【摘要】：目的吡嗪酰胺是一種抗結核藥物,在抗結核治療過程中可引起患者肝臟及腸黏膜屏障損傷;益生菌是一類對機體有益的活的微生物。本研究擬探討益生菌(干酪乳桿菌,Lc S)補充對吡嗪酰胺致大鼠肝臟及腸黏膜損傷的影響,為合理應用益生菌改善抗結核藥物不良反應提供參考依據(jù)。方法將40只成年雄性SD大鼠隨機分為正常對照組(C組)、吡嗪酰胺組(L0組)、低劑量Lc S組(L1組)、高劑量Lc S組(L2組)。L0組、L1組和L2組均先給予吡嗪酰胺處理,以建立肝損傷模型;L0組為陽性藥物組,1小時后給予生理鹽水10m L·kg-1·d-1灌胃;L1組和L2組大鼠1小時后分別給予10 m L·kg-1·d-1和20 m L·kg-1·d-1干酪乳桿菌(Lc S)(108 CFU·m L-1)灌胃;C組以等體積生理鹽水灌胃;持續(xù)10周。HE染色觀察各組大鼠肝臟及結腸組織病理學變化,并對肝臟進行組織病理學評分;速率法檢測各組大鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)水平;蛋白質(zhì)印跡法檢測結腸緊密連接蛋白Occludin和ZO-1表達水平;實時熒光定量PCR技術對大鼠糞便中的雙歧桿菌、乳酸桿菌及大腸桿菌16Sr DNA V3可變區(qū)進行定量分析;酶聯(lián)免疫吸附法測定結腸分泌型免疫球蛋白A(s Ig A)、β-防御素-2(βD-2)水平,血清及結腸脂多糖(LPS)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)、白細胞介素-10(IL-10)、白細胞介素-12(IL-12)水平。結果經(jīng)吡嗪酰胺處理10周后,L0組大鼠HE染色切片顯示肝細胞中度水腫,出現(xiàn)明顯的氣球樣變并伴有炎性細胞浸潤,組織病理學評分達到3.20分,血清ALT及AST水平顯著高于C組,顯示肝損傷造模成功。大鼠結腸隱窩深度、上皮杯狀細胞比例、結腸緊密連接蛋白Occludin和ZO-1表達水平、s Ig A水平均顯著降低;βD-2水平升高了48.1%;在干預第6周末,大鼠糞便內(nèi)大腸桿菌數(shù)量明顯升高,雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量明顯降低,結果顯示吡嗪酰胺對大鼠腸黏膜造成損傷。大鼠血清及結腸LPS、TNF-α、IL-6、IL-12水平均較高(P0.05),血清及結腸IL-10水平較低。經(jīng)過不同劑量的益生菌干預10周后,L1組和L2組大鼠肝小葉結構均較L0組得到明顯改善,病理學評分分別降低到0.40分和0.30分,血清ALT和AST水平分別降低到73.10 U/L,73.60 U/L和150.50 U/L,143.80 U/L,顯著低于L0組的95.90U/L和188.60 U/L,提示補充益生菌可以改善肝損傷。結腸隱窩深度分別增加了41.5%和59.7%,βD-2水平明顯降低,s Ig A水平升高。L2組大鼠上皮杯狀細胞比例升高了7.6%,結腸緊密連接蛋白Occludin和ZO-1表達量分別升高了59.7%和97.9%,在干預第6周末及干預第10周末,雙歧桿菌和乳酸桿菌的量明顯升高,大腸桿菌的量明顯降低,提示益生菌可以改善大鼠腸黏膜屏障損傷。L1組和L2組大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-12水平均明顯降低,IL-10水平均達到了L0組的1.2倍;結腸LPS、IL-6、IL-12水平均降低(P0.05),IL-10水平均明顯升高。L2組大鼠血清LPS水平較L0組降低了26.2%,結腸TNF-α水平較L0組降低了55.4%。結論吡嗪酰胺可導致大鼠肝臟、腸道菌群及腸黏膜損傷,益生菌通過調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡、促進緊密連接蛋白表達及提高腸黏膜免疫力對腸黏膜屏障損傷具有一定的改善作用,并通過“肝腸軸”,進一步對肝臟損傷具有一定的改善效果。
【圖文】：

7圖 1.1 干預期間各組大鼠體重變化情況注：C 組：正常對照組；L0 組：吡嗪酰胺組；L1 組：低劑量 LcS 組；L2 組：高劑量 LcS 組.2 肝臟組織病理學變化C 組大鼠肝小葉結構清晰，肝索呈放射狀排列，肝細胞胞漿均勻，，肝細胞無水腫及脂肪變性；L0 組大鼠肝細胞中度水腫，胞漿疏松化，出現(xiàn)明顯的氣球樣變索結構及竇周隙消失，伴有炎性細胞浸潤；不同劑量的 LcS 組大鼠肝小葉結構 L0 組得到明顯改善，肝小葉結構清晰，肝索呈放射狀排列，肝細胞胞漿均勻， L1 組大鼠肝細胞輕度水腫，胞漿疏松化；L2 組大鼠肝臟組織接近正常對照組。根據(jù)觀察結果對各組大鼠進行組織病理學評分，結果顯示，L0 組大鼠的分數(shù).20 分，明顯高于正常對照組的 0.00 分，經(jīng)過不同劑量的 LcS 干預后，L1 組和

圖 1.2 干預后各組大鼠肝臟組織 HE 染色（×200）注：C 組：正常對照組；L0 組：吡嗪酰胺組；L1 組：低劑量 LcS 組；L2 組：高劑量 LcS 組。表 1.2 干預后各組大鼠肝臟組織病理學評分Group nHAI scoreMean±SDDifference1Difference2Mean（95%CI） P1Mean（95%CI） P2C 10 0.00±0.00 3.20(2.56,3.84) 0.000L0 10 3.20±1.23*-3.20(-3.84,-2.56) 0.000L1 10 0.40±0.52#-0.40(-1.04,0.24) 0.215 2.80(2.16,3.44) 0.000L2 10 0.30±0.48#-0.30(-0.94,0.34) 0.350 2.90(2.26,3.54) 0.000注：C 組：正常對照組；L0 組：吡嗪酰胺組；L1 組：低劑量 LcS 組；L2 組：高劑量 LcS 組；*表示與 C 組相比，P＜0.05；#表示與 L0 組相比，P＜0.05。Difference1：與 C 組相比的改變量；Difference2：與 L0 組相比的改變量。
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R57

【參考文獻】

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本文編號：2610789