【摘要】：目的:探討抗CXC趨化因子配體1(CXCL1)中和抗體對(duì)葡聚糖硫酸鈉(dextra sulfate sodium,DSS)誘導(dǎo)的急性潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)小鼠模型的治療作用,并闡明其對(duì)結(jié)腸組織中細(xì)胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-17,IL-10的表達(dá)及中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)的影響。方法:雌性BALB/c小鼠48只,隨機(jī)分為正常對(duì)照組(DSS-)、疾病組(DSS+saline)、抗CXCL1中和抗體治療組(DSS+anti-CXCL1 Ab)和治療對(duì)照組(DSS+IgG Ab),每組12只。正常對(duì)照組小鼠給予蒸餾水自由飲用,疾病組、治療組及治療對(duì)照組給予3.5%的DSS自由飲用,至第8天處理小鼠。其中治療組于造模第3天和第6天腹腔注射抗CXCL1中和抗體(4 mg/kg),治療對(duì)照組予以等量大鼠IgG抗體,正常對(duì)照組和疾病組注射等量生理鹽水。對(duì)各組小鼠進(jìn)行疾病活動(dòng)指數(shù)評(píng)分(disease activity index,DAI)及結(jié)直腸組織損傷學(xué)評(píng)分,并采用RT-PCR法檢測(cè)各組小鼠結(jié)腸組織中細(xì)胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-17和IL-10的表達(dá)。運(yùn)用免疫組織化學(xué)檢測(cè)各組小鼠結(jié)腸組織中中性粒細(xì)胞特異性標(biāo)志物髓過氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的表達(dá)。結(jié)果:與正常對(duì)照組相比,疾病組小鼠DAI評(píng)分及結(jié)直腸組織損傷學(xué)評(píng)分明顯增高,但是予以抗CXCL1中和抗體干預(yù)治療后能明顯減低急性UC小鼠的DAI和結(jié)直腸組織損傷學(xué)評(píng)分。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示:與正常對(duì)照組相比,疾病組小鼠結(jié)直腸組織中促炎細(xì)胞因子TNF-α,IFN-γ和IL-17 m RNA表達(dá)水平均顯著升高,抑炎因子IL-10 m RNA表達(dá)下降。而使用抗CXCL1中和抗體干預(yù)治療,明顯抑制DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸組織中促炎細(xì)胞因子TNF-α,IFN-γ和IL-17 m RNA表達(dá)水平的升高及抑炎因子IL-10 m RNA表達(dá)水平的下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:疾病組小鼠結(jié)腸組織中中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)明顯增加,予以抗CXCL1中和抗體治療能顯著減少結(jié)腸組織中中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:抗CXCL1中和抗體緩解了DSS誘導(dǎo)的急性UC的進(jìn)展,其發(fā)揮抗炎作用的機(jī)制可能與抑制促炎因子的表達(dá)和中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)有關(guān)。
【圖文】：

牢轡衷?分左右。與正常對(duì)照組相比，疾病組小鼠被毛粗糙，食欲下降，活動(dòng)欠佳；小鼠糞便稀軟不成形，容易黏肛，第3天開始出現(xiàn)明顯的腹瀉及肉眼血便或黏液便，體重第4天開始逐日下降，DAI評(píng)顯著升高。與疾病組比較，抗CXCL1中和抗體治療組小鼠被毛順滑，食欲正常，活動(dòng)較好，體重維持在22g，無明顯下降趨勢(shì)；小鼠糞便麥粒狀，偏軟；無肉眼血便或黏液便，DAI評(píng)分較疾病組顯著下降。說明抗CXCL1中和抗體緩解了DSS誘導(dǎo)的急性UC的臨床癥狀。將治療對(duì)照組與疾病組比較，DAI評(píng)分無明顯差異(P>0.05)。各組每天的DAI評(píng)分情況見圖1。2.2抗CXCL1中和抗體減輕DSS誘導(dǎo)的急性UC的腸道炎癥反應(yīng)經(jīng)過對(duì)小鼠腸道組織進(jìn)行切片、包埋及HE染色后光鏡下行病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)：正常對(duì)照組小鼠(圖2A)腸道黏膜完整，未見明顯充血水腫，無炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)。疾病組(圖2B)及治療對(duì)照組(圖2D)結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞和腺體破壞，大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，腸黏膜明顯充血水腫伴，腸上皮細(xì)胞損傷脫落形成潰瘍，隱窩結(jié)構(gòu)破壞�？笴XCL1中和抗體治療組(圖2C)腺體排列較為規(guī)則，腸道各層較完整，有少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。對(duì)各組小鼠腸黏膜組織損傷學(xué)評(píng)分進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，抗CXCL1中和抗體治療組腸道黏膜組織損傷學(xué)評(píng)分相比疾病組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。腸黏膜組織損傷學(xué)評(píng)分見圖3。表2IL-2，IFN-γ，IL-17和IL-10及內(nèi)參基因GAPDH的引物序列Table2PrimersequencesofIL-2,IFN-γ,IL-4,IL-10andGAPDH基因序列PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度/bpTNF-α5'-GAGAAGTTCCCAAATGGC-3'2133'-GCATCGTTTGGTGGTTCA-5'INF-γ5'-GCCGCGTCTTGGTTTTGCAG-3'1753'-TACCGTCCTTTTGCCAGTTCCTCCA-5'IL-105'-TCCCAGTCAGCCAGACCCACA-3'2893'-AATCGATGACAGCGTCGCAGC-5'IL-175'-CAGACTACCTCAACCGTTCCA-3'2513'-C

抗CXCL1中和抗體在急性潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型中的治療作用羅玲瓏，等1379圖2各組小鼠腸黏膜HE染色(×100)Figure2HEstainningofcolonmucosaofmiceineachgroup(×100)A:DSS-group;B:DSS+salinegroup;C:DSS+anti-CXCL1Abgroup;D:DSS+IgGAbgroup20μm20μmACBD圖3各組小鼠組織損傷學(xué)評(píng)分Figure3Histologicaldamagescaleofmiceineachgroup*P<0.05DSS+anti-CXCL1AbDSS+lgGAbDSS+salineDSS 86420Tisseudamagescroe**圖4各組小鼠結(jié)直腸組織TNF-α，IFN-γ，IL-10，IL-17的mRNA的表達(dá)Figure4mRNAexpressionofTNF-α,IFN-γ,IL-10andIL-17incolorectaltissuesofmiceineachgroup*P<0.05DSS+anti-ControlAbDSS+anti-CXCL1AbDSS+salineDSS TNF-αTNF-γIL-10IL-17543210RelatvieelvelfoRmAN********2.3抗CXCL1中和抗體抑制小鼠結(jié)腸組織促炎因子的表達(dá)并促進(jìn)抑炎因子的表達(dá)利用RT-PCR檢測(cè)各組小鼠結(jié)腸組織中TNF-α，IFN-γ，IL-17和IL-10的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與正常組比較，疾病組小鼠結(jié)腸組織中促炎因子TNF-α，IFN-γ和IL-17含量均明顯增加，抑炎因子IL-10含量降低(P<0.05)。而與疾病組比較，抗CXCL1中和抗體治療組結(jié)腸組織中促炎因子TNF-α，IFN-γ和IL-17均明顯下降，，抑炎因子IL-10的表達(dá)升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖4)。20μm20μm
【作者單位】： 中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院消化內(nèi)科;中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院湖南省非可控性炎癥與腫瘤重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;中南大學(xué)腫瘤研究所;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81472286) 湖南省自然科學(xué)基金(11JJ4017)~~
【分類號(hào)】：R-332;R574.62

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本文編號(hào)：2540470