慢性乙型肝炎患者外周血單個核細胞和肝組織內(nèi)性甾體激素受體與肝組織病理狀態(tài)的相關(guān)性

發(fā)布時間：2020-06-13 02:46

【摘要】：研究目的探討慢性乙型肝炎肝組織內(nèi)和外周血單個核細胞內(nèi)雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量與肝組織病理學狀態(tài)和肝組織HBsAg、HBcAg表達強度之間的相關(guān)性。研究方法 1研究對象 1.1入選標準：參照2010年中華醫(yī)學會肝病學分會制訂的《慢性乙型肝炎防治指南》中的診斷標準,選取經(jīng)過肝穿刺活檢的慢性乙型肝炎患者162例,性別與年齡不限。 1.2排除標準：(1)合并酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病、丙型肝炎、藥物性肝炎、自身免疫性肝病、膽汁淤積性肝病、淤血性肝病、肝豆狀核變性、血色病及其他非乙肝病毒感染導致的肝�。�(2)近半年內(nèi)曾經(jīng)使用激素替代藥物、或激素拮抗藥物、或抗肝纖維化藥物的患者；(3)肝硬化失代償期患者；(4)性腺疾病、內(nèi)分泌與其他可能影響體內(nèi)睪酮、雌二醇疾病的患者。 2標本采集與保存 2.1肝穿組織標本采集與保存：肝組織活檢采用1秒鐘經(jīng)皮肝穿刺法。肝組織標本采集后分成兩段,長度分別≥1.0cm和≥0.2cm,分別置入空塑料標本管和預存RNA later的塑料標本管內(nèi),立即冰凍送檢和放入-80℃凍存。 2.2外周血單個核細胞分離與保存：Ficoll密度梯度離心法分離外周血單個核細胞,離心后細胞沉淀加入少量的PBS,使細胞懸浮,再加入300μL的RNA later,-80℃冰箱凍存。 3實驗方法 3.1肝組織病理狀態(tài)診斷：肝組織石蠟切片Masson染色和蘇木素-伊紅(hematoxylin and eosin, HE)染色,參照2000年西安全國病毒性肝炎及肝病學術(shù)會議修訂的標準進行病理學分級(grading, G)和分期(staging, S)。 3.2肝組織HBsAg和HBcAg測定：肝組織石蠟切片HBsAg和HBcAg表達強度采用免疫組織化學法(immunohisto-chemistry,IHC)(二步法)測定。 3.3肝組織膠原纖維面積比測定：肝組織石蠟切片Masson染色,采用美國PE公司(PerkinElmer)的智能切片分析系統(tǒng)測定肝組織膠原纖維的面積比。 3.4肝組織內(nèi)和外周血單個核細胞內(nèi)雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量測定：采用反轉(zhuǎn)錄實時PCR測定。 4統(tǒng)計學分析統(tǒng)計分析采用SPSS13.0軟件。肝組織內(nèi)和外周血單個核細胞內(nèi)雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量與肝組織病理學狀態(tài)和肝組織HBsAg、HBcAg表達強度之間的相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)分析,與肝組織膠原纖維面積比之間的相關(guān)性采用Pearson線性相關(guān)分析。肝組織內(nèi)和外周血單個核細胞內(nèi)雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量在肝組織不同病理學分級、分期之間的差異采用單因素方差分析。性別、年齡、肝組織內(nèi)和外周血單個核細胞內(nèi)雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量預測肝組織不同病理學分級、分期的效能評價分別采用Byes逐步判別分析。肝組織內(nèi)和外周血單個核細胞內(nèi)雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量預測肝組織膠原纖維面積比的評價采用曲線估計。結(jié)果 1肝組織內(nèi)和外周血單個核細胞內(nèi)雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量與患者性別、年齡、肝組織病理分級和分期、肝組織膠原纖維面積比之間的相關(guān)性肝組織內(nèi)雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量與患者性別呈顯著負相關(guān)(rs=-0.250,P=0.001、rs=-0.206, P=0.008;注：男性賦值為1,女性賦值為0)；與患者年齡呈顯著負相關(guān)(r=-0.298, P=0.000、r=-0.240, P=0.002);與肝組織病理學分級、分期之間呈顯著負相關(guān)(雌激素受體amRNA:rs=-0.484, P=0.000、rs=0.477,P=0.000；雄激素受體mRNA:rs=-0.591, P=0.000、rs=-0.523, P=0.000);與肝組織膠原纖維面積比呈顯著負相關(guān)(r=0.421, P=0.000、r=-0.299, P=0.002);與肝組織HBsAg表達強度無顯著相關(guān)性(rs=0.053, P=0.502、rs=0.081, P=0.053),與肝組織HBcAg表達強度分別無顯著相關(guān)性和和呈顯著正相關(guān)(rs=0.101,P=0.202、rs=0.170,P=0.031)。