【摘要】：原發(fā)性膽汁性膽管炎(Primary biliary cholangitis,PBC),又稱原發(fā)性膽汁性肝硬化(Primary biliary cirrhosis),是以膽汁淤積為主要臨床表現(xiàn)的自身免疫性肝病。膽管上皮細(xì)胞既是遭受免疫破壞的靶細(xì)胞,又在PBC發(fā)展中起著免疫調(diào)節(jié)作用。目前首選熊去氧膽酸(Ursodeoxycholic acid,UDCA)治療,但仍有30%左右患者對(duì)UDCA應(yīng)答不良。中醫(yī)藥在本病的研究上還處于百家爭(zhēng)鳴的狀態(tài)。本課題回顧近年來(lái)PBC中外研究進(jìn)展,開(kāi)展了當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)UDCA應(yīng)答不良的PBC細(xì)胞免疫機(jī)制方面的研究。目的:探討當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞遷移、增殖、凋亡的影響,并進(jìn)一步探討可能的機(jī)制。方法:高速離心法制備當(dāng)歸補(bǔ)血湯原液,以培養(yǎng)基稀釋后培養(yǎng)人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞。采用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)膽管上皮細(xì)胞遷移能力的影響;CCK-8法檢測(cè)當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)膽管上皮細(xì)胞增殖能力的影響;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)膽管上皮細(xì)胞凋亡的影響;LDH釋放法檢測(cè)當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)PBC患者外周血CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)的膽管上皮細(xì)胞損傷的影響;實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)膽管上皮細(xì)胞中CCN1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果:在當(dāng)歸補(bǔ)血湯的干預(yù)下,與空白對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞遷移和增殖能力增強(qiáng)(P0.05),凋亡率無(wú)明顯減少(P0.05),且能減輕PBC患者外周血CD8+T細(xì)胞對(duì)HiBEC的細(xì)胞毒性(P0.01),增加膽管上皮細(xì)胞中CCN1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量(P0.01)。結(jié)論:當(dāng)歸補(bǔ)血湯可以通過(guò)調(diào)控CCN1蛋白的表達(dá)促進(jìn)膽管上皮細(xì)胞增殖遷移,以減輕免疫介導(dǎo)的膽管損傷。
【圖文】：

運(yùn)用ＣＣＫ８檢測(cè)細(xì)胞增殖力，經(jīng)不同濃度當(dāng)歸補(bǔ)血湯及ＣＣＮ１刺激ＨｉＢＥＣ后，Ｏｈ各組間差異逡逑無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（／＾Ｏ．邋０５），而２４小時(shí)、４８小時(shí)、７２小時(shí)后，與空白對(duì)照組比，實(shí)驗(yàn)組０Ｄ逡逑值明顯上升，結(jié)果如圖２所示，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（／＞＜０．邋０５）。逡逑２．０－，邋ＢＬＡＮＫ逡逑２ｇ／Ｌ邋＊邐＊邋＊逡逑＋邋４ｇ／Ｌ邋＃邐ｊｉ逡逑０．０－１邐１邐１邐１——逡逑０邐２４邐４８邐７２逡逑Ｔｉｍｅ（ｈ）逡逑圖２當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)ＨｉＢＥＣ增殖的影響。當(dāng)歸補(bǔ)血湯組與空白對(duì)照組折線圖（＊／Ｘ０．０５，逡逑＊＊／＊＜０？邋０１，＊＊＊７Ｘ０．邋００１，＊＊＊＊Ｐ＜0．邋０００１，邋＃同＊）。逡逑１．３．邋３當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)Ｈ邋ｉ邋ＢＥＣ凋亡的影響逡逑運(yùn)用流式細(xì)胞技術(shù)，經(jīng)不同濃度當(dāng)歸補(bǔ)血湯刺激ＩＨＢＥＣ后檢測(cè)細(xì)胞凋亡，結(jié)果如圖３所示，逡逑與空白對(duì)照組比，實(shí)驗(yàn)組比空白對(duì)照組有減少趨勢(shì)，但統(tǒng)計(jì)學(xué)無(wú)明顯差異（戶＞0．邋０５）。逡逑Ａ邋４邋＊１邐Ｂ邋■？邋＂５邐Ｃ邋－Ｉ邋＂１逡逑１０邋？邋Ｑ１邐Ｑ２邐１０邋４0１邐０２邐１０邋；邋０１邐Ｑ７逡逑■邋６邋５２邐２．８０邐ｊ邋５．０４邐３１０邐７邋３？邐？６５逡逑１。３邋■邐ｉｄ３邋＂ｊ邐ｉ0Ｊ邋１逡逑０邋１８７邋８＾邐２．９０邐0邋＊８．４邋＾邐２．６４邐�？ǎ峰澹插澹孢姡插澹福板义�，0邐￣ｔ－ｔ邋－ｍ，￣？—ｒ－ｒ－ｒｍ＾邋，0邐＿邋■邋Ｉ＇ｌＰ＾邋＇邋＇邋Ｉ邋ｍ＂｜邋邋邋邋邋邋Ｊ邋Ｗ邋－＾■￥N；．．Ｉ邋．ｉ邋■邋￣■丨＂＇

