【摘要】：目的：探討以16SrRNA和18SrRNA基因為基礎的細菌聚合酶鏈反應(PCR)法診斷急性胰腺炎并發(fā)全身性感染的價值和感染的病原體的特點。探索一種迅速檢測細菌感染的方法。 方法：選取2009年9月～2010年12月間收住昆明醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院的急性胰腺炎患者98例,(女30例,男68例,年齡14-89歲),不同時期不同部位標本106份,(12份痰標本,18份腹水標本。76份血標本)�；颊甙粗袊毙砸认傺自\治指南(2007年)診斷標準納入。利用細菌16SrRNA基因和真菌18SrRNA的高度保守性,設計并合成通用引物,提取細(真)菌DNA進行聚合酶鏈反應(PCR),采用2%瓊脂糖凝膠電泳(AGE)觀察擴增結果,并進行PCR靈敏性和特異性試驗。PCR結果與常規(guī)培養(yǎng)結果進行比較。用SPSS11.5 For Windows進行臨床資料數(shù)據(jù)分析。 結果：所有細菌PCR均得到預期約1500bp的擴增產(chǎn)物,該引物僅擴增細菌DNA,與病毒及人基因組DNA無交叉反應,其擴增下限為10CFU/ml大腸埃希菌。所有真菌PCR均得到預期約197bp的擴增產(chǎn)物,該引物僅擴增真菌DNA,與細菌及人基因組DNA無交叉反應,其擴增下限為10CFU/ml白色假絲酵母菌。106份不同類型標本中,常規(guī)培養(yǎng)陽性率為20.75%(22/106),其中細菌培養(yǎng)陽性率19.81%(21/106),真菌培養(yǎng)陽性率0.94%(1/106)；用PCR法檢測總陽性率為32.07%(34/106),其中細菌16SrRNA基因PCR陽性率28.30%(30/106),真菌18SrRNA基因PCR陽性率3.77%(4/106)；培養(yǎng)和PCR一致陽性率為18.87%(20/106)。PCR法優(yōu)于培養(yǎng)法(P0.05)。且其靈敏度為90.9%(20/22),特異度為83.33%(70/84)。只需6-8小時就可出結果,而培養(yǎng)方法則需3天。感染部位以腹腔最多,其次為呼吸道,再次為血液。 結論：以16SrRNA和18SrRNA基因為基礎的PCR法對診斷急性胰腺炎并發(fā)全身性感染有較高的快速性,敏感性及特異性。感染菌以大腸埃希菌和鮑曼不動桿菌為主。 目的：檢測急性胰腺炎患者血清降鈣素原的表達和意義,探討降鈣素原預測急性胰腺炎繼發(fā)細菌感染的臨床價值。 方法：選取第一部分入選急性胰腺炎患者其中的76例,(男51例,女25例,年齡14-72歲)。AP患者根據(jù)是否合并SIRS,分為非SIRS組(15例)和SIRS組,SIRS組再根據(jù)是否合并細菌感染分為SIRS組(53例)和膿毒癥組(8例),分別在入院1周時采集入選患者血清,并采集臨床指標CRP,用酶聯(lián)免疫吸附試驗方法(ELISA)測定血清PCT含量。應用SSPS11.5 for Windows軟件進行統(tǒng)計學處理。并根據(jù)第一部分PCR檢測結果比較CRP和PCT對于AP繼發(fā)感染的預測能力,繪制受試者工作特征曲線(ROC曲線) 結果：血清PCT定量酶聯(lián)免疫檢測結果顯示SIRS感染組患者PCT水平(2.68±0.84)ng/ml明顯高于非SIRS組(0.97±0.56)ng/ml和SIRS組(1.39±0.58),(P0.01)ng/ml(P0.01),但三組CRP值無顯著性差異(P0.05)。根據(jù)第一部分PCR檢測結果,繪制受試者工作特征曲線(ROC曲線),PCT(AUC=0.737,P=0.001)對感染的預測能力明顯強于CRP(AUC=0.703,P=0.004)。以2.0ng/ml為預測閾值其敏感性為74.1%,特異性為67.5%。 結論：PCT是AP繼發(fā)感染早期較好的預測和觀察指標。
【圖文】：

2、PCR特異性試驗結果:本試驗選用的引物僅擴增細菌DNA，與HBV-DNA和人基因組DNA無交叉反應，說明該引物擴增的產(chǎn)物僅針對細菌有陽性結果，具有高度特異性。見圖2。圖2:PCR特異性試驗· DNAMarker(1OO0bP);2、5空白對照;3、人基因組DNA;4、病毒DNA;、大腸埃希菌。3、PCR靈敏性試驗結果:取大腸埃希菌標準株檢測PCR擴增下限為 1OCFU/ml。見圖3。

臨床樣本PCR反應陽性:30份
【學位授予單位】：昆明醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R576

【參考文獻】

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本文編號：2679115