【摘要】：NF-κB信號(hào)通路廣泛參與了多種生物學(xué)過程的調(diào)控，包括細(xì)胞增殖、存活、凋亡、免疫反應(yīng)、炎癥等，該信號(hào)通路的異�；罨蓪�(dǎo)致多種疾病。角蛋白CK8是中間纖維的組成成分，其過表達(dá)與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)。前期我們發(fā)現(xiàn)CK8可抑制TNF誘導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路的活化，提示CK8是NF-κB通路的負(fù)調(diào)因子。本研究對(duì)CK8在負(fù)調(diào)控NF-κB通路中的作用及分子機(jī)制進(jìn)行了深入研究，并探討其負(fù)調(diào)NF-κB通路所介導(dǎo)的生理病理學(xué)意義。 本文首先引進(jìn)了CK8-/-小鼠，并對(duì)其基因型及表達(dá)進(jìn)行了鑒定。發(fā)現(xiàn)敲除CK8可導(dǎo)致小鼠發(fā)生嚴(yán)重的結(jié)腸炎伴隨結(jié)腸增生，同時(shí)多臟器出現(xiàn)炎細(xì)胞浸潤。同時(shí)，我們進(jìn)一步利用CK8敲除小鼠從體內(nèi)水平驗(yàn)證了CK8對(duì)NF-B通路的負(fù)調(diào)控作用。利用AOM+DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸癌模型，評(píng)價(jià)了CK8敲低小鼠在結(jié)腸癌發(fā)生中的作用，結(jié)果表明CK8敲低對(duì)誘導(dǎo)劑更加敏感，腸系膜淋巴結(jié)中CD4+CD69+T細(xì)胞比例明顯增多，提示CK8敲除可能在結(jié)腸癌發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用。 我們進(jìn)一步對(duì)CK8負(fù)調(diào)控NF-κB信號(hào)通路的作用機(jī)制進(jìn)行了深入研究。利用堿性磷酸酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)發(fā)現(xiàn)CK8可以劑量依賴的方式抑制TNF誘導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路活化；CK8過表達(dá)可抑制TNF誘導(dǎo)的IκB磷酸化的影響；EMSA實(shí)驗(yàn)證實(shí)CK8可降低NF-B的DNA結(jié)合能力；Realtime PCR實(shí)驗(yàn)證實(shí)過表達(dá)CK8抑制NF-κB下游靶基因如IL-1的表達(dá)。此外，還發(fā)現(xiàn)CK8對(duì)Toll樣受體5（TLR5）的激動(dòng)劑鞭毛蛋白CLB502誘導(dǎo)的NF-κB活化也有明顯的抑制作用，并具有劑量依賴效應(yīng)；進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)CK8對(duì)NF-κB通路的抑制作用發(fā)生在IKK復(fù)合體水平。我們還發(fā)現(xiàn)CK8可通過調(diào)控E3泛素連接酶對(duì)NEMO的泛素化修飾，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)NF-κB的負(fù)調(diào)控作用。 為進(jìn)一步探討CK8負(fù)調(diào)控NF-κB通路的作用機(jī)制，構(gòu)建了人CK8RNAi慢病毒載體，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。為驗(yàn)證CK8敲除小鼠表型的特異性，我們還進(jìn)一步制備了小鼠CK8過表達(dá)慢病毒。 綜上，本研究明確了細(xì)胞角蛋白CK8對(duì)NF-κB信號(hào)通路的負(fù)調(diào)控作用，揭示CK8抑制TRAF2與NEMO之間相互作用可能是其發(fā)揮作用的重要機(jī)制，同時(shí)發(fā)現(xiàn)CK8缺失可導(dǎo)致小鼠體內(nèi)NF-κB信號(hào)通路異�；罨�，小鼠自發(fā)發(fā)生結(jié)腸炎伴隨結(jié)腸增生。
【學(xué)位授予單位】：天津大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R574.62

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2777034