發(fā)布時(shí)間：2020-07-31 19:04

【摘要】：目的選擇軟脂酸建立體外NAFLD脂肪變性肝細(xì)胞模型,動(dòng)態(tài)觀察脂肪變性肝細(xì)胞凋亡及線(xiàn)粒體促凋亡蛋白Smac/DIABLO的表達(dá)情況；并以還原性谷胱甘肽作為干預(yù)因素,探討其對(duì)NAFLD肝細(xì)胞凋亡的影響及可能的機(jī)制。 方法 1、選用軟脂酸誘導(dǎo)L02細(xì)胞建立體外NAFLD肝細(xì)胞脂肪變性模型,實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組和軟脂酸模型組,設(shè)24、48、72小時(shí)3個(gè)時(shí)間點(diǎn),油紅0染色觀察細(xì)胞內(nèi)脂肪變性情況,Annexin/PI結(jié)合流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率,免疫細(xì)胞化學(xué)法測(cè)定Smac/DIABLO蛋白的表達(dá)。 2、根據(jù)第一部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇軟脂酸誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡中凋亡率(?)PSmac/DIABLO表達(dá)最明顯的時(shí)間點(diǎn)作為干預(yù)時(shí)間,MTT法確定還原性谷胱甘肽最適濃度范圍,實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組、軟脂酸模型組及還原型谷胱甘肽(低、中、高濃度)干預(yù)組,采用上述方法觀察各組凋亡率及Smac/DIABLO蛋白的表達(dá)。 結(jié)果 1、(1)用軟脂酸誘導(dǎo)L02肝細(xì)胞脂肪變性成功建立NAFLD體外細(xì)胞模型。油紅0染色顯示,軟脂酸孵育24小時(shí)即見(jiàn)肝細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)橘紅色的脂滴,隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng),脂滴逐漸增多甚至互相融合。 (2)軟脂酸模型組的細(xì)胞凋亡率隨誘導(dǎo)時(shí)間延長(zhǎng)呈明顯的上升趨勢(shì),24、48、72h組與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 (3)免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示正常對(duì)照組肝細(xì)胞在48、72h時(shí)有個(gè)別細(xì)胞出現(xiàn)Smac/DIABLO表達(dá),呈弱陽(yáng)性；軟脂酸模型組Smac/DIABLO陽(yáng)性率隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增強(qiáng),與正常對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。 2、(1)MTT的結(jié)果顯示不同濃度GSH對(duì)L02細(xì)胞產(chǎn)生不同影響。當(dāng)GSH濃度≤20μmol/L時(shí),細(xì)胞存活率在80%以上；而當(dāng)GSH濃度≥40μmol/L時(shí),細(xì)胞存活率明顯下降,表現(xiàn)出明顯的抑制效應(yīng)。故選擇GSH5、10、20μmol/L作為適宜的后續(xù)濃度。 (2)給予GSH干預(yù)后發(fā)現(xiàn),GSH(低、中、高)濃度組能均減少細(xì)胞凋亡率和Smac/DIABLO的表達(dá),與軟脂酸模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),并且隨著濃度增加其保護(hù)作用越明顯。 結(jié)論 1、軟脂酸可成功誘導(dǎo)L02肝細(xì)胞脂肪變性,建立體外NAFLD細(xì)胞模型。 2、線(xiàn)粒體促凋亡蛋白Smac/DIABLO可能參與了軟脂酸誘導(dǎo)的體外NAFLD肝細(xì)胞凋亡； 3、還原性谷胱甘肽可能通過(guò)下調(diào)Smac/DIABLO蛋白的表達(dá),抑制細(xì)胞凋亡發(fā)生。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R575.5

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 徐正婕;范建高;王興鵬;王國(guó)良;;軟脂酸、油酸和極低密度脂蛋白對(duì)巨噬細(xì)胞內(nèi)毒素敏感性的影響[J];肝臟;2005年04期

