【摘要】：肝臟作為清除內(nèi)毒素的主要臟器,在敗血癥和休克的發(fā)生過(guò)程中最易受損~([1])。急性肝損傷是一種多種原因?qū)е碌母喂δ芸焖賳适橹鞯呐R床綜合征,在敗血癥發(fā)生的休克過(guò)程中常有發(fā)生,其具有發(fā)病、急病死率高的特點(diǎn),近幾年來(lái)呈逐年上升的趨勢(shì)。目前并無(wú)特效療法治療急性肝損傷,臨床多采用緊急肝移植來(lái)進(jìn)行救治。AWRK6(SWVGKHGKKFGLKKHKKH)是一種新型抗菌肽,是由本實(shí)驗(yàn)室根據(jù)東北林蛙表皮抗菌肽Dybowskin-2CDYa優(yōu)化改造得到的。前期研究表明,AWRK6對(duì)內(nèi)毒素導(dǎo)致的急性肝損傷具有一定的保護(hù)作用。肝臟組織切片HE染色顯示,AWRK6能夠保護(hù)肝臟免受內(nèi)毒素導(dǎo)致的免疫損傷,本研究在前期研究的基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討了AWRK6在內(nèi)毒素誘發(fā)的小鼠急性肝損傷中的保護(hù)作用,并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行了初步研究。本研究將昆明小鼠分為四組,分別腹腔注射生理鹽水、LPS(50 mg/kg)、LPS+AWRK6(50 mg/kg+10 mg/kg)、LPS+PMB(50 mg/kg+2.6 mg/kg)。利用化學(xué)檢測(cè)試劑盒檢測(cè)了AWRK6對(duì)內(nèi)毒素致急性肝損傷的肝臟組織中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶和超氧化物歧化酶合成的影響,評(píng)價(jià)AWRK6對(duì)急性肝損傷的修復(fù)作用。采用免疫印跡技術(shù)在細(xì)胞及組織水平研究了AWRK6對(duì)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2,Bax,Caspase-9表達(dá)的影響,分析了AWRK6對(duì)內(nèi)毒素誘發(fā)的小鼠急性肝損傷細(xì)胞凋亡的抑制作用。進(jìn)一步利用蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)研究AWRK6對(duì)增殖相關(guān)蛋白b-Raf,MEK1/2,ERK1/2表達(dá)的影響,探究了AWRK6對(duì)小鼠內(nèi)毒素致急性肝損傷肝組織增殖作用,并對(duì)AWRK6對(duì)內(nèi)毒素致急性肝損傷保護(hù)作用的機(jī)制進(jìn)行了分析。結(jié)果表明,AWRK6能夠極其顯著降低肝組織谷丙轉(zhuǎn)氨酶和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶的活力(P0.001),極其顯著升高超氧化物歧化酶的活力(P0.001),從而抑制肝損傷的發(fā)生。小鼠經(jīng)AWRK6處理24小時(shí)后,Bcl-2的表達(dá)與LPS組相比極顯著上調(diào)(P0.01),Bax和Caspase-9的表達(dá)極顯著下調(diào)(P0.01);同時(shí),b-Raf和ERK1/2的表達(dá)與LPS組相比極顯著上調(diào)(P0.01),MEK1/2的表達(dá)極其顯著上調(diào)(P0.001),且增殖相關(guān)蛋白的表達(dá)水平與空白對(duì)照組沒(méi)有差異,結(jié)果說(shuō)明AWRK6具有抑制肝細(xì)胞凋亡和促進(jìn)肝細(xì)胞增殖的作用。小鼠處理96小時(shí)的結(jié)果優(yōu)于處理24小時(shí)的結(jié)果。本研究結(jié)果初步說(shuō)明了AWRK6對(duì)于內(nèi)毒素誘發(fā)的急性肝損傷具有保護(hù)和修復(fù)的作用。AWRK6可通過(guò)下調(diào)凋亡促進(jìn)蛋白Bax和Caspase-9的表達(dá),上調(diào)凋亡抑制蛋白Bcl-2的表達(dá)抑制細(xì)胞凋亡;通過(guò)上調(diào)增殖相關(guān)蛋白b-Raf、MEK1/2和ERK1/2的表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞增殖。本研究結(jié)果為將AWRK6開(kāi)發(fā)成為抗內(nèi)毒素新型護(hù)肝藥物奠定了堅(jiān)實(shí)的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：遼寧大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R575
【圖文】：

對(duì)小鼠急性肝損傷肝臟組織中 ALT，T-Stics 20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，所有實(shí)顯著性差異，**p<0.01 為極顯著性2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果試結(jié)果處理后 24小時(shí)肝臟組織谷丙轉(zhuǎn)氨酶、LPS 組、AWRK6 實(shí)驗(yàn)組和 PMB組5 U/gprot、44.81 U/gprot、21.00 U/g LPS 后肝臟組織谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力明顯谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平與空白對(duì)照組沒(méi)有的降低（P<0.001）；PMB組的谷丙（P<0.01）。

驗(yàn)處理后 24小時(shí)肝臟組織谷丙轉(zhuǎn)氨酶活、LPS 組、AWRK6 實(shí)驗(yàn)組和 PMB組小5 U/gprot、44.81 U/gprot、21.00 U/gprot LPS 后肝臟組織谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力明顯升的谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平與空白對(duì)照組沒(méi)有顯著的降低（P<0.001）；PMB組的谷丙轉(zhuǎn)氨（P<0.01）。S, AWRK6，PMB 分組處理小鼠 24 小時(shí)后 ALT 測(cè)

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2713028