【摘要】：目的:探索簡便、高效和穩(wěn)定的胰腺腺泡分離、純化的新方法,并進行培養(yǎng)和形態(tài)學觀察,探討不同方法對細胞功能的影響。 方法:18只SD大鼠隨機分成改進方法組和傳統(tǒng)方法(內(nèi)灌注法)組,戊巴比妥腹腔麻醉后,改進方法組采用改進方法迅速切取并剪碎胰腺組織后置于新鮮配制的細胞分離液中,置入旋轉水浴槽37℃,120r/min攪動20分鐘消化沉降,過濾獲得細胞懸液,D-Hanks液(不含鈣離子的Hanks液)清洗后獲得胰腺腺泡細胞,離心收集后培養(yǎng);傳統(tǒng)方法組采用內(nèi)灌注法獲取胰腺腺泡細胞。然后進行形態(tài)學觀察、細胞計數(shù)、細胞存活率測定、純度鑒定、細胞內(nèi)鈣離子及胰腺腺泡細胞培養(yǎng)上清液中淀粉酶測定。 結果:兩種方法分離新鮮的大鼠胰腺腺泡細胞鏡下均呈葡萄樣聚集,單個胰腺細胞呈球形,少量細胞形狀不規(guī)則,培養(yǎng)數(shù)4小時后細胞分散均相對均勻。電鏡下新鮮分離的細胞可見胰腺腺泡細胞典型超微結構,大量的酶原顆粒(zymogen granules,Z)和豐富的粗面內(nèi)質網(wǎng)(endoplasmic reticulum,RER);培養(yǎng)12h后雖然可見酶原顆粒減少,但仍然可見大量的酶原顆粒和粗面內(nèi)質網(wǎng);在培養(yǎng)的腺泡細胞內(nèi)可見一些細胞器的微小碎片。改進方法所獲得的胰腺腺泡產(chǎn)率(細胞數(shù)量)為(5.0±0.27)×10~6/g胰腺,純度為(81.11±2.15)%,與傳統(tǒng)方法所獲得的胰腺腺泡數(shù)量(4.8±0.49)×10~6/g胰腺,純度(80.89±3.98)%相比較無統(tǒng)計學意義( P0.05);而細胞存活率為(91.33±1.80)%顯著高于傳統(tǒng)方法(83.56±4.69)%,(P0.05);細胞內(nèi)鈣離子濃度為(3.71±0.42)μmol/L顯著低于傳統(tǒng)方法組(5.29±0.30)μmol/L,( P0.05 );改進法所獲得的胰腺腺泡細胞培養(yǎng)上清液中淀粉酶在培養(yǎng)后1h、4h、10h的含量分別為(315.65±15.65)U/L、(836.84±52.69)U/L、(1621.25±158.58)U/L,顯著高于傳統(tǒng)方法同時間點(283.92±19.45)U/L、(621.71±42.34)U/L、(1406.06±151.38)U/L的含量(P0.05)。 結論:改進方法是一種簡便、穩(wěn)定、高效且對細胞活力及外分泌功能影響較小的胰腺腺泡細胞分離提純方法。
【圖文】：

圖 5 分離后 2h 大鼠胰腺腺泡細胞(x40) 圖 6 分離后 10h 分散開的大鼠胰腺腺泡細胞(x40)FIG.5. Rat acinar cells after 2 hours that be isolated (x40). FIG. 6. Rat acinar cellsafter 10 hours that be isolated (x40).

圖 8 分離 12h 后的胰腺腺泡細胞 ×6700（電子顯微鏡）。藍色箭頭所示為酶原顆粒。紅色箭頭所示為粗面內(nèi)質網(wǎng)。黑色箭頭所示為細胞器微小碎片。FIG. 8. Cultured pancreatic acinar cell. ×6700 . Electron micrograph of pancreaticacinar cells cultured for12h. Blue arrowhead indicates zymogen granule. Redarrowhead indicates rough endoplasmic reticulum. Black arrowhead indicates cellular
【學位授予單位】：廣東藥學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R576

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本文編號：2649167