目的：1.分離、鑒定小鼠骨髓間充質干細胞；2.建立肝硬化小鼠模型以及去除肝硬化小鼠體內枯否細胞的小鼠動物模型；3.將分離成功的骨髓間充質干細胞移植給實驗小鼠三周后，觀察四組小鼠療效以及肝枯否細胞在體內表型及功能的改變；4.探討枯否細胞是否參與了間充質干細胞改善肝硬化的過程。 方法：1.采用全骨髓貼壁法聯(lián)合體外培養(yǎng)獲得高純度的雄性C57BL/6小鼠的骨髓間充質干細胞。2.通過骨髓間充質干細胞貼壁的特性以及形態(tài)學特征，再結合流式細胞術檢測表面抗原對其進行鑒定。3.采用10%的CCL4溶于橄欖油，腹腔注射給C57BL/6小鼠，每周三次，共10周誘導肝硬化動物模型，并通過其造模期間肝臟的臨床病理表現(xiàn)對其進行鑒定。4.通過磷酸二鈉脂質體剔除肝硬化小鼠體內的枯否細胞，并通過免疫組化觀察剔除的效率。5.骨髓間充質干細胞移植3周后，收集四組小鼠血清，檢測ALB,ALT,AST，觀察肝功的改變。通過肝臟組織HE染色、天狼星紅染色觀察各組小鼠肝臟炎癥以及肝纖維化的改變。通過免疫熒光染色，在共聚焦顯微鏡下觀察體內枯否細胞在體內改變。在通過RT-PCR檢測肝臟組織IL-10，TNF-α,CD-206，Arg-1,iNos,等mRNA的表達。 結果：1.采用全骨髓貼壁法成功獲得了骨髓間充質干細胞，呈典型的長梭型，成纖維樣，放射狀或旋渦狀排列。流式細胞儀檢測證實，CD-29，CD105表達陽性率在85%以上，CD-34，CD-45表達在15%以下。2.CCL4誘導10周后肝臟組織HE染色，天狼猩紅染色證實，肝硬化模型建立成功。3.磷酸脂質體尾靜脈注射后24小時免疫組化證實，剔除枯否細胞的效率達90%以上。4.間充質細胞移植3周后，M組的治療效果明顯好于其他三組，肝纖維化程度，肝臟炎癥，及肝細胞壞死程度都明顯減輕，肝臟功能也得到明顯改善。剔除肝臟枯否細胞的L組和LM組治療效果和對照組C組沒有明顯的差異，甚至肝硬化及肝細胞壞死程度加劇。5.M組小鼠肝臟內CD68（+）枯否細胞的數量明顯低于對照組，而CD206（+）枯否細胞的數量明顯高于對照組。6.TR-PCR結果顯示，M組與對照組C組相比較促炎因子TNF-α明顯降低，抗炎因子IL-10表達升高，M1型枯否細相關的的iNOS mRNA表達降低，M2型枯否細胞相關Arg-1,CD-206的mRNA的表達明顯升高。 結論：1.成功建立了肝硬化小鼠模型，并證實間充質干細胞可改善CCL4誘導的肝硬化小鼠肝功及纖維化程度。2.肝臟枯否細胞參與了間充質干細胞治療肝硬化的過程。3.間充質干細胞可能通過誘導M2型肝臟枯否細胞的激活參與了治療肝硬化的過程。
【學位單位】：延安大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2013
【中圖分類】：R575.2
【部分圖文】：

  G. CCL48W HE 染色（100X）           H. CCL48W 天狼星紅染色（100X）圖 3-1：肝硬化動物模型建立過程中小鼠的肝臟組織病理學改變（HE 及天狼星紅）3.2 肝硬化的小鼠去除肝臟內的 KC取四氯化碳造模成功的小鼠剔除 KCs24h 后,免疫組化證實生理鹽水水對照組21

          L 組 3w LM 組 3w    圖 3-3 四組小鼠肝臟組織病理變化 HE 染色（100x）        C 組 3w M 組 3w

             L 組 3w LM 組 3w    圖 3-3 四組小鼠肝臟組織病理變化 HE 染色（100x）

【參考文獻】

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本文編號：2816274