發(fā)布時間：2020-05-05 14:54

【摘要】： 近年來隨著人們生活方式和飲食結(jié)構(gòu)的改變,非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的患病率日益增高,成為導致慢性肝病的重要原因之一,構(gòu)成日益嚴重的社會健康問題。NAFLD包括一系列相互聯(lián)系的病理改變,從單純性脂肪肝、脂肪性肝炎,到肝纖維化和肝硬化,甚至可以進展為肝細胞癌。目前認為,NAFLD與肥胖、糖尿病、高脂血癥等代謝綜合征密切相關(guān),而高脂飲食是引起肥胖及其相關(guān)并存癥高發(fā)的重要原因。攝入含過多飽和脂肪的食物可以直接導致肝細胞的脂肪浸潤及氧化損傷,但其確切的分子機制尚未明確。用高脂飼料喂養(yǎng)SD大鼠可以成功復制不同病變程度的NAFLD動物模型。本研究采用蛋白質(zhì)組學的技術(shù)手段,系統(tǒng)分析了高脂飲食相關(guān)的NAFLD發(fā)生發(fā)展過程中肝臟蛋白質(zhì)表達譜的動態(tài)變化,發(fā)掘了一批與NAFLD疾病進程密切相關(guān)的功能蛋白質(zhì)群,結(jié)合生物信息學手段系統(tǒng)分析差異蛋白的功能和調(diào)控網(wǎng)絡(luò),從而為深入探討NAFLD發(fā)生發(fā)展的分子機制奠定了基礎(chǔ)。 用高脂飼料喂養(yǎng)SD大鼠4周、12周和24周,肝臟病理分別表現(xiàn)為肝細胞脂肪變性、脂肪變性伴炎癥細胞浸潤,以及脂肪變性伴炎癥細胞浸潤及輕度纖維化,分別與NAFLD的單純性脂肪肝(SS),脂肪肝合并非特異性炎癥(NSI)及脂肪性肝炎(NASH)這三個階段的病理表現(xiàn)相似。隨后,我們利用差異凝膠電泳技術(shù)(DIGE)分析了不同造模時間的正常組和模型組大鼠肝臟蛋白質(zhì)表達譜的差異,所得到的差異蛋白質(zhì)點用MALDI-TOF/TOF質(zhì)譜儀進行檢測,共鑒定了95個差異蛋白,其中SS階段的差異蛋白53個,NSI階段的差異蛋白42個,NASH階段的差異蛋白49個。這些差異蛋白在功能上具有明顯的階段特異性。其中參與脂肪酸氧化的酶在SS階段明顯下調(diào),可能是造成該階段肝細胞脂肪變性的重要原因;多個參與線粒體呼吸鏈和氧化磷酸化的酶在NSI階段表達下調(diào),提示線粒體功能障礙在這一階段的重要作用;最后在NASH階段,多個細胞骨架蛋白的表達都明顯上調(diào),很可能與該階段肝細胞的結(jié)構(gòu)和功能紊亂相關(guān)。進一步對這些差異蛋白進行相互作用網(wǎng)絡(luò)的分析發(fā)現(xiàn),多個差異蛋白的表達受到PPARα和C/EBPα這兩個轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控,隨后我們通過Western blot方法檢測到PPARα在疾病的三個階段都明顯下調(diào),而C/EBPα在SS和NSI階段明顯上調(diào),提示這兩個轉(zhuǎn)錄因子在NAFLD的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。此外,我們還發(fā)現(xiàn)4個內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶(PDI,PDIA3,GRP78和ERp29)在進展期NSI和NASH階段明顯上調(diào)。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶表達上調(diào)是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激的一個重要特點,資料顯示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激在肥胖、2型糖尿病等代謝性疾病中均發(fā)揮了重要作用,為此推測,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能紊亂所造成的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激是促使NAFLD病程進展的一個重要因素。上述研究結(jié)果為進一步闡明NAFLD發(fā)生發(fā)展的分子機制,發(fā)現(xiàn)分期分型診斷標志物和潛在的藥物靶點奠定了基礎(chǔ)。
【圖文】：

