發(fā)布時間：2019-02-24 09:06

【摘要】：背景:隨著重度潰瘍性結(jié)腸炎(severe ulcerative colitis,SUC)發(fā)病率與病死率的不斷攀升,以及其發(fā)病急、進展快的特點,SUC已逐漸成為臨床關注的重點。糖皮質(zhì)激素是目前公認治療SUC的最主要藥物,但不同的患者對激素治療有著不同的臨床藥物反應,部分患者存在激素抵抗。據(jù)有關報道顯示糖皮質(zhì)激素治療總有效率為70%,約30%的SUC達不到臨床緩解,存在糖皮質(zhì)激素抵抗現(xiàn)象。對于激素抵抗患者往往需要進行藥物升級療法,甚至需要手術(shù)治療,若能提前預測患者對激素的敏感程度則能為臨床醫(yī)生選擇不同的治療方案提供幫助。目前尚缺乏一種可靠的標準提前預知患者對激素治療的敏感程度,研究顯示機體對糖皮質(zhì)激素敏感與否與異常增多的糖皮質(zhì)激素受體-β(GR-β)以及與NF-KB信號通路的活性增強有關。骨保護素(osteoprotegerin,OPG)是一種受體蛋白,近年來有學者提出OPG能反應炎癥性腸病病變程度、部位、類型,并能預測UC患兒對糖皮質(zhì)激素的敏感性,有望成為協(xié)助炎癥性腸病診療的新指標。目的:通過檢測SD大鼠SUC模型激素治療前后血清中OPG水平的變化以及結(jié)腸組織GR-β基因和NF-KB蛋白的表達,從而探討OPG能否作為預測SD大鼠結(jié)腸炎對激素敏感性的檢測指標。方法:60只質(zhì)量約250-280g的雄性SD大鼠;隨機編號為1-60號,采用單籠飼養(yǎng)。TNBS組為1-40號,模型組(M組)為41-50號,對照組(N組)為51-60號。TNBS組和M組均采用5%TNBS+50%乙醇(v/v)溶液建立大鼠急性結(jié)腸炎的重癥模型,N組采用同等容量的50%的乙醇溶液灌腸。造模成功后的第三天予以干預處理,TNBS組大鼠每日于同一時間予以地塞米松磷酸鈉(2mg/kg)腹腔注射1次,共注射10天;M組、N組大鼠按相同計算方法予以腹腔注射生理鹽水。每日對大鼠的疾病活動指數(shù)(DAI指數(shù))進行評分,分別于造模成功后第3天與第13天取大鼠眼眶靜脈血用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢查血清中OPG水平。第13天處死所有大鼠,采集結(jié)腸標本行肉眼觀結(jié)腸病變損害程度(CMDI)評分;取病變結(jié)腸組織行HE染色后觀察并行病理評分(TDI評分)。據(jù)DAI指數(shù)變化、TDI以及CDMI評分綜合結(jié)果將TNBS組分為激素有效組(S組)以及激素無效組(I組)。取病變明顯的結(jié)腸組織,用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)方法檢測N、M、S、I組結(jié)腸組織中的GR-β受體基因表達情況,蛋白NF-KB p65含量的檢測由蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)完成;激素治療前后OPG變化采用配對t檢驗完成,GR-β與NF-KB p65分別采用單因素方差分析完成。結(jié)果:1、N組結(jié)腸組織形態(tài)、結(jié)構(gòu)清楚,無炎性細胞浸潤,其DAI指數(shù)、CDMI及TDI結(jié)果均比其他各組得分低,且具有統(tǒng)計學意義(p0.05);M組DAI指數(shù)、CDMI及TDI評分均最高,大鼠可見不同程度的精神、食欲下降、腹瀉以及血便,肉眼可見腸粘膜的水腫和壞死,HE染色可見結(jié)腸粘膜結(jié)構(gòu)破壞以及炎性細胞的浸潤,杯狀細胞減少,表明潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型復制成功。2、ELISA結(jié)果:(+表示造模第3天時的血清標本,-表示造模第13天的血清標本)OPG含量在N組最低,M組第3天時的OPG(M+)明顯高于其他各組。S組激素治療后(S-)的OPG含量明顯低于治療前(S+)(p0.01),然而I組激素治療前(I+)和治療后(I-),N組第3天(N+)和第13天(N-)的OPG含量差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。3、GR-β受體基因表達結(jié)果:I組中的GR-β受體基因表達量顯著高于其他各組,GR-β表達量在N組最低。除N組與S組之間無差異(p0.05)外,其余各組之間均有統(tǒng)計學意義(p0.05)。其中,GR-β基因在I組的表達量明顯高于S組。4、NF-KB p65蛋白表達量:M組NF-KB p65蛋白表達最多,N組最少;且I、S、M、N任意兩組之間比較差異均具有統(tǒng)計學意義(p0.05)。其中I組蛋白表達量遠遠高于S組(p0.01)。5、ROC曲線分析OPG最佳截斷值為1542.9360 pg/ml,ROC曲線下面積為0.910;GR-βROC曲線下面積為0.944,NF-KB p65 ROC曲線下面積為0.891。結(jié)論:1、三硝基苯磺酸溶液灌腸法是建立潰瘍性結(jié)腸炎動物模型較為理想的方法,當TNBS劑量為180 mg/kg時所得到的SD大鼠結(jié)腸炎模型可達到重癥標準。2、本實驗驗證了GR-β受體以及NF-KB p65可以間接預測大鼠對糖皮質(zhì)激素的敏感程度。3、UC大鼠的血清OPG可以間接反映對糖皮質(zhì)激素治療的敏感程度,可作為臨床激素療效的檢測指標。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：西南醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R574.62

【參考文獻】

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本文編號：2429390