不管是急性肝衰竭還是慢性肝衰竭，尚無哪一種治療方法能夠達(dá)到滿意的療效。人工肝、原位肝移植、肝細(xì)胞移植等治療方法已經(jīng)用于臨床很長時間，但由于種種因素限制了它們的應(yīng)用，如費用高、供體來源缺乏、長期服用免疫抑制劑等。這種狀況迫使人們?nèi)ふ腋鼮橛行Ш徒?jīng)濟(jì)的新方法。 90年代，造血干細(xì)胞的臨床應(yīng)用逐漸開展起來，如地中海性貧血、白血病、實體瘤大劑量化療或／和放療后的造血恢復(fù)。在造血干細(xì)胞的臨床應(yīng)用和研究中，人們發(fā)現(xiàn)骨髓干細(xì)胞具有多向分化潛能，在一定環(huán)境下，可以轉(zhuǎn)化為其它類型的成熟細(xì)胞如神經(jīng)細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞等，人們推測骨髓中的干細(xì)胞可能是一個復(fù)雜的群體，具有不同的分化潛能和方向。 1999年有人報道骨髓造血干細(xì)胞可以轉(zhuǎn)化為肝細(xì)胞。如果能使患者自身骨髓干細(xì)胞增殖和向肝細(xì)胞選擇性分化，我們便可以用自身骨髓干細(xì)胞分化和增殖來替代肝臟功能，同時又能解決異體移植的供體來源缺乏及免疫排斥的問題，具有廣闊的應(yīng)用前景。 有人在骨髓細(xì)胞中分離出一類β_2m~-／Thy-1~+細(xì)胞，具有肝細(xì)胞的一些表型如白蛋白mRNA表達(dá)，并在體外誘導(dǎo)分化，出現(xiàn)新的肝細(xì)胞表型如CAM5.2，因此這類β_2m~-／Thy-1~+細(xì)胞可能是骨髓中的“肝臟干細(xì)胞”，骨髓中肝臟干細(xì)胞還有那些肝細(xì)胞特征，有必要進(jìn)一步研究。 在骨髓細(xì)胞向肝細(xì)胞的轉(zhuǎn)化實驗中，常用射線照射去除受體動物自身骨髓，使供體骨髓細(xì)胞能大量的在受體骨髓腔定居、增殖。在二乙酰 鄭州大學(xué)2002屆博士論文 骨髓細(xì)胞向肝細(xì)胞轉(zhuǎn)化的體內(nèi)外實驗研究 氨基拐（2－AAF）加 CCI。肝損傷模型中，己經(jīng)發(fā)現(xiàn)移植的骨髓細(xì)胞可以 轉(zhuǎn)變?yōu)楦渭?xì)胞和 AFP用 臟前體細(xì)胞，也有人用小劑量的全身照射，證明 在無肝損傷的情況下，也有骨髓細(xì)胞向肝細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。雖然在體內(nèi)研究中， 骨髓細(xì)胞在肝臟中可以轉(zhuǎn)化為肝細(xì)胞，但其機(jī)制尚未闡明，推測細(xì)胞因子和 肝臟局部微環(huán)境起著重要作用。 本研究用3種動物模型進(jìn)行交叉性別骨髓移植，探討在不同條件下， 骨髓細(xì)胞向肝細(xì)胞轉(zhuǎn)化的情況，并分析2－AAF對骨髓細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響。 聯(lián)合雙向聚丙烯酚胺凝膠電泳 Q．PAGE）及質(zhì)譜（MS）進(jìn)行蛋臼 質(zhì)組研究是目前廣泛應(yīng)用的方法，這一技術(shù)可以比較不同的細(xì)胞或組織 蛋白質(zhì)組的差異，對于研究細(xì)胞的分化、腫瘤、衰老具有重要意義。為 此，我們初步在本實驗室建立ZD－PAGE實驗技術(shù)，對2．