【摘要】：目的利用細胞模型研究非諾貝特在緩解非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的作用及其分子機制。方法首先以0~0.9mmol/L梯度濃度的油酸處理正常肝細胞LO2 48h建立脂肪肝細胞模型;同時,以非諾貝特處理正常細胞或模型組細胞48h,然后用CCK-8試劑盒測定細胞活力,用油紅O染色觀察細胞內(nèi)脂滴形成或抑制情況,利用試劑盒檢測細胞中的三酰甘油(TG)以及上清液中谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)水平,蛋白質免疫印跡法檢測細胞中蛋白激酶B(AKT)、p-AKT、FSAN及Nrf2蛋白水平,并使用2′,7′-二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFH-DA)檢測細胞內(nèi)的活性氧自由基(ROS)含量。結果油酸濃度超過0.5mmol/L后細胞活力顯著降低,非諾貝特可抑制高濃度油酸對細胞的損傷。油酸處理后細胞中出現(xiàn)大量脂滴,細胞內(nèi)TG含量以及上清液中的ALT、AST水平顯著升高,給予非諾貝特處理后細胞中脂滴減少,TG、ALT和AST含量均顯著降低。油酸處理后細胞中AKT、p-AKT、FSAN和Nrf2蛋白水平升高,給予非諾貝特可抑制上述蛋白水平的升高。同時,非諾貝特逆轉了由油酸導致的細胞內(nèi)ROS累積。結論非諾貝特可以抑制油酸引起的脂肪積累,并緩解脂肪累積導致的細胞損傷,其機制是通過下調AKT/FSAN信號通路,從而降低ROS水平,進而減少ROS導致的細胞損傷。
[Abstract]:Objective to study the role and molecular mechanism of fenofibrate in relieving (NAFLD) in patients with non alcoholic fatty liver disease. Methods Fatty liver cell model was established by treating normal hepatocytes with oleic acid at gradient concentration of 0~0.9mmol/L for 48h, and normal cells or model cells treated with fenofibrate for 48h, then the cell viability was measured by CCK-8 kit. Oil red O staining was used to observe the formation or inhibition of lipid droplets in cells. The levels of triglyceride (TG) and (ALT), (ALT), in supernatant were detected by Elisa kit. The protein levels of protein kinase B (AKT), p-AKTN FSAN and Nrf2 were detected by Western blot, and the content of reactive oxygen free radical (ROS) in cells was determined by using 2-chloride-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA). Results when the concentration of oleic acid exceeded 0.5mmol/L, the cell viability was significantly decreased, and fenofibrate could inhibit the damage caused by high concentration of oleic acid. After oleic acid treatment, a large number of lipid droplets appeared in cells, and the content of TG and ALT,AST in supernatant increased significantly. After fenofibrate treatment, the lipid droplets in cells decreased, and the contents of TG,ALT and AST decreased significantly. The protein levels of AKT,p-AKT,FSAN and Nrf2 increased after oleic acid treatment, and fenofibrate inhibited the increase. At the same time, fenofibrate reversed the accumulation of ROS in cells induced by oleic acid. Conclusion fenofibrate can inhibit fat accumulation induced by oleic acid and alleviate cell damage induced by lipid accumulation. The mechanism of fenofibrate is to decrease the level of ROS by down-regulating the AKT/FSAN signaling pathway and then to reduce the cell damage induced by ROS.
【作者單位】： 華中科技大學同濟醫(yī)學院藥學院;華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院兒科;
【分類號】：R575.5

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本文編號：2292506