根據(jù)ＬＤＨ釋放計(jì)算ＴＯＣ患者ＣＤ８＋Ｔ細(xì)胞對(duì)不同濃度當(dāng)歸補(bǔ)血湯處理的ＨｉＢＥＣ的細(xì)胞毒性。逡逑因個(gè)體差異，不同患者ＣＤ８＋Ｔ細(xì)胞對(duì)ＨＷＥＣ的細(xì)胞毒性存在差異，故選取其中一個(gè)患者，逡逑結(jié)果如圖４所示，其結(jié)果符合總體趨勢(shì)。與空白組對(duì)比，實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞毒性明顯減輕，差逡逑異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜0．邋０１）。逡逑＿邋＿邋＊★逡逑８０１邋Ｉ邋邋邐１逡逑置邐■逡逑卜ｊ邐ｉ逡逑ｏＷ＿＿，邐邐逡逑／，，逡逑圖４當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)ＰＢＣ患者ＣＤ８＋Ｔ細(xì)胞介導(dǎo)的ＨｉＢＥＣ細(xì)胞毒性的影響。ＬＤＨ釋放法檢測(cè)逡逑ＰＢＣ患者外周血ＣＤ８＋Ｔ細(xì)胞對(duì)ＨｉＢＥＣ的細(xì)胞毒性柱狀圖（＊＊Ｐ＜０．邋０１，＊＊＊Ｐ〈０．邋００１）逡逑１．３．邐５經(jīng)當(dāng)歸補(bǔ)血湯處理后ＨｉＢＥＣ中ＣＧＮ１的相對(duì)表達(dá)量逡逑運(yùn)用ｑＲＴ－ＰＣＲ技術(shù)檢測(cè)經(jīng)當(dāng)歸補(bǔ)血湯處理后ＨｉＢＥＣ中ＣＣＮ１的相對(duì)表達(dá)量，結(jié)果如圖５所逡逑示，，與空白組對(duì)比，實(shí)驗(yàn)組ＣＣＮ１的相對(duì)表達(dá)量明顯上升，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（尸＜０．０１）。逡逑Ｃ逡逑0逡逑Ｓ邋２－°１逡逑￡邋＊＊逡逑泛邋１５＿邐邋１逡逑０）邐—ｊ—逡逑Ｑ）邐里逡逑卜Ｊ｜逡逑°邋／邋／逡逑圖５經(jīng)當(dāng)歸補(bǔ)血湯處理后ＨｉＢＥＣ的ＣＣＮ１的相對(duì)表達(dá)量柱狀圖（林／ＸＯ．邋０１）逡逑１．３．邐６邋ＣＣＮ１對(duì)ＨｉＢＥＣ遷移力的影響逡逑２邋０逡逑
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R575.7

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本文編號(hào)：2642879