AAF＋PH（部分 肝切）模型肝切前后的肝組織的總蛋白進(jìn)行分離，并找出肝切前后的差 異蛋白質(zhì)點，希望從中找到促使肝臟干細(xì)胞活化和骨髓干細(xì)胞向肝細(xì)胞 轉(zhuǎn)化的細(xì)胞因子。 材料 禾方法： 本實驗用免疫組化、逆轉(zhuǎn)錄PCR和 Western blot方法，對骨髓細(xì)胞甲胎 蛋自mRNA和蛋白的表達(dá)進(jìn)行分析，以確定骨髓細(xì)胞中肝臟干細(xì)胞標(biāo)志一甲 胎蛋白的表達(dá)情況。用逆轉(zhuǎn)錄PCR、巢式PCR和基因序列測定檢測骨髓細(xì)胞 中白蛋白mKNA表達(dá)情況。 分離大鼠骨髓單個核細(xì)胞，分3組進(jìn)行培養(yǎng)：l）單純培養(yǎng)基對照組，（含 胎牛血清15％人2）大鼠肝損傷血清組（用2－＊AF十＊H肝切模型大鼠肝切后； 血清替代胎牛血清人 3）HGF組＊牛血清 1％，加肝細(xì)胞生長因子 20ng／mL人 用免疫組化、逆轉(zhuǎn)錄 PCR和 Western blot方法，以觀察大鼠肝損傷血清和 HGF 對骨髓細(xì)胞轉(zhuǎn)化的促進(jìn)作用。 將雌性 SD大鼠隨機(jī)分為 3組，每組 15只。l）R＋BMT（全身照射＋ 骨髓移植＼ 2）2－AAF＋R＋BMT；3）2．AAF＋PH＋BMT。2．AAF采用灌胃 法。各組進(jìn)行交叉性別骨髓細(xì)胞移植，將雄性骨髓移植入雌性受體內(nèi)， 以雄性性別訣定基因 sry作為細(xì)胞標(biāo)記，用原位雜交和 FISH作為檢測方 2 鄭州大學(xué)2O02屆博士論文 骨髓細(xì)胞向肝細(xì)胞轉(zhuǎn)化的體內(nèi)外實驗研究 法進(jìn)行骨髓細(xì)胞向肝細(xì)胞轉(zhuǎn)化的分析。 用雌性SD大鼠6只，做2－AAF＋PH模型，進(jìn)行肝切前后肝臟蛋白質(zhì) ZD．PAGE電泳，分析蛋白差異。 結(jié)果顯示： 1．PCR移植效果初步分析可見，R＋BMT組門例中有 10例 PCR陽性； ZAAF＋PH＋BMT組門例中有 7例陽性，ZAAF＋R＋BMT組 10例中有 6例陽性。 2．sry原位雜交染色發(fā)現(xiàn)，第5大各組雌性受體肝索中均未見sry陽性的肝 細(xì)胞。 3．第 10大 R＋BMT組可見一例 Sry陽性的細(xì)胞位于肝細(xì)胞索，F(xiàn)ISH染色可 見這一細(xì)胞白蛋白mKNA陽性。 4．第20天各組PCR陽性各例均可在肝索中檢測到Sry陽性的細(xì)胞。FISH 染色可見白蛋白mRNA陽性。 5．經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析第20大各組Sry陽性細(xì)胞數(shù)無明顯差異（P＞0刀5人 6．AFP兔疫組化染色可見，新鮮骨髓細(xì)胞和單純 IMDM／F培養(yǎng)基組呈陰 性；肝損傷血清組和 HGF組培養(yǎng)后 10． 20天，細(xì)胞爬片 AFP免疫組化 染色陽性。 7．AFP
【學(xué)位單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2002
【中圖分類】：R575.305
【部分圖文】：

圖1一1PCR法Bio一白蛋白探針合成為未標(biāo)記的PCR產(chǎn)物，2、4為標(biāo)記后PCR產(chǎn)物，5A參照;白蛋白標(biāo)記前為463bp。234567SO0bP250bP
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本文編號：2857614