外周血單個核細胞內(nèi)雌激素受體a、雄激素受體mRNA含量與患者性別無顯著相關(guān)性(rs=0.014,P=0.894、rs=-0.172,P=0.098；注：男性賦值為1,女性賦值為0)；與患者年齡無顯著相關(guān)性(r=-0.099,P=0.357、r=-0.032,P=0.771)；與肝組織病理學分級、分期之間分別無顯著相關(guān)性和呈顯著負相關(guān)(雌激素受體αmRNA:rs=-0.085,P=0.436和rs=-0.012,P=0.913；雄激素受體mRNA:rs=-0.243,P=0.023和rs=-0.326,P=0.002)；與肝組織膠原纖維面積比分別無顯著相關(guān)性和呈負相關(guān)(r=-0.051,P=0.702、r=-0.108,P=0.051)；與肝組織HBsAg表達強度無顯著相關(guān)性(rs=0.143,P=0.184、rs=0.199,P=0.063),與肝組織HBcAg表達強度分別無顯著相關(guān)性(rs=-0.169,P20.116、rs=-0.085,P=0.430)。 2肝組織內(nèi)和外周血單個核細胞內(nèi)雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量在肝組織病理分級和分期、肝組織之間的差異肝組織內(nèi)雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量在不同病理學分級之間的差異有統(tǒng)計學意義(F=30.056, P=0.000、F=45.819, P-0.000);在不同病理學分期之間的差異有統(tǒng)計學意義(F=17.796, P=0.000、F=20.570, P=0.000)。外周血單個核細胞內(nèi)雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量在不同病理學分級之間的差異無統(tǒng)計學意義(F=0.180, P=0.836、F=2.577, P=0.082);雌激素受體αmRNA含量在不同病理學分級之間的差異無統(tǒng)計學意義(F=0.052,P=0.984),雄激素受體mRNA含量在不同病理學分期之間的差異有統(tǒng)計學意義(F=3.434,P=0.021)。 3性別、年齡、肝組織內(nèi)和外周血單個核細胞內(nèi)雌激素受體α、雄激素受體含量預測肝組織不同病理學分級、分期的Byes逐步判別分析以性別、年齡、肝組織內(nèi)和肝組織內(nèi)雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量為自變量,肝組織病理學分級、分期為因變量,進行Byes逐步判別分析。結(jié)果,只有雄激素受體mRNA符合模型自變量納入標準,進入判別模型。基于雄激素受體的判別肝組織不同病理學分級的Fisher判別函數(shù)為：G1=-0.298+2.852×雄激素受體mRNA含量,G2=-1.208-0.098x雄激素受體mRNA含量,G3=-1.892-2.925x雄激素受體mRNA含量。基于雄激素受體的判別肝組織不同病理學分級的Fisher判別函數(shù)判別G1、G2、G3的正確率分別為88.9%、12.2%、49.0%。基于雄激素受體的判別肝組織不同病理學分期的Fisher判別函數(shù)為：S1=-1.413+3.148x雄激素受體mRNA含量,S2=-1.028+0.931×雄激素受體mRNA含量,S3=-2.542-2.215×雄激素受體mRNA含量,S4=-1.685-1.855×雄激素受體mRNA含量�；谛奂に厥荏w的判別肝組織不同病理學分期的Fisher判別函數(shù)判別S1、S2、S3、S4的正確率分別為48.0%、59.5%、0%和28.9%。以性別、年齡、肝組織內(nèi)和外周血單個核細胞內(nèi)雌激素受體a、雄激素受體mRNA含量為自變量,肝組織病理學分級、分期為因變量,進行Byes逐步判別分析。結(jié)果,沒有一項指標符合模型自變量納入標準,進入判別模型。 4肝組織內(nèi)和外周血單個核細胞內(nèi)雌激素受體a、雄激素受體mRNA含量預測肝組織膠原纖維面積比的曲線估計以肝組織內(nèi)雌激素受體α、雄激素受體mRNA含量為自變量,肝組織膠原纖維面積比為因變量,進行曲線擬合。結(jié)果,基于雌受體amRNA含量預測肝組織膠原纖維面積比的回歸模型的決定系數(shù)中,三次方模型的決定系數(shù)最大(R2=0.094)肝組織膠原纖維面積比=0.187-0.128x雌激素受體amRNA含量+0.081×雌激素受體αmRNA含量2+0.073×雌激素受體αmRNA含量3。基于雄激素受體mRNA含量預測肝組織膠原纖維面積比的回歸模型的決定系數(shù)中,三次方模型的決定系數(shù)最大(R2=0.202)；肝組織膠原纖維面積比=0.311-2.692×雄激素受體mRNA含量+7.818×雄激素受體mRNA含量2-9.765x雄激素受體mRNA含量3。以外周血單個核細胞內(nèi)雌激素受體a、雄激素受體mRNA含量為自變量,肝組織膠原纖維面積比為因變量,進行曲線擬合。結(jié)果,基于雌激素受體α、雄激素受體nRNA含量預測肝組織膠原纖維面積比的回歸模型不成立。結(jié)論 1肝組織內(nèi)雌激素受體a、雄激素受體表達水平與性別和年齡有關(guān),男性患者雌激素受體a、雄激素受體表達水平低于女性患者；青春期及青春期后,隨著年齡增長,肝組織內(nèi)雌激素受體α、雄激素受體表達水平逐步降低。肝組織內(nèi)雌激素受體α、雄激素受體表達可能參與慢性乙型肝炎發(fā)病和進展,肝組織內(nèi)雌激素受體a、雄激素受體表達水平越低,肝組織炎癥活動度和纖維化程度越高。肝組織內(nèi)雄激素受體可能促進HBcAg表達。 2外周血單個核細胞內(nèi)雌激素受體α、雄激素受體表達水平與性別和年齡無關(guān)。外周血單個核細胞內(nèi)雄激素受體表達參與慢性乙型肝炎進展,外周血單個核細胞內(nèi)雄激素受體表達水平越低,肝組織纖維化程度越高。外周血單個核細胞內(nèi)雄激素受體表達不影響肝組織內(nèi)HBcAg表達。 3肝組織內(nèi)和外周血單個核細胞內(nèi)雌激素受體α、雄激素受體表達水平不平行；其中青春期及青春期后,肝組織內(nèi)雌激素受體α、雄激素受體表達減少可能參與CHB發(fā)病和進展。肝組織內(nèi)雌激素受體α、雄激素受體表達減少參與慢性乙型肝炎發(fā)病和進展的機制不完全依賴于乙型肝炎病毒的復制和抗原表達。
【圖文】：

肝組織,病理分期,肝纖維化,膠原纖維