【摘要】： 第一部分大鼠骨髓間充質干細胞的分離、培養(yǎng)及其鑒定 目的分離、培養(yǎng)、純化大鼠骨髓間充質干細胞;并通過流式細胞儀技術對其進行鑒定。 方法采用全骨髓細胞貼壁培養(yǎng)篩選法分離純化大鼠MSCs。分析培養(yǎng)過程中細胞出現(xiàn)的分化表型,判斷是否為MSCs。 結果大鼠MSCs呈梭形,漩渦狀方式生長,應用流式細胞技術檢測MSCs表型:CD90.1高表達(99.2%),CD29高表達(98.9%),CD34低表達(0.5%),CD45低表達(0.9%)�？赏茰y培養(yǎng)的細胞為MSCs。 結論采用全骨髓貼壁篩選法可以成功分離培養(yǎng)出高純度大鼠MSC。 第二部分骨髓間充質干細胞移植治療大鼠肝功能衰竭 目的采用MSC尾靜脈移植治療肝衰竭大鼠,并且與模型對照組及正常對照組進行比較,觀察各組大鼠的肝功能、生存率、MSCs的歸巢情況、肝組織病理改善情況、TNF-α水平。 方法將按第一部分方法培養(yǎng)出的大鼠MSCs用DAPI進行標記;采用CCL4灌胃的方法制作大鼠暴發(fā)性肝功能衰竭模型,分為實驗組和模型對照組,空白對照組大鼠灌服生理鹽水;將標記的細胞經尾靜脈移植入實驗組和正常對照組,模型對照組尾靜脈注射等量的生理鹽水;實驗組與模型對照組進行比較,持續(xù)觀察并記錄2組大鼠一般狀況、生存率等情況,分別于術后7d、14d處死兩組大鼠,檢測肝功能及肝臟病理變化,ELISA法檢測TNF-α水平;冰凍切片后熒光顯微鏡下觀察MSCs歸巢至肝臟的情況,并與正常對照組比較。 結果DAPI可成功標記MSCs,細胞標記效率達98%;造模后大鼠24小時內逐漸進入肝衰竭狀態(tài),表現(xiàn)為拒食,活動明顯減少,萎靡、嗜睡或逐漸發(fā)展為昏迷狀態(tài),對外界刺激反應較遲鈍或至無反應,全身毛蓬松,尿失禁,尿色深黃,便溏,解剖發(fā)現(xiàn)中毒性鼓腸,皮下或粘膜下有出血點;生化檢查發(fā)現(xiàn)肝功能嚴重損害,組織學檢查顯示肝細胞大片壞死、大量炎性細胞浸潤;從移植術后3d開始,實驗組存活大鼠一般情況比模型對照組好轉更加明顯,移植術后7d時,實驗組與模型對照組比較,ALT指標、生存率、TNF-α水平均具有統(tǒng)計學差異(P0.05),病理切片炎癥改善情況實驗組更為明顯;移植術后14d時實驗組與模型對照組比較,肝功能指標、生存率、TNF-α水平均具有統(tǒng)計學差異(P0.05),病理切片炎癥改善情況實驗組更為明顯;移植術后7d及14d,實驗組MSC歸巢細胞逐漸增多,空白對照組只觀察到很少量歸巢細胞。 結論骨髓間充質干細胞(MSC)經尾靜脈同種異體移植,可以歸巢到肝衰竭大鼠肝臟,能夠促進急性肝衰竭大鼠肝功能的恢復,減輕肝臟組織炎癥壞死和免疫狀況,促進肝臟組織修復,對急性肝功能衰竭具有明顯的治療作用。
【圖文】：

無菌操作取脛骨和股骨

大鼠全骨髓細胞懸液（×200）
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R575.3

【參考文獻】

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本文編號：2614105