【摘要】：MicroRNAs(miRNAs)是一類22～25核苷酸長度的內源性非編碼小RNA,它可通過與靶mRNA3'非編碼區(qū)(3'untranslatedregion,3'UTR)互補配對,降解或抑制靶mRNA,對調控基因表達進行轉錄后調控。miRNAs通過轉錄后調節(jié)基因表達,參與細胞間信號傳遞、細胞增殖、生長、分化、凋亡以及細胞代謝等多種生物過程。研究發(fā)現,miRNAs通過影響細胞葡萄糖轉運體的表達水平、胞內葡糖代謝效率、胰島β細胞的功能等過程進而影響機體糖代謝水平。miRNAs還通過與相關脂代謝調節(jié)基因3'UTR互補結合調控基因表達,對脂代謝進行調控。硫氧還蛋白相互作用蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP),又稱維生素 D3 上調蛋白 1(vitamin D3 up-regulated protein 1,VDUP1),硫氧還蛋白結合蛋白 2(thioredoxin binding protein 2,TBP2),分子量約 50 kDa。TXNIP 具有調節(jié)細胞內氧化還原狀態(tài)、抑制細胞增殖,促凋亡和衰老功能。TXNIP基因缺失小鼠表現出脂質代謝紊亂,具有高脂血癥和肝脂肪變性特征。有研究表明,TXNIP對肝脂質代謝中脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASN)、固醇調節(jié)元件結合蛋白 1c(sterol regulatory element binding protein1c,SREBP1c)、過氧化物酶體增殖劑激活受體(peroxisome proliferators-activated receptors,PPARs)等基因發(fā)揮了關鍵的調控作用。利用miRNAs預測網站進行生物信息學分析得出,TXNIP可能是miR-302a靶基因;我們選取miR-302a和TXNIP為研究靶點,研究miR-302a可能通過抑制TXNIP表達,參與肝脂質代謝。首先,我們證實了 TXNIP是miR-302a的靶基因;其次,通過體內和體外實驗,在非酒精性脂肪肝細胞和動物模型中,證實了 miR-302a可通過影響TXNIP的表達調控肝脂質代謝。利用PCR、western blot等相關技術檢測TXNIP及與其相關如FASN、PPARα、SREBP1c、磷酸烯醇式丙酮酸竣激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinade,PEPCK)等脂代謝調控基因的表達。此外,我們還利用油紅染色以及HE染色技術檢測了肝臟/肝細胞中脂肪堆積程度及組織形態(tài)變化。miR-302a過表達會導致TXNIP表達水平下降,PPARα和PEPCK表達也隨之下降,SREBP1c和FASN表達增加,加劇肝臟/肝細胞脂質積累,干擾了正常脂代謝的進行。敲降miR-302a后,TXNIP表達升高,PPARα、PEPCK表達也隨之增加,SREBP1c和FASN表達減少,促進肝臟/肝細胞脂質代謝,延緩了脂肪肝的進程。總結:miR-302a對TXNIP具有轉錄后調控作用,并可通過TXNIP影響與其相關脂代謝調控因子調節(jié)肝臟/肝細胞脂質代謝,為今后脂代謝疾病的治療提供可能靶點。
【圖文】：

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【學位授予單位】：昆明理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R575

【參考文獻】

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1 Jun Wei Lim;John Dillon;Michael Miller;;Proteomic and genomic studies of non-alcoholic fatty liver disease-clues in the pathogenesis[J];World Journal of Gastroenterology;2014年26期

本文編號：2577081