【摘要】：前言：本研究課題的產(chǎn)生源自一個消化性潰瘍藥物療效觀察課題的預實驗。該實驗旨在觀察粘膜保護劑使用對于消化性潰瘍愈合質(zhì)量的影響。在預實驗過程中,我們發(fā)現(xiàn)胃竇活檢粘膜組織中膠原纖維的表達在不同胃疾病中存在明顯差異。而影響其合成與分解的重要生長因子之一是Tgf-β1。在進一步的文獻復習中,我們確認了Tgf-β1在干預胃疾病的轉歸中起到重要的作用,由其調(diào)控合成的Ⅳ型膠原蛋白在判定腫瘤侵蝕性與轉移中占據(jù)了關鍵的地位。但在既往研究中,大多數(shù)文獻資料涉及的都是針對腎臟、肺和皮膚組織的纖維表達的相關研究,針對胃粘膜疾病膠原纖維表達量及表達形態(tài)的研究并不完整。胃竇粘膜中膠原蛋白和Tgf-β1的表達與疾病進展之間的關系及其相關機制并不系統(tǒng)。因此萌生了分析不同胃粘膜疾病的病理標本中,各型膠原蛋白與Tgf-β1的表達及相關性的念頭。目前胃疾病的診斷,主要通過臨床癥狀、理化檢驗、影像檢查、病理活檢等途徑。與通過常規(guī)手術獲取病理標本相比較,胃鏡下粘膜活檢獲取病理標本的方式在保證準確度的前提下,有創(chuàng)傷小,操作便捷,副作用少,患者痛苦小,經(jīng)濟付出少等優(yōu)勢,必要時甚至可多次活檢進行比對。本實驗通過檢測胃竇粘膜不同病變組織中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原蛋白的表達,比較各膠原蛋白在不同病變組織中的構成比例,分析其與Tgf-β1表達及胃粘膜疾病轉歸的相關性及形態(tài)學特征,探討胃竇粘膜膠原纖維表達變化與粘膜疾病轉歸之間的相關性。第一部分：胃竇粘膜組織中膠原纖維差異性比較目的：比較不同病變胃竇粘膜病理標本中膠原纖維的表達差異。材料和方法：選取2013年11月至2014年3月間我院50例胃竇粘膜標本,分別為正常對照組6例(男性1例,女性5例)、胃潰瘍20例(男性13例,女性7例)、不典型增生13例(男性7例,女性6例)、腺癌11例(男性7例,女性4例)。平均年齡正常對照組為36.17+10.91歲,潰瘍組為47.70±13.94歲,不典型增生組為47.08±7.44歲,腺癌組為65.55±8.36歲。分別收集四組病例資料,包括：(1)一般資料：性別、年齡、姓名；(2)Hp檢測：碳13呼吸實驗,快速尿素酶試驗；(3)常規(guī)福爾馬林固定石蠟包埋切片確定病理類型；(4)膠原纖維表達檢測：馬松(Masson)染色后,依次用Image-Pro Plus6.0軟件分析圖片→Invert contrast反相應用照片→photoshop轉化為黑白灰階→calibration、intensity calibration、std optical density校正光密度→分析其中膠原纖維的沉積面積、累積光密度及平均光密度,比較各組間膠原纖維的表達差異。運用SPSS17.0軟件進行分析,測得數(shù)據(jù)用均值±標準差(x±s)表示,兩獨立樣本率的比較采用x2檢驗,多組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA),組間兩兩比較,方差齊采用LSD-t法多重比較,若方差不齊,采用Dunnett's T3多重比較。小樣本采用Fisher精確概率法,計量資料采用t檢驗。以a=0.05作為統(tǒng)計學檢驗水準結果：1.一般資料分析結果：各組在性別上差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。但年齡差異有統(tǒng)計學意義,腺癌組平均年齡最高(65.55±8.36),最低為正常對照組(36.17±10.91)(P0.01)。2.Hp結果：正常對照組6例(陽性3例,陰性3例)、胃潰瘍20例(陽性11例,陰性9例)、不典型增生13例(陽性7例,陰性6例)、腺癌11例(陽性7例,陰性4例),四組間Hp感染率相比較無統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.膠原纖維表達：腺癌組的纖維沉積面積和膠原纖維表達量均為四組中最高(沉積面積=108535.82±61071.51)(累積光密度=29993.2041+16828.8527),均高于正常對照組,且表達曲線(正常對照組-潰瘍組-不典型增生組-腺癌組)呈逐漸上升趨勢,但差異無統(tǒng)計學意義(P沉積面積0.05(P值=0.106,)；P累積光密度0.05(P=0.135))。四組間膠原纖維單位表達強度平均光密度腺癌組最高(平均光密度=436.26±127.60),其次為潰瘍組(平均光密度=417.23±114.70),再次為不典型增生組(平均光密度=374.28±124.77),差異有統(tǒng)計學意義P0.01(P=0.003)。