發(fā)布時(shí)間：2020-05-11 23:44

【摘要】： 研究背景： 胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1(insulin-like growth-factor binding protein-related protein 1, IGFBPrP1)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種可溶性分泌蛋白,導(dǎo)師劉立新已有的研究發(fā)現(xiàn)：在肝纖維化、肝硬化患者肝組織中IGFBPrP1的表達(dá)較正常對(duì)照組明顯增強(qiáng)[’]；在體外培養(yǎng)的肝星狀細(xì)胞(hepatocyte stellate cell, HSC)中加入IGFBPrP1可使其合成細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)增多；用抗IGFBPrP1抗體可逆轉(zhuǎn)由TGFβ1誘導(dǎo)的HSC產(chǎn)生的過(guò)多的Ⅰ型膠原(CollagenⅠ);抗IGFBPrP1抗體可通過(guò)抑制肝纖維化小鼠HSC的活化、減少ECM的主要成分CollagenⅠ與纖維連接蛋白(fibronectin, FN)的合成及減少肝細(xì)胞的凋亡等途徑發(fā)揮抗纖維化作用。以上研究結(jié)果表明IGFBPrP1可能是肝纖維化發(fā)生機(jī)制中新的致病因子。 那么,IGFBPrP1是否對(duì)肝臟具有直接的致纖維化作用呢?其作用機(jī)制為何?目前尚無(wú)研究報(bào)道。為了闡明此問(wèn)題,設(shè)計(jì)了本課題。 目的： 明確外源性胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1(IGFBPrP1)對(duì)在體肝組織的影響,并探討其可能的機(jī)制。 方法： 24只雄性C57BL／6野生型小鼠隨機(jī)分為3組：正常對(duì)照組(8只),腹腔注射等量磷酸鹽緩沖液；rmIGFBPrP1 2周組(8只),腹腔注射rmIGFBPrP1,0.015mg/kg,每周7次,持續(xù)2周；rmIGFBPrP1 4周組(8只),腹腔注射rmIGFBPrP1,0.015mg/kg,每周7次,持續(xù)4周。分別在第2周、4周末處死小鼠。(1)取肝組織,肉眼觀察肝組織大體形態(tài)；(2)分別對(duì)肝組織石蠟切片做HE染色和苦味酸-天狼猩紅染色觀察肝組織病理變化及膠原纖維形成情況；(3)免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)肝組織中Ⅲ型膠原(CollagenⅢ)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1 (transforming growth factorβ1, TGFβ1)、Smad3及p-Smad2/3的表達(dá)；(4)Western blot檢測(cè)肝組織中IGFBPrP1、纖維連接蛋白(Fibronectin, FN)、Ⅰ型膠原(CollagenⅠ)、TGFβ1、Smad3及p-Smad2/3的相對(duì)表達(dá)量,并進(jìn)行IGFBPrP1與其他各指標(biāo)的相關(guān)性分析。 結(jié)果： (1)苦味酸-天狼猩紅染色分析結(jié)果：肝組織中膠原含量在rmIGFBPrP1 2周組較正常對(duì)照組明顯增多,rmIGFBPrP1 4周組較2周組明顯增多(0.45%±0.15% vs 0.21%±0.11%,1.02%±0.33% vs 0.45%±0.15%,P0.05)。 (2)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示：rmIGFBPrP1 2周組及4周組肝組織中CollagenⅢ、TGFβ1、Smad3及p-Smad2/3的表達(dá)均較正常對(duì)照組顯著增強(qiáng),且4周組上述蛋白表達(dá)量較2周組高(CollagenⅢ:F=221.858, P0.01; TGFβ1:F=280.571, P0.01; Smad3: F=292.114, P0.01; p-Smad2/3:F=114.251, P0.01)。 (3) Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示：rmIGFBPrP1 2周組及4周組肝組織中IGFBPrP1、CollagenⅠ、FN、TGFβ1、Smad3及p-Smad2/3的表達(dá)均較正常對(duì)照組顯著增強(qiáng),且4周組強(qiáng)于2周組(F=20.136、F=6.029、F=17.282、F=7.484、F=20.957、F=87.713,P0.01)。肝組織中IGFBPrP1的表達(dá)變化與FN (r=0.890, P0.01)、CollagenⅠ(r=0.921,P0.01)、TGFβ1 (r=0.726, P0.01)、Smad3 (r=0.977, P0.01)及p-Smad2/3 (r=0.809, P0.01)的表達(dá)變化呈正相關(guān)。 結(jié)論： (1)外源性IGFBPrP1可通過(guò)增加細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分CollagenⅠ,Ⅲ及FN的含量,導(dǎo)致肝組織中ECM過(guò)度沉積,對(duì)肝臟有直接的致纖維化作用。 (2)外源性IGFBPrP1對(duì)肝臟的致纖維化作用是通過(guò)TGFβ1/Smad3信號(hào)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
【圖文】：

觀察離體肝組織:正常對(duì)照組小鼠肝組織色澤紅潤(rùn)，表面光滑，質(zhì)柔軟。n刀IGFBPrPI4周組小鼠肝組織色澤蒼白，體積略縮小，質(zhì)地略脆。n刀IGFBPrP12周組肝組織病理改變介于兩者之間(見(jiàn)圖1一1)。

n刀IGFBPrP14 rmIGFBPrP12周組病變較輕，匯管區(qū)周圍有細(xì)胞變性及炎細(xì)胞浸潤(rùn)。周組大量肝細(xì)胞脂肪變性，且有少量肝細(xì)胞核碎裂壞死。(見(jiàn)圖2一1)。A:正常對(duì)照組B:rmIGFBPrP12周組C:rmIGFBPrP14周組圖2一1:各組小泉肝組織中RE染色 x400倍3.苦味酸一天狼猩紅染色結(jié)果該染色方法使膠原在普通顯微鏡下呈紅色。正常對(duì)照組小鼠肝組織僅匯管區(qū)和肝門靜脈周圍有少許紅色膠原纖維存在。肝組織中膠原含量在rmIGFBPrP12周組較正常對(duì)照組明顯增多，nn1GFBPrP14周組較2周組明顯增多(0.45%士0.巧 %vs0.21%士0.n%，1.02%士 0.33%vs0.45%士0.15%，P<0.05，，見(jiàn)圖3一l)。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R575.2

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 劉毅;劉立新;郭曉紅;張騫騫;;IGFBP-rP1對(duì)肝星狀細(xì)胞活化及核因子-κB活性的影響[J];中國(guó)病理生理雜志;2008年09期

2 田小霞;秦桂秀;

本文編號(hào)：2659254