2 周宇清;曹仁賢;文芳;謝翠松;;軟脂酸對(duì)胰島細(xì)胞凋亡作用及機(jī)制的研究[J];海南醫(yī)學(xué);2008年09期

3 吳廣智;朱春雷;崔樹(shù)森;;軟脂酸對(duì)阿霉素誘導(dǎo)的原代MEF細(xì)胞DNA損傷反應(yīng)的調(diào)節(jié)[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2009年02期

4 江海龍;梁春;任雨笙;姜其均;吳建祥;吳宗貴;;通心絡(luò)下調(diào)caspase-3蛋白表達(dá)及活性抑制軟脂酸誘導(dǎo)的人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞凋亡[J];心臟雜志;2010年01期

5 惠曉麗;王惠芳;劉驚濤;劉靖芳;徐利;;游離脂肪酸對(duì)大鼠胰島細(xì)胞體外分泌功能的影響[J];西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年02期

6 姜蘇原;李小英;寧光;王衛(wèi)慶;;胰高血糖素樣肽-1抑制軟脂酸誘導(dǎo)的MIN6細(xì)胞凋亡[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年10期

7 王錦軍;黃兆文;;低熔點(diǎn)皂素中雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)研究[J];西北藥學(xué)雜志;2008年05期

8 張林;多發(fā)性肝轉(zhuǎn)移？一例誤診報(bào)告[J];放射學(xué)實(shí)踐;1995年04期

9 唐湘霞;;腦病內(nèi)臟脂肪變性綜合征1例[J];廣東醫(yī)學(xué);1996年07期

10 石銘,許琳婧,韓博;病毒性乙型肝炎肝組織脂肪變性的相關(guān)因素分析[J];臨床肝膽病雜志;2005年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 張永勝;;小針刀治療脂肪變性增生奇效一例[A];第四屆全國(guó)針刀醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)交流大會(huì)論文集[C];1996年

2 楊林輝;陳東風(fēng);;油酸誘導(dǎo)培養(yǎng)肝細(xì)胞脂肪變性模型的建立[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下冊(cè)）[C];2007年

3 江遠(yuǎn);張玲;何金洋;郭興伯;;鐵超載和脂肪堆積在二甲基亞硝胺誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化中的組織病理學(xué)變化[A];全國(guó)第2屆中西醫(yī)結(jié)合傳染病學(xué)術(shù)會(huì)議暨國(guó)家中醫(yī)藥管理局第1屆傳染病協(xié)作組會(huì)議論文匯編[C];2008年

4 胡義揚(yáng);何東儀;劉平;劉成;薛惠明;熊衛(wèi)國(guó);李風(fēng)華;;健脾活血方對(duì)CCl_4高脂低蛋白誘導(dǎo)大鼠肝脂肪變性的影響[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)第十二次全國(guó)消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2000年

5 馬良坤;羅戀梅;楊劍秋;;妊娠期急性脂肪肝的臨床診斷與治療[A];2007年中華醫(yī)學(xué)會(huì)—強(qiáng)生西部學(xué)術(shù)講座全國(guó)產(chǎn)科危重癥學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2007年

6 闕冰玲;宋向榮;蔡婷峰;鄧瑩玉;葛怡琛;李來(lái)玉;唐小江;;豚鼠三氯乙烯中毒性肝損傷的作用劑量研究[A];中國(guó)毒理學(xué)會(huì)第二屆全國(guó)中青年學(xué)者科技論壇會(huì)議論文集[C];2007年

7 劉小鶯;劉禮斌;;軟脂酸對(duì)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡及PTEN的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第12次全國(guó)內(nèi)科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

8 鄭樹(shù)森;徐驍;高峰;謝海洋;周琳;;脂肪變性供肝的臨床應(yīng)用體會(huì)[A];2007年浙江省外科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

9 王光麗;周小輝;傅玉才;;白藜蘆醇改善肝細(xì)胞脂肪變性的相關(guān)調(diào)節(jié)機(jī)制[A];第十八次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

10 薛璐;王曉琳;薛瑩;曹亞南;寧光;;MEN1基因在肝臟脂質(zhì)代謝及脂肪變性中作用的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 成都 代廷榮;急性肝脂肪變性腦病蠻兇險(xiǎn)[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2003年

