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硫酸類肝素3氧磺基轉(zhuǎn)移酶B1抑制HBV復(fù)制的實驗研究

發(fā)布時間:2020-08-21 06:39
【摘要】:乙型肝炎病毒(HBV)感染呈世界范圍廣泛流行,是危害人民健康和造成國民經(jīng)濟損失最嚴重的疾病之一。乙型肝炎發(fā)病機理尚未完全闡明,雖臨床抗病毒治療取得一定進展,但由于病毒變異快,臨床耐藥較為普遍,乙型肝炎的抗病毒治療任重道遠。本研究利用表達譜芯片比較了乙型肝炎病毒感染細胞(HepG2.2.15)與未感染母本細胞(HepG2)中基因表達差異,兩種細胞中共有1305個基因表達差異在2倍以上。這些差異表達基因主要參與細胞生理功能、生化反應(yīng)、另有部分基因具有催化活性,參與酶促反應(yīng)。根據(jù)芯片結(jié)果,從差異表達基因中選取29條與感染及炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答、細胞功能相關(guān)基因作為候選基因,通過RT-PCR檢測其在HepG2.2.15與HepG2細胞中RNA水平變化,在證實芯片可靠性同時關(guān)注感興趣基因表達差異。從29條候選基因中最終選擇肝細胞特異性硫酸類肝素3氧磺基轉(zhuǎn)移酶(HS3ST3B1)作為研究對象,進一步研究其在HBV生活周期中的作用。在復(fù)制水平研究中,利用HS3ST3B1真核表達載體轉(zhuǎn)染HBV穩(wěn)定復(fù)制細胞HepGH7 96h后HBV復(fù)制受到明顯抑制,該抑制作用呈劑量依賴性。在瞬時表達模型中,當(dāng)利用RNA干擾技術(shù)抑制外源性HS3ST3B1表達后,HBV復(fù)制得到恢復(fù)。應(yīng)用定點突變技術(shù)突變HS3ST3B1關(guān)鍵位點后,HS3ST3B1對HBV復(fù)制的抑制作用喪失。通過兩種不同HBV感染模型證實HS3ST3B1能夠特異性抑制HBV復(fù)制。在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平的研究同樣發(fā)現(xiàn)HS3ST3B1導(dǎo)致HBV表面蛋白及核心蛋白表達下調(diào)、總RNA水平抑制,利用雙熒光素酶報告對HBV不同啟動子活性進行發(fā)現(xiàn)HS3ST3B1并未對HBV 4種啟動子產(chǎn)生影響,提示HBV對轉(zhuǎn)錄及翻譯水平的抑制可能發(fā)生在轉(zhuǎn)錄后水平。綜上,本研究以表達譜芯片研究為基礎(chǔ),通過實驗分析驗證,發(fā)現(xiàn)一種新的HBV抑制因子HS3ST3B1,細胞研究發(fā)現(xiàn)HS3ST3B1對HBV復(fù)制具有強烈而特異的抑制作用。HS3ST3B1這一特點使其有望作為一種新興的抗病毒藥物應(yīng)用于臨床。
【學(xué)位授予單位】:重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2010
【分類號】:R512.62
【圖文】:

基因芯片,細胞系,磺基轉(zhuǎn)移酶,硫酸類肝素


后用于雜交分析。在實驗過程中通過設(shè)定 OligoB2、Poly-A Controlybridization Controls 陽性對照、比較看家基因信號值及 3’/5’、平均背景值與值比值、Present Percent(P call %)數(shù)值判定芯片檢測是否合格。本研究最片結(jié)果如下:張禎禎:硫酸類肝素3氧磺基轉(zhuǎn)移酶B1抑制HBV復(fù)制的實驗研究

條基,表達水平,全文數(shù)據(jù)庫,博士學(xué)位論文


情況進行 RT-PCR 驗證發(fā)現(xiàn):在 29 條檢測基因中,有 24 條檢測基因與芯片表達相一致,假陽性率為 17.2%。(圖 1-2)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 2011年 第12期 醫(yī)藥衛(wèi)生科技輯 E0

病原體,宿主,疾病發(fā)生,芯片


圖 1-6:HS3ST3B1 在 HepG2.2.15 及 HepG2 中 mRNA 及蛋白表達水平分析。左圖為HS3ST3B1 mRNA 水平分析,右圖為蛋白水平分析Fig 1-6: mRNA and protein level analysis of HS3ST3B1 between HepG2.2.15 and HepG2. Leftpanel: HS3ST3B1 mRNA change in 2 cell lines; Right panel: protein differentiation ofHS3ST3B1 in 2 cells.3.討論在疾病發(fā)生過程中,宿主與病原體之間的博弈決定病情轉(zhuǎn)歸,了解宿主-病原體相互作用有助于認識疾病發(fā)生機理,同時也為疾病的治療提供幫助。高通量芯片技術(shù)的推廣應(yīng)用,加速了宿主-病原體相互作用的研究。從最初的表達譜芯片開始,到近年來廣泛應(yīng)用的蛋白芯片、甲基化芯片、microRNA 芯片,這些芯片的應(yīng)用極大便利了對宿主細胞轉(zhuǎn)錄、表達、以及轉(zhuǎn)錄表達調(diào)控水平的研究。生物信息學(xué)及系統(tǒng)生物學(xué)將芯片所得結(jié)果進行歸納處理,得到與疾病相關(guān)的基因和基

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 ;MicroRNA: Biological and Computational Perspective[J];Genomics Proteomics & Bioinformatics;2005年02期

2 ;Targeted ribonuclease can inhibit replication of hepatitis B virus[J];World Journal of Gastroenterology;2003年02期



本文編號:2799054

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