目前全球大約有2億人感染HCV，而丙型肝炎慢性化的比列高達60%-70%，其中5%-20%發(fā)展為纖維化，所以慢性丙型肝炎（chronic hepatitis C，CHC）已經(jīng)成為嚴重威脅人類健康的公共衛(wèi)生問題。有研究發(fā)現(xiàn)，丙型肝炎慢性化的主要成因包括病毒迅速變異導致對機體的免疫逃避，以及人體內(nèi)的淋巴細胞出現(xiàn)功能缺失而不能有效清除病毒。人體內(nèi)淋巴細胞出現(xiàn)功能缺失可能與T細胞凋亡、外周組織耐受和T細胞疲耗等機制有關，也可能與B細胞功能失調(diào)有關。B細胞功能失調(diào)，國外有學者報道認為HCV感染者B淋巴細胞升高，考慮CHC患者長期丙肝病毒抗原刺激，導致B淋巴細胞不斷克隆增殖所致，而在國內(nèi)尚未見有關B淋巴細胞變化報道。國外許多學者認為T細胞（包括HCV特異性效應CD8+T細胞和輔助性CD4+T細胞）功能失調(diào)與PD-1及其配體表達上調(diào)有關。 PD-1,被命名為程序性死亡分子，可在CD4+T細胞、CD8+T細胞、自然殺傷性T細胞（NKT）、B細胞和單核細胞等表面誘導表達。功能分析表明，PD-1的胞質(zhì)功能域包含兩個酪氨酸信號傳遞基序，磷酸化后可與酪氨酸磷酸化酶SHP-2結(jié)合，使下游效應分子如酪氨酸激酶（Syk）和磷脂酰肌醇激酶(PI3K)脫磷酸化，從而調(diào)節(jié)細胞功能。PD-1和相應配體PD-L結(jié)合后，產(chǎn)生一種免疫抑制信號，抑制了CD4+T細胞的免疫調(diào)節(jié)功能及CD8+T細胞的病毒清除功能，使HCV不能被有效的清除，導致丙肝感染的慢性化。慢性丙型肝炎的治療主要以抗病毒為主，其公認的國際標準治療方案是聚乙二醇干擾素(Pegylated interferon,PEG-IFN)聯(lián)合利巴韋林(ribavirin, RBV),主要通過免疫調(diào)節(jié)、增加機體抗病毒免疫功能和直接抑制病毒復制的雙重作用機制，可使治療的持續(xù)應答率由普通干擾素的40%提高至70%左右,但在現(xiàn)有的治療條件下,仍有相當一部分患者對治療無應答或治療后復發(fā)。對于干擾素治療療效的預測一直是近年研究的熱點，目前認為,病毒因素和宿主因素共同影響著干擾素治療的結(jié)局。此外,治療過程中不同的病毒學應答模式對治療效果的預測有著重要價值。對于不同應答模式下T細胞亞群及其表面PD-1的表達、B細胞的變化，目前國內(nèi)相關報道較少。本研究對采用PEG-IFNα-2a聯(lián)合利巴韋林治療的141例慢性丙型肝炎患者中篩選出出現(xiàn)快速病毒學應答20例及無應答患者20例進行了回顧性分析.觀察干擾素治療過程中慢性丙型肝炎患者T細胞亞群及其表面PD-1、B細胞表達水平，探討CHC患者干擾素治療過程中出現(xiàn)快速病毒學應答及無應答患者的機體免疫狀況及其與PD-1的關系。 研究目的 觀察干擾素治療慢性丙型肝炎患者T細胞亞群(CD4T+、CD8T+)及其表面PD-l、B細胞表達水平變化及其臨床意義。 研究方法 受試對象為接受聚乙二醇化干擾素α-2a抗病毒治療的141例慢性丙型肝炎患者中篩選出快速病毒學應答者(RVR)20例，無應答者(NR)20例。并以20例健康體檢者作為正常對照組。采用流式細胞儀分別檢測慢丙肝治療前及治療12周時外周血T細胞亞群及其表面PD-1的表達、B細胞的表達水平；全自動生化分析儀檢測ALT、TBIL水平；采用COBAS AmpliPrep/COBASTaqMan48自動載量儀檢測HCV-RNA載量。 研究結(jié)果 1.與正常對照組比較，慢性丙型肝炎患者CD4+T細胞增高,CD4+T/CD8+T增高,CD19+B細胞增高,CD8+T細胞降低, T細胞亞群(CD4T+、CD8T+)表面PD-1的表達明顯升高，結(jié)果均有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。 2.慢性丙型肝炎患者血清ALT水平、TBIL水平與外周血T細胞亞群(CD4T+、CD8T+)表面PD-1的表達之間，其相關性分析的結(jié)果呈現(xiàn)負數(shù)，但統(tǒng)計學分析其差異無顯著性意義（P0．05）。外周血T細胞亞群(CD4T+、CD8T+)表面PD-1的表達與與HCV-RNA載量無相關性（r=-O．105，0．268，P0．05）。 3.聚乙二醇化干擾素治療慢性丙型肝炎患者12周時，無應答組與快速病毒學應答組患者比較，CD4+T細胞增高，CD4+T/CD8+T增高，CD19+B細胞增高,CD8+T細胞降低，結(jié)果均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01或＜0.05）。無應答組患者T細胞亞群（CD4T+、CD8T+）上表達的PD-1明顯升高，其差異有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。 研究結(jié)論 1.慢性丙型肝炎患者體內(nèi)存在T細胞亞群失衡及B淋巴細胞升高，經(jīng)PEG-IFN治療后，其免疫功能得到一定恢復。 2.PD-1的高表達與HCV持續(xù)感染有關，可能是導致T淋巴細胞應答能力下降的重要原因。 3.PD-1的表達與血清HCV-RNA水平、ALT水平、TBIL水平均無相關性。
【學位單位】：廣州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2014
【中圖分類】：R512.63
【部分圖文】：

表 3.CHC 患者與正常對照組外周血 T、B 細胞比較Table 3.The comparison on the frequency of peripheral blood T cell subsets 、B cells in CHCpatients and control groupGroup Cases CD4+T（%） CD8+T（%） CD4+T/CD8+T CD19+B（%）CHC 40 50.06±3.54 22.89±2.03 2.19±0.16 15.68±2.83Control 20 36.56±3.36 30.59±2.86 1.20±0.07 10.73±2.70t -12.38 9.81 25.80 -5.65P <0.01 <0.01 <0.01 <0.01

圖 2.CHC 患者外周血 CD4+T 細胞和 CD8+T 細胞、CD19+B 細胞表達情況Fig 2. the frequency of peripheral blood T cell subsets、B cells in CHC patients3. CHC 患者與正常對照組外周血 CD4+T 細胞和 CD8+T 細胞表面 PD-1 的表達比較 與正常對照組比較，慢性丙型肝炎患者 CD4+T 細胞及 CD8+T 細胞上表達的PD‐1 明顯升高，具有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01），見表 4、圖 3、圖 4。 表 4. CHC 患者與正常對照組外周血 T 細胞亞群表面 PD-1 表達比較Table 4. The comparison on the PD-1 expression of CD4+and CD8+T cells in CHC patients andcontrol group

圖3.正常對照組外周血T細胞亞群表面PD-1表達Fig 3. The PD-1 expression of CD4+and CD8+T cells in control group
【參考文獻】

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本文編號：2850862