【摘要】：炎癥性腸病(Inflammatory bowel disease,IBD)是一類慢性非特異性腸道炎癥疾病,包括潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative Colitis,UC)和克羅恩病(Crohn’s Disease,CD),其臨床癥狀主要表現(xiàn)為腹瀉、腹痛和腸梗阻,并有惡變傾向,增加了大腸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。機(jī)體Th1/Th2型免疫失衡是炎癥性腸病發(fā)病的重要免疫學(xué)因素,而維持腸黏膜免疫平衡成為IBD防治的新方法。本課題采用三硝基苯磺酸(trinitrobenzenesulfonic acid,TNBS)誘導(dǎo)Th1型免疫主導(dǎo)的小鼠炎癥性腸病為模型,探討白介素(IL)-33在炎癥性腸病中的作用及潛在機(jī)制,為臨床治療炎癥性腸病提供新的方法與思路。研究目的:1.明確IL-33在TNBS誘導(dǎo)Th1型細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥性腸病中的作用,探討相關(guān)的免疫學(xué)機(jī)制;2.過繼IL-33誘導(dǎo)的替代活化巨噬細(xì)胞(AAM),檢測(cè)其在炎癥性腸病中的作用及相關(guān)機(jī)制,為炎癥性腸病防治提供新的理論知識(shí)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究方法:建立TNBS誘導(dǎo)的炎癥性腸病模型,觀察IL-33在炎癥性腸病中的作用。依據(jù)組織病理學(xué)檢查判斷IL-33治療效果,免疫熒光技術(shù)檢測(cè)結(jié)腸損傷部位巨噬細(xì)胞表型的表達(dá)情況,實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)結(jié)腸損傷部位細(xì)胞因子以及巨噬細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)水平。替代活化巨噬細(xì)胞過繼至炎癥性腸病小鼠,通過組織病理學(xué)檢查、免疫熒光檢測(cè)及RT-PCR等實(shí)驗(yàn)技術(shù),觀察替代活化巨噬細(xì)胞對(duì)炎癥性腸病的治療效果,同時(shí)過繼綠色熒光蛋白(GFP)標(biāo)記的F4/80+巨噬細(xì)胞,檢測(cè)巨噬細(xì)胞在炎癥性腸病小鼠結(jié)腸組織中的分布情況。研究結(jié)果:1.IL-33緩解TNBS誘導(dǎo)的炎癥性腸病結(jié)腸病理損傷建立小鼠IBD模型,腹腔給予IL-33治療后,臨床病理表現(xiàn)如腹痛、腹瀉、食欲不振等癥狀有明顯的改善,炎癥情況明顯好轉(zhuǎn),組織病理損傷減輕;PCR結(jié)果顯示小鼠結(jié)腸損傷部位促炎性細(xì)胞因子TNF-α表達(dá)降低;組織免疫熒光以及PCR結(jié)果顯示結(jié)腸組織中M2型巨噬細(xì)胞特異標(biāo)記基因Arg1、YM1表達(dá)升高。2.IL-33對(duì)巨噬細(xì)胞極化的影響在正常小鼠體內(nèi),IL-33腹腔注射可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2型極化,并上調(diào)M2型相關(guān)分子表達(dá);同時(shí)IL-33誘導(dǎo)體外腹腔巨噬細(xì)胞向M2型極化。3.替代活化巨噬細(xì)胞過繼治療緩解炎癥性腸病病理損傷IL-33誘導(dǎo)的替代活化巨噬細(xì)胞過繼治療能明顯抑制TNBS誘導(dǎo)的炎癥性腸病進(jìn)展,減輕結(jié)腸組織病理損傷程度,降低結(jié)腸損傷部位TNF-α表達(dá),同時(shí)GFP標(biāo)記的F4/80+巨噬細(xì)胞主要分布于結(jié)腸粘膜下層及固有層部位。結(jié)論:IL-33處理能明顯緩解TNBS誘導(dǎo)的IBD病情進(jìn)展,其免疫學(xué)機(jī)制可能與誘導(dǎo)替代活化巨噬細(xì)胞生成相關(guān)。
【圖文】：

模型組小鼠在造模后的 24 h，體重出現(xiàn)明顯降低，并且隨著時(shí)間增長(zhǎng)體重下顯，第四天時(shí)達(dá)-24.79±1.29%。IL-33 治療組小鼠體重也有降低，至第 2 天15.28±0.74%），，隨后體重逐漸回升，從第 3 天至第 4 天，體重由-13.08±為-5.98±1.05%。對(duì)照組小鼠體重有輕微增加，但是無明顯改變。各實(shí)驗(yàn)組變化統(tǒng)計(jì)結(jié)果見下表：.4 第 1-4 天各實(shí)驗(yàn)組小鼠體重變化百分率（與 TNBS 組相比較*P < 0.05，**P<0.01）Day 1 Day 2 Day 3 Day4-10.55±0.66 -17.62±2.35 -21.99±1.43 -24.79±L-33 -9.16±1.17 -15.28±0.74 -13.08±1.33* -5.98±1

廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文分病活動(dòng)指數(shù)評(píng)分結(jié)果見圖 2.2。乙醇空澤，活動(dòng)正常，大便性狀無變化。模型亂失去光澤，慵懶，活動(dòng)明顯減少，2-便；第 4 天，程度更加嚴(yán)重， DAI 評(píng)分為毛發(fā)失去光澤，活動(dòng)不靈敏，食欲不好始有稀便，第 3 天稀便但是精神、食欲況開始改變，體重有明顯回升，毛發(fā)也AI 評(píng)分為 4±0.57。IL-33 治療組小鼠與差異，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（*P<0.0
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R574

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 倪倩;胡世蓮;尹輝;;IL-33與人類疾病關(guān)系的研究進(jìn)展[J];國(guó)際免疫學(xué)雜志;2013年05期

本文編號(hào)：2540883