目的:通過(guò)觀察高原低氧環(huán)境下大鼠胃黏膜組織細(xì)胞形態(tài)、凋亡情況以及檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白P53、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9的m RNA及蛋白的表達(dá)水平,揭示細(xì)胞凋亡在不同高原低氧時(shí)間點(diǎn)變化水平及其在高原低氧所致胃黏膜損傷中的作用。方法:選擇50只雄性Wistar大鼠(體重170±10g,平均年齡6-8周齡),按照隨機(jī)分配原則分為平原對(duì)照組(n=10只,西安,海拔500m)與高原低氧組(n=40只,青海省玉樹(shù)市雜多縣,海拔4300m),根據(jù)高原低氧暴露時(shí)間不同又隨機(jī)分為1d、7d、14d、21d,4個(gè)亞組,每組各10只;采集各組大鼠胃黏膜組織,分別用HE染色及透射電鏡觀察胃黏膜組織細(xì)胞形態(tài)變化及凋亡改變情況;采用Real-time PCR法檢測(cè)各組大鼠胃黏膜組織中P53、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9m RNA表達(dá)水平;采用Western blot法檢測(cè)各組大鼠胃黏膜組織中P53、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:(1)HE染色顯微鏡觀察結(jié)果:平原對(duì)照組胃黏膜正常,胃腺結(jié)構(gòu)完整,細(xì)胞排列基本規(guī)則,而高原實(shí)驗(yàn)組大鼠胃黏膜組織隨高原低氧暴露時(shí)間延長(zhǎng),炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)逐漸增多,胃腺周?chē)植砍鲅?胃腺結(jié)構(gòu)破裂,局部細(xì)胞肥大,邊界不清,并且胃黏膜細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞核固縮凋亡;(2)透射電鏡觀察結(jié)果:對(duì)照組胃黏膜細(xì)胞正常,隨著時(shí)間延長(zhǎng),無(wú)特殊表現(xiàn);而實(shí)驗(yàn)組隨著高原低氧環(huán)境暴露時(shí)間延長(zhǎng),細(xì)胞排列紊亂,細(xì)胞核形狀不規(guī)則,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)線粒體腫脹明顯,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)自噬樣結(jié)構(gòu)及被吞噬的凋亡細(xì)胞;(3)Real-time PCR法檢測(cè)結(jié)果:與對(duì)照組比較,實(shí)驗(yàn)組各亞組大鼠胃黏膜組織P53、Caspase-3、Caspase-9 m RNA表達(dá)水平均升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),且隨暴露時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)水平逐漸增加(p0.05),而B(niǎo)cl-2 m RNA表達(dá)水平在低氧1d組升高(p0.05),隨后隨著高原低氧環(huán)境暴露時(shí)間延長(zhǎng),其表達(dá)水平逐漸降低(p0.05)(4)Western blot法結(jié)果:與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組大鼠胃黏膜組織P53、Caspase-3、Caspase-9蛋白表達(dá)水平均升高(p0.05),且隨暴露時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)水平逐漸增加,Bcl-2蛋白表達(dá)水平降低,且隨著暴露時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)水平逐漸降低(p0.05)。結(jié)論:高原低氧可能通過(guò)升高細(xì)胞凋亡水平導(dǎo)致胃黏膜組織細(xì)胞損傷,并且細(xì)胞凋亡水平的升高與高原低氧暴露時(shí)間成正相關(guān)。
【學(xué)位單位】：青海大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R57;R-332
【部分圖文】：

第 3 章 結(jié)果3.1 HE 染色觀察大鼠胃黏膜組織大體形態(tài)結(jié)構(gòu)及凋亡改變情況通過(guò)建立高原低氧環(huán)境（海拔 4300m）暴露下的大鼠胃黏膜組織損傷模型，行 HE 染色后顯微鏡下觀察結(jié)果顯示（如圖 3.1）：對(duì)照組：胃黏膜正常，胃腺結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞排列基本規(guī)則；高原低氧第 1 天：少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，胃腺周?chē)倭砍鲅倭课赶俳Y(jié)構(gòu)破裂；高原低氧第 7 天：大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，胃腺周?chē)植砍鲅�，少量胃腺結(jié)構(gòu)破裂，胃黏膜細(xì)胞出現(xiàn)局灶性嗜酸性變；高原低氧第14 天：大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)， 胃腺周?chē)倭砍鲅�，局部胃腺結(jié)構(gòu)破裂，胃黏膜細(xì)胞肥大并出現(xiàn)局灶性嗜酸性變；高原低氧第 21 天：大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，大量胃腺變形破裂，局部細(xì)胞肥大，細(xì)胞邊界不清，胃黏膜細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞核固縮凋亡。以上可以得出：高原低氧環(huán)境暴露下可致實(shí)驗(yàn)組大鼠胃黏膜損傷，且隨著暴露時(shí)間延長(zhǎng)，損傷逐漸加重，并且可見(jiàn)細(xì)胞核固縮凋亡。

3.3 各組大鼠胃黏膜組織的 P53、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9 的 mRNA表達(dá)水平Real-time PCR 法檢測(cè)各組大鼠胃黏膜組織凋亡相關(guān)蛋白 P53、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9 的 mRNA 表達(dá)水平，結(jié)果顯示（如圖 3.3-3.5，如表 3.1）：與對(duì)照組相比，高原低氧組（1d,7d,14d,21d）大鼠胃黏膜組織凋亡相關(guān)蛋白 P53、Caspase-3、Caspase-9 的 mRNA 表達(dá)水平均增加，且隨著高原低氧暴露的時(shí)間延長(zhǎng)其表達(dá)逐漸增加（均 p>0.05），與 Western blot 法檢測(cè)蛋白表達(dá)水平基本一致，而 Bcl-2 的 mRNA 表達(dá)水平在高原低氧組 1d 升高，隨后其表達(dá)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸降低（p<0.05）。圖 3.2 不同時(shí)間點(diǎn)大鼠胃黏膜組織細(xì)胞電鏡觀察結(jié)果（X30000）

表3.1 各組大鼠胃組織P53、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9的mRNA表達(dá)水平（ x±s,n=10）組別 例數(shù) P53 Bcl-2 Caspase-3 Caspase-9對(duì)照組 10 0.98±0.32 3.39±1.16 1.00±0.23 0.68±0.10低氧 1d 10 1.74±0.13* 4.44±1.22* 2.29±0.58* 1.77±0.39*低氧 7d 10 2.49±0.57*△3.27±1.08△3.35±1.01*△2.98±0.87*△低氧 14d 10 4.06± 1.08*△#2.19±0.74*△#5.17±1.37*△#4.02±1.54*△#低氧 21d 10 5.14± 1.25*△#$1.26±0.33*△#$6.28±1.09*△#$5.71±1.66*△#$F 45.55 15.95 50.80 31.58P ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001注：*：與對(duì)照組比較，p＜0.05;△：與低氧 1d 組比較，p＜0.05; #：與低氧 7d 組比較，p＜0.05；$：與低氧 14d 組比較，p＜0.05.
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本文編號(hào)：2844869