK和ERK組成的信號通路，在細(xì)胞的增殖、分化、轉(zhuǎn)錄調(diào)控中起重要作用。PD98059（圖1）是Raf-MEK-ERK信號通路的特異性抑制劑。它能和MEK1結(jié)合形成沒有活力的MEK1的復(fù)合體，從而選擇性的

11/57圖3、Raf-MEK-ERK信號通路，引至：Cell Signaling Technology, Inc.Fig 3, Raf-MEK-ERK Signal Pathway，Cited from：Cell Signaling Technology, Inc.
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本文編號：2872790