本文關(guān)鍵詞：甘草酸二胺對(duì)急性肝衰竭大鼠肝細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《鄭州大學(xué)》 2014年

甘草酸二胺對(duì)急性肝衰竭大鼠肝細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制探討

任志元  

【摘要】：目的 1、觀察急性肝衰竭大鼠模型中肝細(xì)胞核DNA損傷的演變。2、探討甘草酸二銨對(duì)急性肝衰竭大鼠模型血清TNF-α濃度變化和肝細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制。 方法 1、動(dòng)物模型制作：選取60只健康雌性Wistar大白鼠按照隨機(jī)分配原則，分為實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組、空白對(duì)照組，每組20只，常規(guī)實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)7天，禁食12h、禁水8小時(shí)后，實(shí)驗(yàn)組大鼠給予天晴甘平（生理鹽水溶解）灌胃，對(duì)照組和空白對(duì)照組大鼠均給予同等量生理鹽水灌胃；灌胃3h后實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組大鼠同時(shí)腹腔注射D-氨基半乳糖（D-galactosamine,D-Gal）和脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）制作急性肝衰竭模型，空白對(duì)照大鼠單純腹腔注射生理鹽水； 2、相關(guān)指標(biāo)檢測：注射后即開始計(jì)時(shí)，，分別于注射后0.5、2、4、6、8、10、12h不同時(shí)間點(diǎn)用頸椎脫臼法處死大鼠，（1）留取右心室靜脈血用ELISA法檢測大鼠血清TNF-α（Tumor Necarosis Factor-α, TNF-α）濃度變化；（2）采用灌注固定法灌注多聚甲醛固定肝臟標(biāo)本，并TUNEL法檢測肝細(xì)胞凋亡情況，記錄凋亡指數(shù)，用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析比較兩者間關(guān)系；（3）用“彗星實(shí)驗(yàn)”方法測定肝細(xì)胞核DNA損傷情況，用相關(guān)軟件測定Olive尾矩值表示DNA的損傷程度，探討其與肝細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系。 結(jié)果 1.實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組大鼠血清TNF-α濃度均于腹腔注射D-Gal和LPS后的2h開始同步升高，且均于注射后8h同步達(dá)高峰，其最高濃度：實(shí)驗(yàn)組為（510.78±93.68）μg/L，對(duì)照組為（532.53±89.77）μg/L，兩者間相同時(shí)間點(diǎn)TNF-α濃度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；空白對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)ELISA法檢測TNF-α濃度無明顯變化。 2.實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組大鼠肝組織分別于6h和4h出現(xiàn)TUNEL陽性細(xì)胞，凋亡指數(shù)均于注射后12h同步達(dá)高峰，實(shí)驗(yàn)組為（5.23±0.28）%，對(duì)照組為（29.46±0.97）%，但相同時(shí)間點(diǎn)所測定的實(shí)驗(yàn)組凋亡指數(shù)與對(duì)照組相比均顯著減小，兩者間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；空白對(duì)照組凋亡細(xì)胞TUNEL陽性結(jié)果少見，凋亡指數(shù)小，與實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組分別比較，兩者間凋亡指數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。 3.腹腔注射D-Gal和LPS后，實(shí)驗(yàn)組大鼠肝細(xì)胞核DNA于注射1h后開始出現(xiàn)DNA損傷情況，“彗星實(shí)驗(yàn)”結(jié)果顯示其DNA開始“解鏈”，并出現(xiàn)較短的特異性“彗尾”，軟件計(jì)算細(xì)胞核DNA的Olive尾矩值即開始明顯增大，至4h后，肝細(xì)胞核DNA“彗星實(shí)驗(yàn)”檢測結(jié)果示損傷率為100%；對(duì)照組大鼠于注射后0.5h后即出現(xiàn)DNA損傷情況，至2h時(shí)，DNA損傷率即達(dá)到100%；實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組大鼠各時(shí)間點(diǎn)檢測結(jié)果顯示DNA損傷逐漸加重，至12h時(shí)，“彗星實(shí)驗(yàn)”結(jié)果提示實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組肝細(xì)胞DNA均出現(xiàn)嚴(yán)重?fù)p傷，甚至完全解體；實(shí)驗(yàn)組各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞核DNA的Olive尾矩值均低于對(duì)照組，兩者間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；空白對(duì)照組“彗星實(shí)驗(yàn)”結(jié)果可見少量肝細(xì)胞核DNA損傷情況，其與實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組數(shù)據(jù)對(duì)照差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 結(jié)論 1、急性藥源性肝衰竭模型大鼠較早出現(xiàn)肝細(xì)胞核DNA損傷，并隨時(shí)間推移逐漸加重，至最后完全解體，最終可能誘導(dǎo)了肝細(xì)胞凋亡。提示大鼠肝細(xì)胞凋亡與D-Gal和LPS的毒理作用有關(guān)。肝細(xì)胞的凋亡可能與其細(xì)胞核的損傷有一定的相關(guān)關(guān)系。 2、經(jīng)誘導(dǎo)劑腹腔注射誘導(dǎo)的大鼠血清TNF-α濃度的升高并非與肝細(xì)胞核DNA損傷的發(fā)生及演變完全同步，其可能存在某種機(jī)制促使肝細(xì)胞核DNA損傷并促進(jìn)其進(jìn)一步發(fā)展，最終可能導(dǎo)致肝細(xì)胞凋亡。 3、甘草酸二銨具有減輕急性肝衰竭大鼠模型中肝細(xì)胞核DNA的損傷及減少肝細(xì)胞凋亡的作用，其臨床治療急性肝衰竭效果可能與其該作用有著一定的聯(lián)系。但甘草酸二銨在影響肝細(xì)胞凋亡的同時(shí)并沒有改變腹腔注射D-Gal和LPS的大鼠血清中TNF-α的濃度，提示其減輕肝細(xì)胞凋亡的作用并非通過降低TNF-α的濃度而實(shí)現(xiàn)的，其保護(hù)機(jī)制可能是直接保護(hù)肝細(xì)胞核DNA進(jìn)而減輕肝細(xì)胞損傷，起到保護(hù)肝臟作用的

