【摘要】：研究背景炎癥性腸病(IBD)的發(fā)病率成逐年上升的趨勢,其確切發(fā)病機(jī)制目前為止仍不是十分清楚。除與個(gè)體生物的遺傳易感性密切相關(guān)之外,還有可能受到腸道菌群失調(diào)、免疫調(diào)節(jié)失衡或是腸組織炎性損傷等多種因素的綜合影響。尤其是脾臟中的T淋巴細(xì)胞和腸組織巨噬細(xì)胞在IBD的發(fā)病過程中起到關(guān)鍵作用。丁酸鹽作為腸黏膜益生菌代謝產(chǎn)物短鏈脂肪酸中重要的一種,不僅可以在腸腔內(nèi)提供能量和營養(yǎng)物質(zhì),還可以對整個(gè)腸道起到很好的調(diào)節(jié)和保護(hù)作用。但丁酸鹽在調(diào)節(jié)IBD具體發(fā)病機(jī)制以及對IBD進(jìn)行保護(hù)和治療等方面目前為止研究較少,因此更加值得對此進(jìn)行深入研究。目的本實(shí)驗(yàn)用TNBS誘導(dǎo)的BALB/c小鼠建立起可以模擬人類IBD發(fā)病機(jī)制的結(jié)腸炎模型,并在建模過程中同時(shí)給予丁酸鹽溶液和等量的丁酸梭菌菌液進(jìn)行灌胃,從而對丁酸鹽是否調(diào)節(jié)了結(jié)腸炎小鼠脾臟組織中Th1/Th2的免疫平衡,以及是否抑制了腸道內(nèi)中性粒細(xì)胞的增殖和M1/M2型巨噬細(xì)胞的平衡等進(jìn)行了初步研究。之后進(jìn)一步對丁酸鹽是否調(diào)節(jié)了脾臟組織中PD-1/PD-L1信號(hào)途徑進(jìn)行了深入研究,更加說明了丁酸鹽在結(jié)腸炎小鼠中具有一定的調(diào)節(jié)和保護(hù)作用,同時(shí)也為IBD在臨床上的治療和應(yīng)用提供新的方法與依據(jù)。方法將60只雄性BALB/c小鼠隨機(jī)分為(1)正常對照組、(2)TNBS模型組、(3)TNBS+丁酸鹽組和(4)TNBS+丁酸梭菌組四組。飼養(yǎng)過程中對各組小鼠進(jìn)行體重、死亡率等一般狀況的檢查并進(jìn)行DAI評分,三周后處死全部小鼠并對各組小鼠結(jié)腸組織進(jìn)行HE染色和HI評分比較。之后用ELISA試劑盒檢測各組小鼠腸組織MPO的表達(dá)水平和血清內(nèi)IFN-γ、IL-4、IL-17、TGF-β和IL-10的濃度。并在各組小鼠脾臟組織中用Western Blot方法檢測Foxp3蛋白的表達(dá)以及用qPCR方法檢測PD-1和PD-L1的mRNA表達(dá)量。最后在各組小鼠結(jié)腸組織中用免疫組化方法檢測CD86和CD206的表達(dá)情況和ELISA方法檢測趨化因子受體和配體CCL2、CCR2、CCL17和CX3CR1的表達(dá)量。本實(shí)驗(yàn)的所有數(shù)據(jù)均用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。計(jì)量數(shù)據(jù)采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)的方式表示,多組數(shù)據(jù)間采用單因素方差分析方法,方差分析有意義時(shí)再進(jìn)一步用LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較。對各組免疫組化結(jié)果的比較采用卡方檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05,p0.05時(shí)認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果(1)正常對照組小鼠一般狀況良好,體重輕度增加,無死亡現(xiàn)象并且DAI評分和HI評分均在正常范圍內(nèi)。(2)TNBS模型組與(1)正常對照組小鼠相比一般狀況較差,死亡率有所增高體重也有所減輕,并且DAI和HI評分也出現(xiàn)升高。而(3)TNBS+丁酸鹽組和(4)TNBS+丁酸梭菌組與(2)TNBS模型組小鼠相比其一般狀況、體重和死亡率等指標(biāo)均有所緩解,DAI評分和HI評分也相對降低。差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。與(1)正常對照組小鼠相比,(2)TNBS模型組腸組織MPO的ELISA值有所升高,血清內(nèi)IFN-γ和IL-17的ELISA值升高,而TGF-β和IL-10的ELISA值有所降低。(3)TNBS+丁酸鹽組和(4)TNBS+丁酸梭菌組與(2)TNBS模型組小鼠相比腸組織MPO的ELISA值有所恢復(fù),血清內(nèi)IFN-γ和IL-17的ELISA值相對降低,并且TGF-β和IL-10的ELISA值同樣有所回升。差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。但是四組小鼠血清內(nèi)IL-4的ELISA值比較沒有較大差別(p0.05)。(2)TNBS模型組與(1)正常對照組小鼠相比,脾臟組織中Foxp3的表達(dá)量有所降低,并且PD-1和PD-L1的mRNA表達(dá)量也相應(yīng)降低。而(3)TNBS+丁酸鹽組和(4)TNBS+丁酸梭菌組與(2)TNBS模型組小鼠相比脾臟組織中Foxp3的表達(dá)相對增高,并且PD-1和PD-L1的mRNA表達(dá)量也有所回升。差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。(2)TNBS模型組與(1)正常對照組小鼠相比,結(jié)腸組織內(nèi)CD86的免疫組化表達(dá)量有所增加,CD206的免疫組化表達(dá)量相對降低。腸組織CCL2和CCR2的ELISA值均出現(xiàn)增高并且CCL17和CX3CR1的ELISA值均有所降低。而(3)TNBS+丁酸鹽組和(4)TNBS+丁酸梭菌組與(2)TNBS模型組小鼠相比CD86的免疫組化表達(dá)量相對減少,CD206的免疫組化表達(dá)量出現(xiàn)回升。并且腸組織CCL2和CCR2的ELISA值出現(xiàn)降低,CCL17和CX3CR1的ELISA值相對增高。差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論1.丁酸鹽既可以初步改善結(jié)腸炎小鼠中的臨床表現(xiàn)和基本病理情況,還可以改善和調(diào)節(jié)脾臟組織中Treg細(xì)胞的數(shù)量和相應(yīng)的免疫平衡,同時(shí)抑制結(jié)腸組織內(nèi)中性粒細(xì)胞的增殖和巨噬細(xì)胞分型的失衡。2.丁酸鹽可以通過誘導(dǎo)脾臟組織中PD-1/PD-L1信號(hào)通路的方式從而促進(jìn)了Treg細(xì)胞的增殖。并可以在結(jié)腸組織中通過抑制巨噬細(xì)胞表面趨化因子受體和配體表達(dá)量的方式從而對結(jié)腸組織中M1/M2型巨噬細(xì)胞數(shù)量的平衡進(jìn)行調(diào)節(jié)。3.丁酸梭菌作為腸道內(nèi)重要益生菌中的一種,也可以在TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎小鼠模型中起到與上述丁酸鹽相類似的保護(hù)調(diào)節(jié)作用。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R574.62
【圖文】：

各組小鼠的平均體重曲線（g/天）

各組結(jié)腸組織HE染色結(jié)果（×100）

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2742889