【摘要】：非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是一種遺傳—環(huán)境—代謝應激相關性疾病,它可以進展為肝纖維化、肝硬化甚至肝癌等終末期肝病的疾病。其發(fā)病機制至今尚未完全闡明,一般認為氧化應激及脂質(zhì)過氧化損傷是促進脂肪變的肝臟發(fā)生炎癥、壞死和纖維化的關鍵因素。因此,臨床上應以氧化應激作為靶點來研究和開發(fā)治療NASH的藥物,但今尚無確切療效的藥物。一些傳統(tǒng)的中藥單體在治療氧化應激相關性疾病方面表現(xiàn)出令人驚異的治療效果。黃芩苷(BA)、苦參堿(MT)、小檗堿均(BE)作為其中的佼佼者,具有抗炎、抗氧化、抗纖維化、調(diào)節(jié)免疫機能等作用。近年發(fā)現(xiàn)肝型脂肪酸結合蛋白(L-FABP)是一種有效的內(nèi)源性抗氧化物,有望被開發(fā)成抗氧化應激的新靶點。本研究旨在通過建立動物模型觀察黃芩苷、苦參堿、小檗堿治療NASH的療效并研究三種中藥單體對L-FABP的影響；通過體外氧化應激模型進一步探討黃芩苷、苦參堿、小檗堿對L-FABP作用及其可能分子機制。研究方法及結果如下： 1、動物實驗 建立高脂誘導NASH大鼠模型,給予BA30mg/kg/d, MT36mg/kg/d, BE18mg/kg/d灌胃治療3周,結果發(fā)現(xiàn)經(jīng)上述三中藥單體治療后能減輕NASH大鼠的體重,但對肝重無影響。肝組織病理學顯示三種中藥單體能緩解肝細胞脂肪變性,改善炎性細胞浸潤、灶狀壞死和肝細胞氣球樣變。血清ALT、AST降低；肝組織SGH、SOD活性升高,MDA減少。Realtime PCR檢測發(fā)現(xiàn)BA、MT、BE對大鼠肝組織中L-FABP mRNA表達無影響。Western blotting檢測發(fā)現(xiàn)BA、MT能升高大鼠肝組織L-FABP蛋白水平,而BE對L-FABP蛋白水平無影響。 2、體外實驗 建立H2O2誘導活性氧(ROS)產(chǎn)生的氧化應激體外模型,構建過表達L-FABP質(zhì)粒,并轉(zhuǎn)染至Chang肝細胞,流式細胞技術檢測過表達L-FABP后,細胞內(nèi)ROS含量明顯減少。MTT法篩選出120μ mol/L以下的BA、67.8μ mol以下的MT、78.2μ mol/L以下的BE持續(xù)作用48h內(nèi)為安全有效濃度。流式細胞技術和Confocal觀察細胞內(nèi)ROS含量,證實50μ mol BA、32μ mol MT、50μ mol BE持續(xù)作用48h后減少ROS含量效果最為明顯。檢測肝細胞內(nèi)SOD、GSH、CAT的活性,發(fā)現(xiàn)50μ mol BA、32μ mol MT、50μ mol BE持續(xù)作用48h后能增加細胞內(nèi)SOD、GSH的活性,減少LDH的產(chǎn)生,但對CAT的活性沒有影響。Realtime-PCR檢測顯示BA、MT、BE不能影響L-FABP mRNA的表達,但BA、MT能升高L-FABP蛋白的水平,而BE對體內(nèi)L-FABP蛋白水平無影響。隨后分別加入蛋白質(zhì)合成抑制劑放線菌酮(CHX)和蛋白酶體降解抑制劑MG132,結果發(fā)現(xiàn)加入CHX繼續(xù)培養(yǎng)后L-FABP蛋白水平降低,而MG132處理后L-FABP蛋白水平增加明顯。 結論：以上研究結果顯示黃芩苷、苦參堿、小檗堿對NASH大鼠有顯著治療作用。黃芩苷、苦參堿可能通過增強細胞內(nèi)SOD、GSH的活性,還可能通過提高體內(nèi)L-FABP的水平發(fā)揮抗氧化作用。其機制可能是通過增加該蛋白的穩(wěn)定性,減少該蛋白的降解來維持細胞內(nèi)L-FABP高水平。小檗堿可通過增強細胞內(nèi)SOD、GSH的活性發(fā)揮抗氧化作用,但對體內(nèi)L-FABP的水平無影響。
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R285.5;R575.1

【參考文獻】

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1 中華醫(yī)學會肝病學分會脂肪肝和酒精性肝病學組;;酒精性肝病診療指南[J];中國肝臟病雜志(電子版);2010年04期

2 段曉燕;范建高;;日本東京2010非酒精性脂肪性肝炎專題報道[J];胃腸病學和肝病學雜志;2011年01期

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本文編號：2641235