【摘要】： 目的:通過(guò)survivin反義寡核苷酸(Antisense Oligodeoxynucleotides,ASODN)轉(zhuǎn)染HSC-T6細(xì)胞株,研究其對(duì)HSC-T6細(xì)胞株凋亡的影響。 方法:實(shí)驗(yàn)分為空白組、脂質(zhì)體組、1000nmol/LSODN組、ASODN組(400nmol/ L、800nmol/L、1000nmol/L)。脂質(zhì)體介導(dǎo)survivin寡核苷酸轉(zhuǎn)染HSC-T6細(xì)胞24小時(shí)后,倒置熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率。Survivin寡核苷酸轉(zhuǎn)染HSC-T6細(xì)胞48小時(shí)后,通過(guò)RT-PCR、western-blotting檢測(cè)survivin基因表達(dá)的改變,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)的改變,PI單染流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞凋亡率。 結(jié)果:轉(zhuǎn)染24小時(shí)后,于倒置熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn):ODN各濃度組細(xì)胞內(nèi)均可見到清晰的綠色熒光,轉(zhuǎn)染效率均達(dá)到80%;轉(zhuǎn)染作用48小時(shí)后,RT-PCR及werstern-blot結(jié)果顯示:與空白組、脂質(zhì)體組、1000nmol/LSODN組比較,ASODN各濃度組survivin mRNA及蛋白表達(dá)量均低于各對(duì)照組(p0.01);ASODN各濃度組survivin mRNA及蛋白表達(dá)量組間比較,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),空白組、脂質(zhì)體組、1000nmol/LSODN組組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。在倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)ASODN各濃度組細(xì)胞出現(xiàn)明顯的凋亡現(xiàn)象;PI單染流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示:與空白組、脂質(zhì)體、1000nmol/LSODN組比較,ASODN各濃度組細(xì)胞凋亡率明顯提高(p0.05);ASODN各濃度組凋亡率組間比較,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.01)�？瞻捉M、脂質(zhì)體組、1000nmol/LSODN組組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。 結(jié)論:1、HSC-T6細(xì)胞高表達(dá)survivin; 2、Survivin ASODN能抑制survivin基因的表達(dá)和誘導(dǎo)HSC-T6細(xì)胞的凋亡。
【圖文】：

經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠與0.5xTBE電泳液中100伏電泳30分鐘，紫外投射儀下可見2條清晰的條帶，由上到下分別為28s、18s,且28s/18s>1.5,提示RNA無(wú)明顯降解，見圖3。圖3 總RNA電泳圖注：1：空白組；2：脂質(zhì)體組；3：1000nmol/LSODN； 4：400nmol/LASODN；5：800nmol/LASODN；6:1000nmol/LASODN；2.2 Survivin ASODN對(duì)HSC-T6細(xì)胞survivin mRNA表達(dá)的影響RT-PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果顯示：在576 bp處各組均可見到均勻一致的GAPDH基因的條帶；在260bp處各組細(xì)胞均出現(xiàn)不同程度的特異性survivin基因條帶。用圖像分析儀對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行分析，結(jié)果顯示：各ASODN組Survivin mRNA 表達(dá)量均弱于各對(duì)照組survivin mRNA表達(dá)量且差異有顯著性（p<0.01），并且隨著ASODN轉(zhuǎn)染濃度的增大，survivin mRNA表達(dá)量逐漸降低，呈現(xiàn)劑量依賴性�？瞻捉M、脂質(zhì)體組及SODN組中HSC-T6細(xì)胞survivin mRNA表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05），，見圖4、表1。

圖4 ASODN對(duì)HSC-T6細(xì)胞Survivin mRNA表達(dá)的影響注：M:DNAmarker；1：空白組；2：脂質(zhì)體組；3：1000nmol/LSODN；4：400nmol/LASODN；5：800nmol/LASODN；6:1000nmol/LASODN；表1 各組細(xì)胞survivin/GAPDH mRNA表達(dá)灰度值比（x ±S）分組 灰度值比空白組 0.947±0.026b空脂質(zhì)體組 0.907±0.018bSODN 組 (1000nmol/L) 0.903±0.009bASODN 組（400nmol/L） 0.606±0.017acASODN 組（800nmol/L） 0.463±0.020acASODN 組（1000nmol/L） 0.252±0.029ac
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R575.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 陳競(jìng);凋亡抑制因子Survivin的研究進(jìn)展[J];川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2004年02期

2 楊華安;茍欣;;Survivin的研究進(jìn)展[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2008年03期

3 劉紅云;王希君;陳舒麗;姚旌旗;;腫瘤基因治療中survivin的研究進(jìn)展[J];咸寧學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年02期

4 ;Selection of optimal antisense accessible sites of survivin and its application in treatment of gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2005年05期

本文編號(hào)：2705725