肝纖維化(hepatic fibrosis)是各種致病因子引起慢性肝病，進而發(fā)展為肝硬化的一個動態(tài)過程與共同病理途徑。其主要病理改變是細胞外間質(zhì)(extracellular matrix，ECM)的過度合成與異常沉積，肝星狀細胞(hepatic stellate cells，HSCs)是參與該過程的最重要細胞，它的激活導(dǎo)致自身增殖和膠原合成增加，而肝纖維化恢復(fù)期HSCs凋亡明顯增多。所以，HSCs增殖和凋亡在肝纖維化的形成和逆轉(zhuǎn)過程中起關(guān)鍵作用，被認為是各種肝臟損傷引起肝纖維化的中心環(huán)節(jié)。 HSCs與ECM之間存在著復(fù)雜的相互作用，其相互作用主要經(jīng)整合素(integrin)介導(dǎo)�；A(chǔ)研究表明，整合素與其相應(yīng)配基結(jié)合后，多個粘著斑激酶(focal adhesion kinase，F(xiàn)AK)分子聚集在粘著斑(focaladhesion plaque，F(xiàn)AP)處，使FAK N-端區(qū)的酪氨酸Tyr397磷酸化而被激活。FAK激活后可能激活多條信號途徑，其中比較清楚的是RAS依賴的絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPK)途徑。細胞外信號調(diào)節(jié)激酶_(1／2)(extracellular signal-regulated kinase_1(／2)，ERK_(1／2))是MAPK家族中研究得最為清楚的成員，其通路RAS-RAF-MEK-ERK參與細胞多種功能活動。 迄今為止，ECM成分如纖維粘連蛋白(fibronectin，F(xiàn)N)及整合素在纖維化肝組織與HSCs中的表達及作用已有報道，但整合素活化后的胞內(nèi)信號途徑則知之甚少。為此，我們從HSCs與ECM之間的相互作用著手，以FAK、ERK_(1／2)為切入點，有機結(jié)合整體和離體試驗，研究整合素信號通路在肝纖維化及HSCs增殖、凋亡中的作用。實驗內(nèi)容主要包括以下四部分： 第一部分，F(xiàn)AK、ERK_1在大鼠肝纖維化形成過程中的動態(tài)表達與肝星狀細胞增殖，凋亡 中文摘要 目的：探討FAK、ERK；及其wA在實驗性大鼠肝纖維化形成過程 中的動態(tài)表達及與肝星狀細胞增殖、凋亡的關(guān)系。 方法：采用膽總管結(jié)扎Oile duct ligation，BDL）大鼠肝纖維化模型，將 80只雄性 Spr卿e Dawlcy大鼠隨機分成假手術(shù)組與模型組。模型組分 別于結(jié)扎后Zhr、6hr、Zd、lwk、ZWk、3Wb、4Wb麻醉動物，假手術(shù) 組與4Wb模型組同批麻醉。采用HE染色、Masson三色染色確定模型 建立情況；免疫組織化學(xué)及 RTPCR方法研究 F咂、E皿；及其 InRNA 在肝纖維化不同時期肝組織中的分布及含量的動態(tài)變化；應(yīng)用免疫組 織化學(xué)方法測定aSMA表達；采用TUNEL及。石MA免疫組織化學(xué) 雙重染色方法了解HSCS凋亡情況。 結(jié)果：①隨著肝纖維化發(fā)展，大鼠肝臟中a石MA陽性細胞明顯增多， 主要分布于匯管區(qū)、纖維間隔、肝竇周圍及增生的膽管周圍細胞，造 模l～4wb大鼠肝組織a習(xí)MA的陽性面積（ 2．88％士2石3％，22石5％ 士2．16o，27．45O士l．86％，35．25％士2．34％）均顯著高于正常組（5．88％ 士 l．46％），P＜0．of。②正常肝組織凋亡 HSC siB少，隨肝纖維化程度 加重，凋亡HSCS也增多。③纖維化肝組織中F肌、E皿；陽性細胞明 顯增多，主要分布于匯管區(qū)、纖維間隔及增生的膽管周圍，血管內(nèi)皮 細胞、肝竇周圍細胞中也有分布。ERK；在肝細胞也有表達。H者均與 a－S帆呈顯著正相關(guān)，廠值分別為0．963、0．958，P＜0．05。④正常大 鼠肝組織中有FAK、ERK；基因表達，分別于造模Zd、6hr開始上調(diào)， 造模4Wb表達最多。 結(jié)論：肝纖維化形成過程中HSCs大量活化、增殖，凋亡的HSCS也增 多，凋亡機制參與調(diào)節(jié)HSCs數(shù)量的動態(tài)平衡；肝纖維化形成過程中 FAK、ERKI及其mRNA表達明顯增加，F(xiàn)AK、ERKI表達增加在HSCS 增殖及肝纖維化形成與發(fā)展中起一定作用。 第二部分：槽甘－天冬絲氨臼四聊肝星狀細胞增植、凋亡的影響 目的：探討精－甘－天冬－絲氨酸（RGDS）四肽對纖維粘連蛋白（ibronectin， FN）刺激的HSCs增殖、凋亡及凋亡執(zhí)行者Caspase上表達的影響，為 利用RGDS四肽調(diào)控HSCS增殖與凋亡提供實驗理論依據(jù)。 