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R575.3
【目錄】：

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9 高澤立;;急性肝衰竭肝細(xì)胞損傷機(jī)制與治療進(jìn)展[A];廣東省肝臟病學(xué)會(huì)2007年年會(huì)論文集[C];2007年

10 郭利民;;急性肝衰竭并發(fā)MODS的治療[A];第一屆全國人工肝及血液凈化學(xué)術(shù)年會(huì)暨全國人工肝及血液凈化攻關(guān)協(xié)作組成立大會(huì)論文集[C];2004年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院全軍傳染病研究所 張緒清 毛青;急性肝衰竭 救治理念獲更新[N];健康報(bào);2012年

2 蕭紅;[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2009年

3 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院急診科 教授 羅學(xué)宏;[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2010年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 徐旭雯;粒細(xì)胞集落刺激因子治療急性肝衰竭的實(shí)驗(yàn)研究[D];中南大學(xué);2006年

2 劉鳳超;急性肝衰竭模型鼠肝細(xì)胞凋亡機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2009年

3 郝彥琴;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)急性肝衰竭大鼠腸源性內(nèi)毒素血癥的治療作用及機(jī)制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

4 姜雪強(qiáng);脂氧素對(duì)急性肝衰竭的保護(hù)作用及其作用機(jī)制探討[D];華中科技大學(xué);2011年

5 李俊剛;可回復(fù)永生化人胎肝細(xì)胞系的建立及其移植預(yù)防小鼠急性肝衰竭[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

6 周一鳴;干細(xì)胞分化及其對(duì)急性肝衰竭大鼠治療的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

7 余立敏;茵陳澤蘭方對(duì)急性肝衰竭大鼠肝損傷及肝再生的影響[D];湖北中醫(yī)學(xué)院;2007年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張海鳴;甲狀腺激素對(duì)急性肝衰竭大鼠肝細(xì)胞的保護(hù)作用[D];江蘇大學(xué);2010年

2 馬俊苓;生長激素對(duì)大鼠急性肝衰竭的影響其機(jī)制的初步探討[D];天津醫(yī)科大學(xué);2007年

3 周鵬程;微囊懸浮型流化床式生物人工肝治療急性肝衰竭豬的血清代謝組學(xué)研究[D];浙江大學(xué);2012年

4 趙欣;急性肝衰竭小鼠腸黏膜通透性變化機(jī)制及微生態(tài)制劑的保護(hù)作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

5 李憲;血液灌流聯(lián)合血液濾過治療犬急性肝衰竭的實(shí)驗(yàn)研究[D];暨南大學(xué);2010年

6 黃建偉;四氯化碳構(gòu)建犬急性肝衰竭模型及血液凈化效果探索[D];暨南大學(xué);2010年

7 奉婷;臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)急性肝衰竭的修復(fù)及移植途徑的優(yōu)化[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

8 焦明靜;過氧化物酶體增殖物激活受體α對(duì)急性肝衰竭的保護(hù)作用與機(jī)制[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

9 劉志紅;非生物型人工肝對(duì)急性肝衰竭炎性介質(zhì)的清除作用與生存影響的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2005年

10 王凱;非生物型組合人工肝治療急性肝衰竭動(dòng)物高顱壓的實(shí)驗(yàn)研究[D];鄭州大學(xué);2006年

  本文關(guān)鍵詞：甘草酸二胺對(duì)急性肝衰竭大鼠肝細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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