發(fā)布時(shí)間：2020-07-19 18:08

【摘要】：隨著非酒精性脂肪肝病(NAFLD)發(fā)病率逐年上升,已成為21世紀(jì)全球重要的公共健康問(wèn)題之一,探究其病理機(jī)制和發(fā)掘潛在治療靶點(diǎn)是目前相關(guān)研究的重心。金屬離子在細(xì)胞功能、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和能量代謝中起到重要作用,參與多種生理活動(dòng)和疾病發(fā)展,是許多脂代謝關(guān)鍵酶的輔基,但它們?cè)贜AFLD脂代謝中的調(diào)控作用并不完全清楚。三價(jià)鉻離子是哺乳動(dòng)物必需微量元素之一,在維持血糖平衡和脂質(zhì)代謝中起著重要作用,廣泛應(yīng)用于保健品、飼料添加劑和醫(yī)藥行業(yè)。有報(bào)道其對(duì)預(yù)防和緩解NAFLD有潛在作用,但分子機(jī)制仍不清晰。首先選取SMMC-7721細(xì)胞和BALB/c小鼠作為研究對(duì)象,用油酸(OA)作為單一外源脂肪酸誘導(dǎo)構(gòu)建NAFLD細(xì)胞模型和小鼠模型,并對(duì)NAFLD模型補(bǔ)充三價(jià)鉻離子。結(jié)果顯示三價(jià)鉻離子可以有效改善NAFLD性狀。三價(jià)鉻離子可以有效降低肝細(xì)胞和肝臟內(nèi)甘油三酯和脂肪酸的過(guò)量累積,降低肝重、體重和轉(zhuǎn)氨酶ALT、AST含量,降低CD36和DGAT2的過(guò)表達(dá),同時(shí)穩(wěn)定小鼠血清中紊亂的炎癥因子。在和DGAT2抑制劑、激動(dòng)劑聯(lián)合作用時(shí),三價(jià)鉻離子依然對(duì)DGAT2的表達(dá)水平起負(fù)調(diào)控效應(yīng),抑制甘油三酯的合成,說(shuō)明DGAT2可能是三價(jià)鉻離子參與NAFLD脂代謝調(diào)控的重要靶分子。對(duì)OA誘導(dǎo)的NAFLD細(xì)胞模型和小鼠模型進(jìn)行金屬組分析發(fā)現(xiàn),脂變性的同時(shí)均伴隨著鎂缺乏,外源補(bǔ)充鎂離子NAFLD脂代謝紊亂能否得到改善有待證實(shí)。鎂離子是人體內(nèi)第二大陽(yáng)離子,作為輔酶因子參與細(xì)胞內(nèi)600多種酶系統(tǒng),在能量代謝、細(xì)胞增殖和神經(jīng)傳導(dǎo)中有著重要作用,而鎂缺乏會(huì)造成痙攣、抑郁、高血脂和肥胖等疾病。本文結(jié)果顯示補(bǔ)充鎂離子可以有效緩解NAFLD模型的脂變性:通過(guò)油紅O染色、TLC和GCMS等方法檢測(cè)脂類(lèi)變化發(fā)現(xiàn)外源鎂離子可以緩解NAFLD模型中甘油三酯以及脂肪酸的過(guò)量累積;且外源鎂離子可以抑制NAFLD小鼠血清中過(guò)高的轉(zhuǎn)氨酶ALT和AST;進(jìn)一步通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot分析相關(guān)脂代謝基因發(fā)現(xiàn)外源鎂離子可以降低OA引起的CD36和DGAT2過(guò)量表達(dá),推測(cè)鎂離子通過(guò)降低脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白CD36表達(dá)來(lái)降低肝臟攝取OA,同時(shí)通過(guò)降低甘油三酯合成限速酶DGAT2表達(dá)來(lái)降低肝臟內(nèi)甘油三酯合成。已有研究發(fā)現(xiàn)炎癥因子紊亂可以導(dǎo)致并加重NAFLD發(fā)病程度,促炎因子和抗炎因子之間的平衡,可能決定了 NAFLD的進(jìn)展,本文通過(guò)ELISA分析NAFLD小鼠血清炎癥因子變化,結(jié)果顯示鎂離子可以降低促炎因子(IL-1β、TNF-α和IL-12)含量并升高抗炎因子(IL-10)含量,改善NAFLD小鼠炎癥反應(yīng)。此外,用ICP-AES檢測(cè)NAFLD細(xì)胞和小鼠模型金屬組,結(jié)果顯示外源鎂離子可以有效緩解NAFLD模型鐵負(fù)載癥狀,說(shuō)明鎂離子可以通過(guò)改善鐵負(fù)載進(jìn)而起到改善NAFLD的性狀。鎂離子對(duì)NAFLD緩解作用機(jī)制研究表明,外源OA下調(diào)了 NAFLD細(xì)胞模型鎂離子轉(zhuǎn)運(yùn)基因PRL3和CNNM3的表達(dá)水平,同時(shí)降低肝細(xì)胞內(nèi)鎂離子濃度;相反,通過(guò)重組質(zhì)粒超表達(dá)PRL3和CNNM3可以恢復(fù)胞內(nèi)鎂離子含量,且PRL3響應(yīng)鎂離子對(duì)DGAT2的調(diào)控。鎂離子響應(yīng)基因PRL3是否可以通過(guò)調(diào)控DGAT2的表達(dá)影響甘油三醋合成?本文利用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和siRNA干擾技術(shù)對(duì)通路上各信號(hào)蛋白進(jìn)行超表達(dá)或沉默,結(jié)果表明PRL3作為上游基因作用于PI3K/AKT/mTOR和mTOR/Lipin1/SREBP1信號(hào)通路,且SREBP1調(diào)控DGAT2的表達(dá)。在鎂離子緩解NAFLD細(xì)胞模型脂積累同時(shí),添加PRL3抑制劑和mTOR抑制劑進(jìn)行驗(yàn)證,Western blot結(jié)果表明鎂離子經(jīng)由PRL3/AKT/mTOR和mTOR/Lipin1/SREBP1作用于DGAT2的表達(dá),并經(jīng)由此通路影響甘油三酯的合成。SREBP1作為脂代謝基因調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子,其轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域克隆超表達(dá)載體可以下調(diào)DGAT2表達(dá),且siRNA-SREBP1上調(diào)DGAT2表達(dá)。啟動(dòng)子數(shù)據(jù)庫(kù)檢索發(fā)現(xiàn)DGAT2啟動(dòng)子區(qū)域存在SREBP1結(jié)合位點(diǎn)(5'-ATCACCCCAC-3'),熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)發(fā)現(xiàn)SREBP1負(fù)調(diào)控DGAT2基因啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性,EMSA和ChIP實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)SREBP1蛋白和DGAT2啟動(dòng)子DNA在細(xì)胞外和內(nèi)存在結(jié)合作用。同時(shí)鎂離子作為輔助因子參與SREBP1蛋白和DGAT2啟動(dòng)子的結(jié)合過(guò)程。綜上所述,三價(jià)鉻離子和鎂離子均可以降低OA誘導(dǎo)的NAFLD小鼠模型中的脂累積、肝重、體重和轉(zhuǎn)氨酶,并穩(wěn)定紊亂的脂代謝基因和炎癥因子;鎂離子還起到改善鐵負(fù)載和鎂缺乏的作用。鎂離子參與NAFLD脂代謝細(xì)胞調(diào)控機(jī)制結(jié)果顯示:鎂離子經(jīng)由PRL3/AKT/mTOR 和 mTOR/Lipin1/SREBP1 通路作用于 DGAT2 的表達(dá)且參與 SREBP1對(duì)DGAT2轉(zhuǎn)錄調(diào)控過(guò)程�？傊�,通過(guò)本論文的研究,證實(shí)了金屬離子在NAFLD脂代謝的重要調(diào)控作用,并提出了DGAT2作為NAFLD潛在治療靶點(diǎn)的可能性。
【學(xué)位授予單位】：華東理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R575
【圖文】：