結論：通過馬松染色觀察不同病理狀態(tài)下胃竇黏膜組織中膠原纖維的表達,結果顯示,不同胃粘膜疾病中,膠原纖維的表達存在差異。在胃粘膜疾病進展為胃癌的過程中,膠原纖維隨著疾病的嚴重程度增加呈曲折上升趨勢,與疾病的轉歸具有相關性。第二部分：胃竇粘膜病理組織中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原蛋白與Hp感染和Tgf-β1的表達及相關性目的：檢測胃竇黏膜病理組織中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原蛋白、Tgf-β1的表達,分析各膠原蛋白在不同病理組織中的構成比例以及與Tgf-β1的關系,探索它們在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的形態(tài)學時相特征。材料和方法：一般資料同第一部分,病理組織石蠟包埋后連續(xù)切片進行免疫組化染色,采用Image-Pro Plus6.0軟件分析圖片：依次為Invert contrast反相應用照片·→hotoshop轉化為黑白灰階·→calibratio、intensity calibration、std optical density校正光密度,分析其中膠原蛋白的表達強度、表達總量,比較不同病理組織中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原蛋白的表達比例及其與Tgf-β1表達的相關性。運用SPSS17.0軟件進行分析,測得數(shù)據(jù)用均值±標準差(x±s)表示,兩獨立樣本率的比較采用x2檢驗,多組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA),組間兩兩比較,方差齊采用LSD-t法多重比較,若方差不齊,采用Dunnett's T3多重比較。小樣本采用Fisher精確概率法,計量資料采用t檢驗。用歸一化表示各組蛋白比例。以a=0.05作為統(tǒng)計學檢驗水準,即P0.05為具有統(tǒng)計學意義。結果：Ⅰ型膠原蛋白在正常對照組中表達量顯著高于其他三組(sum=433323.01±155851.81),在不典型增生組中表達有小幅度回升(sum=296570.87±76497.88),差異有統(tǒng)計學意義P0.05(P值=0.000)。Ⅲ型膠原蛋白在腺癌組中表達明顯(sum=257891.93±63202.40),從正常對照組到腺癌組呈逐漸上升趨勢,差異具有統(tǒng)計學意義P0.05(P值=0.012)。Ⅳ型膠原蛋白在不典型增生組中的表達最高(sum=212256.92±57764.42),潰瘍組中表達最低(sum=143975.67±38955.55),但差異無統(tǒng)計學意義P0.05(P值=0.288)。Tgf-β1在正常對照組中表達最高(sum=153894.16±51428.16),其次為不典型增生組(sum=144626.53±100117.19),潰瘍組及腺癌組中的表達量相對較低(sum潰瘍=107271.98±30403.97、sum腺癌=120607.17±32781.73),但差異無統(tǒng)計學意義P0.05(P值=0.216)。各組內(nèi)Hp感染與蛋白表達情況比較顯示,未感染Hp的人群Ⅰ型膠原蛋白的表達強度較已感染人群表達高(Hp陰性315.40±293.27Hp陽性310.36±272.71),具有統(tǒng)計學意義(P0.05,P=0.037),但總表達量以及Ⅲ、Ⅳ型膠原蛋白在各組內(nèi)的表達與Hp感染均無統(tǒng)計學意義。結論：Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原蛋白在不同病理狀態(tài)的胃竇粘膜中表達量各不相同,剔除潰瘍組后,隨著疾病的嚴重程度表現(xiàn)出不同的規(guī)律性,可能與Tgf-β1在不同病變時期的分泌情況密切相關。Hp感染對各組蛋白的表達量的影響沒有明顯統(tǒng)計學意義(P均0.05)。
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【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R573

【參考文獻】

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2 牟衛(wèi)平;蘇世輝;曹璋;;胃癌患者轉化生長因子β1、β2和β3蛋白的表達水平與預后因素和存活率的相關性[J];中國老年學雜志;2014年05期

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本文編號：2434761