方法：應(yīng)用體外HSCS培養(yǎng)技術(shù)，采用h－胸腺嗜陡核昔（怕1dR）摻入 法測定HSCs增殖；膜聯(lián)蛋白（AnnexinN）／碘化丙陡矚I）雙標記流式細胞 2 中文摘要 術(shù)團ow cytom吶，F(xiàn)CM卜 TU’NEL、掃描電鏡及透射電鏡等方法測定 HSCS凋亡；采用甲苯胺蘭染色方法測定細胞粘附率；應(yīng)用流式細胞方 法測定Caspase習(xí)蛋白表達。 結(jié)果：①RGDS四肽 25pg·InL”‘、50pg·InL”‘、100ng·InL”’組對 HSCS ’H－TdR摻入結(jié)果與對照組、FN組相比，均顯著下降，Pwto．of，摻人 抑制率分別是16．55％、50．23％、65．33％；100ng·InL”‘濃度組作用 12hr、 24h、48h的摻入抑制率分別是62．73o、74．23o、80．22o。巨RGDS 四肽對HSCs增殖有顯著抑制效應(yīng)，并呈劑量、時間依賴關(guān)系。RGES 四肽對 HSCS’H丁皿摻入無抑制作用。②RGDS四肋對 HSCS凋亡的 誘導(dǎo)作用亦呈劑量和時間依賴關(guān)系：Annexin－Vrpl法檢測，RGDS四肽 干預(yù) 48hr后各組凋亡率分別為 9．49O左7．67
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2002
【中圖分類】：R575.2
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
英文縮寫
研究論文 RGD依賴的整合素信號通路與肝星狀細胞增殖、凋亡及丹參單體干預(yù)研究
    引言
    第一部分 FAK、ERK1在膽總管結(jié)扎大鼠肝纖維化形成過程中的動態(tài)表達與肝星狀細胞增殖、凋亡
        前言
        材料與方法
        結(jié)果
        討論
        小結(jié)
        參考文獻
        附圖、附表
    第二部分 RGDS四肽對肝星狀細胞增殖、凋亡的影響
        前言
        材料與方法
        結(jié)果
        討論
        小結(jié)
        參考文獻
        附圖、附表
    第三部分 RGDS四肽抑制肝星狀細胞活化的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制
        前言
        材料與方法
        結(jié)果
        討論
        小結(jié)
        參考文獻
        附圖、附表
    第四部分 丹參單體IH764-3對肝星狀細胞增殖、凋亡干預(yù)研究
        1 肝硬化患者及膽總管結(jié)扎大鼠脂質(zhì)過氧化水平測定
            前言
            材料與方法
            結(jié)果
            討論
            小結(jié)
            參考文獻
            附圖、附表
        2 丹參單體IH764-3通過抑制脂質(zhì)過氧化逆轉(zhuǎn)肝星狀細胞活化
            前言
            材料與方法
            結(jié)果
            討論
            小結(jié)
            參考文獻
            附圖、附表
2O₂誘導(dǎo)肝星狀細胞活化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響'>        3 丹參單體對H₂O₂誘導(dǎo)肝星狀細胞活化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響
            前言
            材料與方法
            結(jié)果
            討論
            小結(jié)
            參考文獻
            附圖、附表
    結(jié)語
綜述一 整合素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與肝星狀細胞行為
綜述二 氧化應(yīng)激與肝纖維化
致謝
個人簡歷

【引證文獻】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 霍曉霞;黏著斑激酶對肝星狀細胞細胞周期調(diào)控作用的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2006年

本文編號：2834057