【摘要】：目的:通過構(gòu)建transwell上下雙層共培養(yǎng)體系,探討大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)旁分泌肝細(xì)胞生長因子(Hepatocyte Growth Factor,HGF)對肝星狀細(xì)胞(Hepatic Stellate Cells,HSCs)增殖、凋亡、活化的影響。方法:采用全骨髓貼壁法分離、培養(yǎng)、純化大鼠BMSCs,培養(yǎng)HSCs。6孔板半透膜建立上下兩層細(xì)胞非直接接觸共培養(yǎng)體系。實(shí)驗(yàn)設(shè)實(shí)驗(yàn)組(BMSCs與HSCs Transwell共培養(yǎng))、空白對照組(低糖培養(yǎng)基與HSCs共培養(yǎng))、陰性對照組(HSCs與HSCs共培養(yǎng))、c-met抑制劑組(BMSCs與HSCs Transwell共培養(yǎng)中加c-met抑制劑預(yù)處理)。在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,流式細(xì)胞儀鑒定BMSCs,免疫熒光共聚焦定量鑒定HSCs的活性后,各組細(xì)胞共培養(yǎng)48h,流式細(xì)胞儀檢測HSCs凋亡率,MTT法檢測HSCs的增殖,免疫熒光共聚焦定量檢測HSCs中α-SMA的表達(dá)量,酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)檢測各組共培養(yǎng)體系48h上清液中HGF的濃度。結(jié)果:1.倒置相差顯微鏡下觀察BMSCs呈成纖維形、三角形或不規(guī)則形,流式細(xì)胞儀檢測MSCs高表達(dá)陽性表面分子CD29、CD90,低表達(dá)造血細(xì)胞表面標(biāo)記物CD45;活化HSCs呈梭形,表達(dá)α-SMA;2.MTT結(jié)果顯示:與空白對照組、陰性對照組、c-met抑制劑組相比,實(shí)驗(yàn)組HSCs的增殖降低(P0.01);3.流式細(xì)胞儀檢測HSCs凋亡率:實(shí)驗(yàn)組中HSCs的凋亡率高于其他組,且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而空白對照組、陰性對照組、c-met抑制劑組之間的凋亡率無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);4.免疫熒光共聚焦結(jié)果定量后提示:與空白對照組、陰性對照組、c-met抑制劑組相比,實(shí)驗(yàn)組HSCs中α-SMA的表達(dá)量降低,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),而其他3組之間α-SMA的表達(dá)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);5.ELISA結(jié)果示:實(shí)驗(yàn)組上清液中HGF的濃度明顯高于其他組,且與其他組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:BMSCs可以通過旁分泌HGF促進(jìn)HSCs的凋亡,抑制HSCs的增殖、活化。
【圖文】：

大鼠P0代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察Figure1-1MorphologicalobservationofratP0generationbonemarrowmesenchymalstemcells

大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察Figure1-2Morphologyofratbonemarrowmesenchymalstemcellsa～f分別為P0、P1、P2、P3、P4、P5代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（×40）
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R575.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2659495