研究背景炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)是病因尚不明確的慢性非特異性炎癥性疾病,包括克羅恩病(Crohn's disease,CD)和潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis,UC)。近年來在亞洲特別是中國的發(fā)病率逐漸增高,眾多證據表明腸道屏障功能在IBD中起重要的作用,抑瘤素M(Oncostatin M,OSM)可增加細胞增殖,修復腸道上皮,并且PGE2可誘導OSM的產生。然而OSM在IBD中的作用,及選擇性COX-2抑制劑是否可調節(jié)OSM的表達并且影響結腸炎的嚴重程度值得進一步的研究。目的建立IBD動物模型,應用選擇性COX-2抑制劑塞來昔布對其進行干預,檢測血清中TNF-α、IFN-γ的水平,行疾病活動指數及組織學損傷指數評分評價疾病炎癥程度,檢測小鼠結腸組織中OSM、COX-2、STAT3和pSTAT3在蛋白水平的表達。探究選擇性COX-2抑制劑對OSM的調節(jié)及OSM在結腸炎中的作用。方法SPF級,6-8周雄性C57BL/6小鼠48只,隨機分為4組。(1)正常對照組:自由進食水,不進行干預。(2)DSS模型組:自由飲用2.5%DSS溶液,共8天,按每只小鼠每天需要5ml的飲水量來配制,每兩日更換一次DSS溶液,自由進食。(3)DSS+塞來昔布組:在自由飲用2.5%DSS溶液基礎上,于第3天開始給予塞來昔布(Celecoxib)15mg/kg/d灌胃。(4)塞來昔布組:自由進食水,于實驗開始第3天給予塞來昔布15mg/kg/d灌胃。每只小鼠每日監(jiān)測體重變化,觀察小鼠大便性狀及是否大便帶血,進行疾病活動度(disease activity index,DAI)評分,于第8天脫頸處死,眼球取血法取血行ELISA檢測TNF-α、IFN-γ水平,取結腸組織做HE染色行組織學損傷指數(Histological index,HI)評分;免疫組織化學法檢測結腸組織中OSM、COX-2的表達;Western Blot檢測腸道組織中OSM、COX-2、STAT3及pSTAT3蛋白的表達。實驗結果用SPSS 22.0統(tǒng)計學軟件分析,數據使用均數±標準差描述,所有數據進行方差齊性分析(Levene),多組數據采用單因素方差分析(ANOVA),方差分析有意義者進行兩兩比較(Bonferroni),P0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。結果各組小鼠結腸炎DAI評分:與正常對照組相比,DSS模型組出現體重下降,腹瀉及血便。DSS+塞來昔布組癥狀較DSS模型組重。DSS模型組高于正常對照組(P0.05),DSS+塞來昔布組高于DSS模型組(P0.05)。塞來昔布組與正常對照組無明顯差異。各組HI評分:與正常對照組相比,DSS模型組結腸粘膜充血水腫,上皮細胞損傷、潰瘍,腺體結構不同程度的消失,隱窩變形、破壞,炎性細胞浸潤。DSS+塞來昔布組鏡下表現較DSS模型組更重。DSS模型組高于正常對照組(P0.05),DSS+塞來昔布組高于DSS模型組(P0.05)。塞來昔布組與正常對照組無明顯差異。ELISA檢測各組血清中TNF-α、IFN-γ的表達:DSS模型組高于正常對照組(P0.05),DSS+塞來昔布組高于DSS模型組(P0.05),塞來昔布組與正常對照組無差異(P0.05)。免疫組織化學檢測腸道組織中OSM、COX-2的表達:DSS模型組高于正常對照組(P0.05),DSS+塞來昔布組低于DSS模型組(P0.05),塞來昔布組與正常對照組無差異。Western Blot檢測腸道組織OSM、COX-2、STAT3和pSTAT3的表達:DSS模型組高于正常對照組(P0.05),DSS+塞來昔布組低于DSS模型組(P0.05),塞來昔布組與正常對照組無差異。結論1.6-8周雄性C57BL/6小鼠給予2.5%DSS溶液可誘導出結腸炎。2.選擇性COX-2抑制劑塞來昔布可抑制結腸組織中OSM的表達,下調STAT3及pSTAT3,加重DSS誘導的結腸炎。3.OSM參與了DSS誘導的小鼠結腸炎的發(fā)病過程。
【學位單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R574.62
【部分圖文】：

各組DAI評分

各組小鼠結腸組織病理改變（HE×200）

各組HI評分注：*：與正常對照組相比，P＜0.05；#：與DSS模型組相比，P＜0.05
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本文編號：2852158