肪性肝炎的發(fā)病過(guò)程［１７］。胰島素抵抗引起肝臟內(nèi)過(guò)量甘油三酯累積和脂變性是第一次打逡逑擊，隨后的脂質(zhì)過(guò)氧化、氧化應(yīng)激和炎癥因子等構(gòu)成了第二次打擊［１８］。雖然該假說(shuō)中很逡逑多問(wèn)題仍未解決，但是提供了一個(gè)有力的理論體系去理解ＮＡＦＬＤ發(fā)病機(jī)制，如圖１．１逡逑所示。逡逑Ａｄｉｐｏｓｅ邋ｔｉｓｓｕｅ邐邐逡逑、、邐Ｎｏｒｍａｌ邋Ｌｉｖｅｒ逡逑_炲澹罰劍潁耍蟈邋五義希桑睿螅酰歟椋鑠澹潁澹螅椋螅簦幔睿悖邋義媳觥義希齲歟埃耍睿澹簀義希蓿牛悖澹螅螅椋觶邋澹媯幔歟戾危鄭洛義希保澹祝耍蟈義賢跡保卞澹危粒疲蹋膩濉岸未蚧鰲奔偎擔(dān)郟保梗蒎義希疲椋紓澹保卞澹齲穡錚簦瑁澹螅椋簀澹錚駑濉埃裕鰨镥澹齲椋簦蟆卞澹椋鑠澹危粒疲蹋膩義轄┠暄芯糠⑾只褂釁淥蛩乜梢緣賈攏危粒疲蹋姆⒉。ǚ逝幀⒁鵲核氐摯�、舱d義狹忌釹骯咭誠(chéng)骯摺⒏窩撞《盡⒊Φ牢⑸锏奈陜乙約跋喙刂虜』蟣澩锏齲郟玻牽蕁＞」苠義隙裕危粒疲蹋姆⒉』譜雋舜罅墾繡�，但官懺偛病的病蚁栴^腫踴迫勻鮮隊(duì)邢蓿枰義弦徊繳釗胙芯�。辶x希保保沖澹危粒疲蹋鬧瘟蒲繡辰瑰義锨岫戎湫緣模危粒疲蹋幕頰呤強(qiáng)梢宰勻荒孀模ü俠淼囊車(chē)髡陀行У奶迥苠義隙土犢梢愿納聘臥嘀凈郟郟玻保蕁９靠防鍔閎�，矄决容易蒂Z路逝鄭一崽岣呋煎義希危粒疲蹋牡姆縵�，哉浕庚Z中艿乃婊匝櫓校蛔櫓駒剛吒嚀且常硪蛔楦嚀且義鮮澈笤?xún)般^涓嚦防锪閌�，后者会灭嬙臭溨腹部脂芳m芻透臥嘀湫裕郟玻玻蕁Ｏ嚳吹眉詞瑰義顯諉揮刑迥芏土兜那榭魷攏拗埔襯芰康納閎耄褐械淖泵�、肝伕胞质榔c⒏五義顯嘌字⒎從拖宋薊嵊忻饗愿納疲保玻常�。较少的X碩勘熱緋な奔渚米

本文編號(hào)：2762772