發(fā)布時間：2020-06-20 01:57

【摘要】：肝纖維化是多種慢性肝病共有的病理改變。近年來關(guān)于肝纖維化發(fā)生、發(fā) 展的機制及其治療己從整體、細胞和分子水平進行了大量的研究，資料表明肝 細胞和肝星形細胞（hepatic stellate cell,HSC）是肝纖維化發(fā)生、發(fā)展中最重要 的細胞，肝細胞損傷是肝纖維化的重要啟動因素，肝星形細胞激活是肝纖維化 發(fā)生的中心環(huán)節(jié)。肝纖維化是肝臟以膠原為主的細胞外基質(zhì)合成和降解失衡的 結(jié)果。許多病因可以造成肝損傷，我國以病毒性肝炎為主要原因，當前對原發(fā) 病變?nèi)詿o有效根治的措施，因此減輕和阻止纖維化反應(yīng)是十分重要的治療目 標。 Decorin主要由成纖維細胞合成，屬于分泌型、小分子、富含亮氨酸蛋白 多糖（small，leucine－rich proteoglycans，SLRPs）基因擴展家族成員之一，在調(diào) 節(jié)細胞粘附、遷徙、增殖及膠原纖維形成中起重要作用。研究表明decorin在 防止腎小球、肺等組織纖維化中起作用，decorin cDNA最近被用作一種新的基 因治療工具來治療由TGF β增高引起的纖維性疾病。Decorin能夠使Bleomycin 誘發(fā)倉鼠肺纖維化的各項病理指標顯著降低，提示decorin在抗肺纖維化中的藥 理作用。Decorin與肝纖維化的關(guān)系，國外學者通過免疫組化和原位雜交等技 術(shù)僅作了不同生理病理狀態(tài)下decorin在肝臟各種細胞的定性定位研究。國內(nèi) 關(guān)于decorin的研究很少，有關(guān)decorin與肝纖維化的研究尚屬空白。我們進行 decorin對肝細胞和肝星形細胞影響以及細胞因子對decorin表達影響的體外研 究，以大鼠肝星形細胞株（HSC-T6）細胞和正常人肝細胞株（L-02）細胞為研 究靶細胞，從細胞和基因水平了解decorin在體外對肝臟細胞的調(diào)控作用，同時 選擇 IFNγ、PDGF等細胞因子與 HSC-T6細胞作用，觀察細胞因子對 decorin 表達的調(diào)節(jié)作用。旨在為探討decorin在肝纖維化形成機制中的作用提供理論 依據(jù)，為肝纖維化治療提供新思路。 一．Decorin對L-02和HSC-T6體外增殖的影響 互 中文紛召 Decorin是一種與生長抑制活性密切相關(guān)的蛋白多糖分子，能夠控制多種 來源的細胞增殖。對肝臟組織細胞的作用尚未見報道。我們通過decorin與正 常人肝細胞株（L心2）及大鼠肝星形細胞株（HSC＊6）體外共孵育，進行細 胞計數(shù)和心摻入量測定，觀察decorin對這些細胞分裂增殖的影響，通過流式 細胞儀分析 DNA含量觀察其對細胞周期的影響。結(jié)果表明 5葉 卜g／ml decorin 作用4—6天后，與對照組相比在相同培養(yǎng)條件下細胞增殖數(shù)量及速度降低，以 10 pg／ffil作用更強，并且隨作用時間延長而明顯（P＜0刀1人作用48小時可使 細胞’＊－＊dR摻入量比對照組減少18．29％（P＜O．05），’＊－Leu摻入量無明顯改 變，提示對細胞DNA合成有影響。Decorin作用后，G／G；期細胞百分率比對 照增加19石3％和29．08％（P＜0刀1）石期細胞百分率比對照降低18．45％和Zo．98 ％（P＜0刀1X G。／M期細胞減少甚至消失。細胞經(jīng)20ug／ml decorin作用 6天， 臺盼藍染料排斥實驗表明細胞活力在 90％以上，說明 decorin在測試條件下對 所用細胞無細胞毒性作用，其細胞數(shù)量低于對照是由于細胞受decorin作用所 致。結(jié)果表明decorin能夠抑制肝細胞和肝星形細胞的體外增殖，可能與細胞 G；期阻滯以及抑制細胞DNA合成有關(guān)。Decorin對細胞生長有負反饋調(diào)節(jié)作 用。 二．Decorin誘導L心2細胞和HSC16細胞詞亡的研究 肝組織損傷啟動HSC 由一種靜止的富含維生素A的表型轉(zhuǎn)化為活化的 肌纖維母細胞樣（MFBLC），與靜止狀態(tài)細胞相比，后者具有更高的增殖活力 并能大量合成細胞外基質(zhì)。逆轉(zhuǎn)HSC的活化表型或減少HSC的數(shù)量可以減少 ECM成分的過度沉積。我們以decorin為誘導劑，觀察decorin在體外對L．02 細胞和HSC16細胞凋亡的誘導作用。 我們的實驗從多方面表明 decorin在 20－40卜g／ml濃度作用后可使 HSC16 和L－02細胞發(fā)生凋亡。Decorin與L－02和HSC16細胞體外共同孵育后，細 胞出現(xiàn)了凋亡特征性改變，貼壁細胞變圓、縮小、脫落，臺盼藍染料排斥試驗 表明這些細胞是活細胞；染色質(zhì)濃縮，聚集呈新月形或馬蹄形，形成凋亡小體；
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2000
【分類號】：R575.202

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 孔憲濤，高鋒;肝纖維化的實驗與臨床研究[J];第二軍醫(yī)大學學報;1996年01期

2 沈禮勇;血小板衍生生長因子在肝纖維化中的作用[J];國外醫(yī)學(消化系疾病分冊);1997年02期

3 胡中波;Fas在人體的表達及其意義[J];國外醫(yī)學(免疫學分冊);2000年01期

4 劉乃明;肝細胞的膠原合成[J];中華肝臟病雜志;1996年03期

5 高春芳，孔憲濤，范列英;TNFα對NIH／3T3細胞、肝貯脂細胞增殖及前膠原表達的影響[J];中華消化雜志;1994年01期

6 高春芳，孔憲濤，范列英;細胞因子對3T3細胞、肝細胞及貯脂細胞增殖的影響[J];中國免疫學雜志;1994年02期

本文編號：2721685