2 王紅霞;節(jié)后趕快給肝臟“瘦身”[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2009年

3 副主任醫(yī)師 陳繼英;多管齊下治療脂肪肝[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2009年

4 李欣欣 宋艷翎 馬中蘇 畢會(huì)敏 姜燕;脂質(zhì)——馬鈴薯淀粉基可食薄膜的研究[N];中國(guó)包裝報(bào);2005年

5 余微;美味營(yíng)養(yǎng)炒出來(lái)[N];保健時(shí)報(bào);2003年

6 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院 鐘麗華　(副教授);脂肪肝需要服藥治療嗎[N];家庭醫(yī)生報(bào);2009年

7 吳玉華;專(zhuān)家提醒早期治療最重要[N];保健時(shí)報(bào);2009年

8 主任醫(yī)師 王文生;肝硬化愛(ài)找?guī)最?lèi)人[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2009年

9 鄧紹基;雞疏螺旋體病的診療[N];中國(guó)畜牧報(bào);2003年

10 王順年 吳新榮;藥物中毒救治要點(diǎn)全蝎[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 劉江;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與細(xì)胞脂肪變性的研究[D];浙江大學(xué);2010年

2 王艷;HepG2.2.15細(xì)胞脂肪變性對(duì)HBV基因表達(dá)及SOCS-3和SREBP-1c通路的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

3 梅玫;炎癥導(dǎo)致異位脂肪沉積的分子機(jī)制[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

4 葉晟;脂肪變性供肝肝移植的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2002年

5 吳鴻;蛋白酪氨酸磷酸酶1B對(duì)β細(xì)胞胰島素分泌功能及其胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2009年

6 侯率;不同代謝狀態(tài)對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子mRNA及蛋白表達(dá)的影響[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2006年

7 時(shí)慧琦;軟脂酸致H9c2心肌細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2009年

8 王春梅;黃連素對(duì)2型糖尿病血管內(nèi)皮功能障礙的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2010年

9 趙家偉;慢性高軟脂酸、高胰島素、高糖對(duì)HIT-T15細(xì)胞PKB蘇氨酸磷酸化及胰島素基因表達(dá)的影響：脂、糖毒性致β細(xì)胞胰島素抵抗初探[D];四川大學(xué);2004年

10 江海龍;軟脂酸促內(nèi)皮祖細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陳露;還原性谷胱甘肽對(duì)LO2細(xì)胞脂肪變性中凋亡的影響[D];中南大學(xué);2012年

2 王春暉;軟脂酸對(duì)酒精體外誘導(dǎo)的脂肪變性肝細(xì)胞的影響[D];中南大學(xué);2011年

3 王立娟;UCP-2在軟脂酸誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞胰島素抵抗中的作用及機(jī)制探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

4 郭亞菊;不同濃度軟脂酸對(duì)INS-1細(xì)胞功能與凋亡的動(dòng)態(tài)影響及SREBP-1c基因的變化[D];中南大學(xué);2010年

5 任卓;二甲雙胍對(duì)脂肪變性成肌細(xì)胞甘油三酯含量的影響[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2010年

6 張耀鈞;嚴(yán)重?zé)齻笫蟾闻K脂肪變性及早期液體復(fù)蘇的干預(yù)作用研究[D];江西醫(yī)學(xué)院;2005年

7 周宇清;軟脂酸對(duì)胰島細(xì)胞凋亡及機(jī)制的研究[D];南華大學(xué);2005年

8 黎瑤;吡格列酮對(duì)軟脂酸誘導(dǎo)的HIT-T15細(xì)胞線(xiàn)粒體結(jié)構(gòu)及功能的改變的影響[D];四川大學(xué);2005年

9 黃安中;肝臟脂肪變性對(duì)肝切除術(shù)圍手術(shù)期并發(fā)癥的影響[D];復(fù)旦大學(xué);2008年

10 費(fèi)洪強(qiáng);P38在軟脂酸誘導(dǎo)胰島β細(xì)胞凋亡中的作用[D];上海交通大學(xué);2008年

本文編號(hào)：2776880