【摘要】：目的:探討HBV cccDNA、HBV tDNA在HBV相關性肝細胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用,為臨床上原發(fā)性肝細胞癌的預防和治療提供理論根據。 方法:應用熒光定量聚合酶鏈反應法檢測33例慢性HBV感染病人肝穿組織(慢性HBV感染組)、60例HBV相關性肝細胞癌病人癌組織(肝癌組)、及其癌旁組織(癌旁組)肝細胞內HBV cccDNA和HBV tDNA載量,HE染色和免疫組化法定性檢測肝細胞HBsAg、HBcAg、炎癥活動度和纖維化分級。用SPSS16.0軟件統(tǒng)計分析,分別進行肝癌組織、癌旁組織、慢性HBV感染肝組織細胞HBV cccDNA、HBV tDNA與血清HBVDNA的相關分析,比較三種組織肝細胞HBV cccDNA、HBV tDNA、cccDNA/HBV tDNA的差異,分別比較三組肝細胞HBsAg、HBcAg不同表達模式間HBV cccDNA、HBV tDNA載量,進行HBV cccDNA、HBV tDNA載量與炎癥活動度和纖維化程度的相關分析。 結果:(1)肝癌組織肝細胞內HBV cccDNA、tDNA載量和血清HBV DNA水平無明顯相關(分別為r=0.165、P=0.206, r=0.122、P=0.352);慢性HBV感染組織肝細胞內HBV cccDNA、tDNA載量和血清HBV DNA水平成低度正相關(分別為r=0.356、P=0.042,r=0.496、P=0.003)。(2)癌組織肝細胞內HBV cccDNA、HBV tDNA載量均高于癌旁組織(P=0.000、0.042) ,與慢性HBV感染組沒有顯著差異(P=0.4、0.446);慢性HBV感染組織中HBV cccDNA、HBV tDNA載量顯著高于癌旁組織(P=0.041、0.001)(3)癌組織肝細胞內HBV cccDNA /HBV tDNA值均高于癌旁和慢肝組(P=0.025、0.011),慢性HBV感染組織細胞內HBV cccDNA/HBV tDNA值與癌旁組織無明顯差異(P=0.752);(4)4例血清HBV DNA、HBsAg陰性及HBcAb陽性的肝癌患者癌及癌旁組織中均檢測到HBV cccDNA的存在,且HBVcccDNA/HBV tDNA值均較高,最高達0.973;(5)肝癌組、癌旁組和慢性HBV感染組肝細胞內HBV cccDNA、HBV tDNA載量在HBsAg、HBcAg不同表達模式間沒有明顯差異(P值均0.05);(6)肝細胞內HBV cccDNA和HBV tDNA載量與肝組織炎癥活動度和纖維化程度沒有相關性(P值均0.05)。 結論:(1)HBV病毒復制活躍時,血清HBV DNA與肝細胞HBV cccDNA相應升高。對于肝癌細胞,盡管HBVcccDNA轉錄rc DNA活性不高,即使血清HBV DNA不能檢出,甚至HBsAg陰性,在肝細胞仍可檢測到高載量的HBV cccDNA。(2) HBV在肝癌發(fā)生中起主要作用的可能是cccDNA而不是rcDNA。(3)HBsAg和HBcAg表達模式反映肝細胞內cccDNA、tDNA的動力學不敏感。(4)肝細胞內HBV cccDNA和HBV tDNA并非導致肝組織病變的直接原因。
【圖文】：

圖 1-1 HBV cccDNA 標準曲線2.4.3 HBV tDNA 的標準曲線應用質粒標準品制作 HBV tDNA 的標準曲線，反應體系、條同 HBV cccDNA 體系，標準品拷貝數為 109、108、107、106、105所得曲線回歸方程式為：Y（CT）=45.717-3.241X，R2=0.995，如1-2 所示：

圖 1-2 HBV tDNA 的標準曲線2.4.4 β-2M 標準品的制備及標準曲線取 5μl 肝組織核酸抽提物，加入 20μl 的反應體系中。反應條件為：94 ℃ 3min；94 ℃ 30s、54℃ 30s、72℃ 1min共35個循環(huán)；72 ℃ 5min。反應所得PCR液使用TIANGEN普通PCR產物純化試劑盒進行純化，按說明書操作。取 5μl 純化產物溶于 45μl 去離子水中。用紫外線分光光度計檢測，取 OD260 值，，計算出濃度，并做成系列梯度的標準品，濃度（copies/μl）分別為：109、108、107、106、105。制作 β-2M 標準曲線，所得曲線回歸方程式為：Y（CT）=42.32-3.415X，R2=0.996，如圖 1-3 所示：
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R735.7;R512.62

【參考文獻】

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1 馬艷麗;任萬華;主余華;孫寶泉;董振芳;;定量檢測乙型肝炎病毒cccDNA的臨床意義[J];臨床檢驗雜志;2006年01期

2 馬艷麗;任萬華;董振芳;主余華;;乙型肝炎病毒cccDNA定量與乙型肝炎臨床及病理關系[J];胃腸病學和肝病學雜志;2005年06期

3 周平,張木森,蔡慶,陳友純,李曉娟,于建國,關鍵,劉春靈;PCR檢測HBV感染患者血清HBV DNA的臨床意義[J];華人消化雜志;1998年03期

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本文編號：2707222