【摘要】：目的:乙型肝炎病毒(HBV)的復制中間體共價閉合環(huán)狀DNA(cccDNA),與組蛋白和非組蛋白結合構成了病毒微染色體,而病毒微染色體重塑,如乙�；冉M蛋白翻譯后修飾對HBV復制起著重要的調控作用。我們的研究是為了進一步明確在有HBV復制的HepG2細胞中,cccDNA結1合組蛋白H3除發(fā)生了乙�；揎椡�,是否還發(fā)生了其他和HBV復制相關的微染色體重塑情況。 方法:在成功構建了HBV細胞復制模型的基礎上,我們將染色質免疫共沉淀(ChIP)技術和實時定量PCR相結合,檢測了瞬時轉染線性HBV DNA到HepG2細胞后不同時間點的cccDNA結合乙酰化組蛋白H3,磷酸化組蛋白H3和甲基化組蛋白H3的動態(tài)變化情況。 結果:在有HBV復制的HepG2細胞中,cccDNA結合組蛋白H3不僅發(fā)生了乙酰化修飾,同時還發(fā)生了磷酸化和單甲基化修飾。并且,在轉染了線性HBV DNA后不同時間點的cccDNA結合組蛋白H3的乙酰化和甲基化修飾的動態(tài)變化和HepG2細胞中HBV復制的動態(tài)變化是相平行的。 結論:我們的結果證實了和HBV復制相關的微染色體重塑不僅有組蛋白H3乙�；揎�,還有磷酸化和單甲基化修飾,且cccDNA結合組蛋白H3乙酰化,磷酸化和單甲基化的狀態(tài)和HBV的復制水平有一定的關系,這為我們在染色質重塑水平調控HBV復制,制定有效的抗病毒方法提供了新的思路和靶點。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R512.62
【圖文】：

1 2 3切(3200bp,2600bp) 2.HindIII 單酶切(58V1.0 digested by HindIII and SapI Lane 3.λ-EcoT14 digest DNA marker復制模型染 HepG2 細胞切酶將重組質粒 pUC19-HBV1.0 單酶NA（圖 2），并將其膠回收純化。

18圖 3.轉染 24 小時后熒光顯微鏡下綠色熒光蛋白的表達ression of GFP after 24 h post-transfection under a fluern blot 及 Southern blot 分析 HBV DNA 轉染 HepG2 細胞 48h 后，用 Southern b細胞中提取的胞漿 HBV DNA，胞核 DNA 和總 RN：開放環(huán)狀 HBV DNA(OC DNA),雙鏈 DNA（DS DNA圖 4.A），cccDNA（圖 4.B），以及特異性轉錄子：3.5

圖4.A.提取轉染后48h的細胞胞漿DNA進行Southern blot B.提取轉染后48h的NA 進行 Southern blot C.提取轉染后 48h 的細胞總 RNA 進行 Northern blotFig4.A.Southern blot analysis of cytoplasmic HBV DNA extracted from cells a-transfection B.Southern blot analysis of nuclear cccDNA extracted from cpost-transfection C.Northern blot analysis of total RNA at 48h post-tran2.2.3 細胞培養(yǎng)上清中病毒標志物的動態(tài)變化線性 HBV DNA 轉染 HepG2 細胞 12h 后，同陰性對照相比，即可在上清中檢測到 HBV DNA 復制產生的病毒標志物 HBsAg，HBeAg。在轉HBsAg 和 HBeAg 的分泌顯著增加(P<0.05)，到轉染 72h 后病毒標志物仍達，結果如表 1 所示。表 1.轉染后各時間點細胞培養(yǎng)上清液中病毒標志物水平(x±s)Table1.The levels of viral markers in cell culture supernatants at different tiansfection(x±s)轉染時間 12h 24h 48h

【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 ;Effects of cell cycle on telomerase activity and on hepatitis B virus replication in HepG_22.2.15 cells[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2004年04期

本文編號：2788750