—暴一目前NAFLD發(fā)生發(fā)展的分子機制尚未完全明確。目前最具影響力的假說是由D盯在1995年提出的“二次打擊”學說“:由于胰島素抵抗(insulin:esistant，，IR)，引起外周脂肪分解和高胰島素血癥，導致肝細胞脂肪變性，此為一次打擊;脂肪變性的肝細胞對內(nèi)、外源性損害因子的敏感性增強，反應性氧化代謝產(chǎn)物增多，導致脂質(zhì)過氧化，伴細胞因子、線粒體解偶聯(lián)蛋白一2和Fas配體的誘導活化，進而引起脂肪變性的肝細胞發(fā)生炎癥和壞死，此為二次打擊;除非能及時阻止炎癥一壞死循環(huán)，否則將進一步進展為肝纖維化和肝硬化。(圖1)7�？傊�，NAFLD的發(fā)生發(fā)展是一個多因素多步驟的復雜過程，具體涉及以下三個方面:

斷碑甲幽助內(nèi):0..甲朋幽時”圖3.2一 DDIGE技術(shù)的工作原理樣本用不同的熒光染料(CyZ，Cy3，Cys)進行標記，等量混合后在一張膠上進行分離(圖3)。由于一張膠上可以同時分離三個樣品，大大減少了分析膠的數(shù)量，同時也減少了不同膠之間的匹配問題，使重復性提高。其次，由于在每張膠中都引入了由所有樣品等量混合而成的內(nèi)標，提高了每張膠之間對比的準確性，解決了傳統(tǒng)2一DE技術(shù)膠與膠之間變異大的問題”。此外，cy熒光染料具有較好的靈敏度和動態(tài)范圍
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R575.5

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 嚴廣斌;;蛋白質(zhì)組學[J];中華關(guān)節(jié)外科雜志(電子版);2011年04期

2 張莉;;蛋白質(zhì)組學在中藥研究中的應用[J];內(nèi)蒙古中醫(yī)藥;2010年14期

3 馬鵬;余開煥;任俊;宋ng;汪逵;;蛋白質(zhì)組學在胰腺炎研究中的應用[J];職業(yè)與健康;2011年16期

4 齊連芬;李川潔;胡元會;;蛋白質(zhì)組學技術(shù)在高血壓領(lǐng)域的應用[J];中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志;2011年09期

5 李暉;楊曉冬;李曉林;田德英;;六味五靈片治療非酒精性脂肪性肝病31例[J];中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志;2011年03期

6 廖柏明;;腺苷蛋氨酸治療非酒精性脂肪性肝病療效觀察[J];肝臟;2011年04期

7 牛yN明;楊帆;;疏肝健脾益腎方治療非酒精性脂肪性肝病的療效觀察[J];湖北中醫(yī)雜志;2011年07期

8 欒力;程玉峰;;蛋白質(zhì)組學技術(shù)在宮頸癌研究中的應用進展[J];基礎(chǔ)醫(yī)學與臨床;2011年07期

9 郁夏風;劉錦紛;;蛋白質(zhì)組學與先天性心臟病形成機制的研究現(xiàn)狀[J];臨床兒科雜志;2011年07期

10 李亞東;張賽;;腦脊液蛋白質(zhì)組學技術(shù)在顱腦創(chuàng)傷研究中的應用[J];武警醫(yī)學院學報;2011年07期

相關(guān)會議論文 前10條

1 陳華;唐福林;姚志建;;運用蛋白質(zhì)組學技術(shù)對Sa抗原的研究[A];第十屆全國風濕病學學術(shù)會議論文集[C];2005年

2 張養(yǎng)軍;應萬濤;劉科輝;蔡耘;朱云平;賀福初;錢小紅;;用于蛋白質(zhì)組學技術(shù)評價的標準蛋白質(zhì)試驗設(shè)計與樣本制備[A];中國蛋白質(zhì)組學第三屆學術(shù)大會論文摘要[C];2005年

3 何春滌;朱紅;周海濤;陳洪鐸;;蛋白質(zhì)組學主要技術(shù)及其在皮膚科學研究中的應用——HaCaT細胞和人皮膚鱗狀細胞癌細胞系SCL-1細胞蛋白質(zhì)組的差異蛋白的研究[A];中華醫(yī)學會第十二次全國皮膚性病學術(shù)會議論文集[C];2006年

4 張雷;王s

本文編號：2650325