原發(fā)性膽汁性肝硬化患者外周血T細胞microRNA表達譜及其調(diào)控機制的研究

發(fā)布時間：2020-07-30 19:08

【摘要】： 本研究旨在探討原發(fā)性膽汁性肝硬化中T細胞microRNA(miRNA)表達譜及其調(diào)控機制。首先采用芯片和定量PCR技術(shù)分析并驗證原發(fā)性膽汁性肝硬化中T細胞miRNA的表達譜;然后培養(yǎng)自身抗原PDC-E2特異性T細胞,研究特定miRNA對其自身反應(yīng)性的調(diào)控作用;接著建立原發(fā)性膽汁性肝硬化小鼠模型,研究特定miRNA對小鼠PBC樣病變的調(diào)控作用;最后通過生物信息學(xué)預(yù)測和生物學(xué)實驗驗證,探討特定miRNA可能的靶基因及其作用位點。結(jié)果表明,與正常對照組相比,PBC患者T細胞中有23個miRNA低表達,僅有2個miRNA高表達;miR-1et-7b、miR-17-5p、miR-20a和miR-346表達可抑制自身抗原特異性T細胞增殖和IFN-γ、TNF-α的分泌,而miR-129和miR-451可促進細胞增殖和IFN-γ、TNF-α的分泌;在小鼠中輸入Ad-miR-17-5p或Ad-miR-346可延緩由poly I:C誘發(fā)產(chǎn)生的PBC樣病變;miR-17-5p、miR-346的靶基因分別為TNFRSF21、BCL-6,作用位點分別為TNFRSF21 3'UTR區(qū)335-342位和BCL-63'UTR區(qū)576-583及893-900位。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R575.2
【圖文】：

示意圖,流式細胞術(shù),T細胞,細胞

A.分離后T細胞;B.分離洗脫液中T細胞PBMC經(jīng)過磁珠分離得到的CD3+T細胞，經(jīng)流式細胞儀檢測純度達到96.3%。如圖1一1所示，經(jīng)磁珠分離后T細胞純度達到963%，分離洗脫液中T細胞僅占0.3%，經(jīng)磁珠分離所得到的T細胞完全符合后續(xù)的實驗要求。 3.2RNA的純度與濃度

完整性,瓊脂糖凝膠電泳,格標,瓊脂糖凝膠