【摘要】：目的探討特異性上調(diào)肝細(xì)胞中肝細(xì)胞核因子1α(HNF1α)表達(dá)對(duì)四氯化碳(CCl4)誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化的影響。方法取18只C57/B6小鼠隨機(jī)分為正常組、AAV8-TBG-Ctrl組和AAV8-TBG-HNF1α組,每組6只。應(yīng)用CCl4誘導(dǎo)制備小鼠肝纖維化模型,造模后AAV8-TBG-HNF1α組小鼠通過(guò)尾靜脈注射帶有甲狀腺素結(jié)合球蛋白(TBG)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)表達(dá)HNF1α的腺相關(guān)病毒AAV8-TBG-HNF1α特異性上調(diào)肝細(xì)胞中HNF1α的表達(dá),AAV8-TBGCtrl組小鼠注射對(duì)照病毒AAV8-TBG。采用免疫組織化學(xué)法及qPCR檢測(cè)各組小鼠HNF1α的表達(dá),蘇木素-伊紅(H-E)染色、天狼猩紅染色檢測(cè)肝組織的病理改變及膠原沉積,免疫組化法檢測(cè)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)的表達(dá),并對(duì)Ⅰ型膠原(COL1A1)及α-SMA的表達(dá)進(jìn)行軟件定量分析;qPCR法檢測(cè)小鼠肝組織中纖維化相關(guān)基因(α-SMA和COL1A1)、上皮指標(biāo)(E-cadherin和Plakoglobin)及間質(zhì)指標(biāo)(Vimentin,Slug和Twist1)的mRNA水平;免疫組化法及TUNEL法檢測(cè)上調(diào)HNF1α對(duì)纖維化肝臟中細(xì)胞增殖、凋亡的影響。結(jié)果與正常組小鼠相比,CCl4造�？纱龠M(jìn)小鼠肝臟膠原沉積及α-SMA的表達(dá),且在肝纖維化發(fā)生過(guò)程中HNF1α的表達(dá)下降(P0.01);與AAV8-TBG-Ctrl組相比,應(yīng)用AAV8-TBG-HNF1α特異性上調(diào)肝細(xì)胞HNF1α的表達(dá)可抑制纖維化肝臟中的COL1A1及α-SMA的水平(P0.01)。上調(diào)肝細(xì)胞HNF1α表達(dá)對(duì)纖維化肝臟中E-cadherin、Vimentin等上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換指標(biāo)的表達(dá)無(wú)明顯影響(P0.05),也不影響肝細(xì)胞的增殖與凋亡(P0.05)。結(jié)論特異性上調(diào)肝細(xì)胞HNF1α表達(dá)可顯著改善CCl4誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of specific up-regulation of hepatocyte nuclear factor-1 偽 (HNF1 偽) expression on hepatic fibrosis induced by carbon tetrachloride (CCl4) in mice. Methods 18 C57/B6 mice were randomly divided into AAV8-TBG-Ctrl group and AAV8-TBG-HNF1 偽 group with 6 mice in each group. Mouse liver fibrosis model was induced by CCl4. After modeling, the mice in AAV8-TBG-HNF1 偽 group were injected with adeno-associated virus (AAV8-TBG-HNF1 偽) with thyroxine binding globulin (TBG) promoter to specifically up-regulate the expression of HNF1 偽 in hepatocytes. AAV8-TBGCtrl mice were injected with control virus AAV8-TBGCtrl. Immunohistochemical method and qPCR were used to detect the expression of HNF1 偽, hematoxylin and eosin (H-E) staining, sirius red staining to detect the pathological changes and collagen deposition in liver tissue, and 偽 -SMA to detect the expression of 偽 -smooth muscle actin (偽 -SMA) by immunohistochemistry. The expression of type I collagen (COL1A1) and 偽 -SMA were analyzed by software quantitative analysis. The mRNA levels of fibrosis related genes (偽 -SMA and COL1A1), epithelial index (E-cadherin and Plakoglobin) and interstitial index (VimentinSlug and Twist1) were detected by qPCR. The effect of up-regulation of HNF1 偽 on cell proliferation and apoptosis in fibrotic liver was detected by immunohistochemistry and TUNEL method. Results compared with normal mice, CCL _ 4 could promote collagen deposition and 偽 -SMA expression in liver, and decrease the expression of HNF1 偽 during hepatic fibrosis (P0.01), compared with AAV8-TBG-Ctrl group. AAV8-TBG-HNF1 偽 specifically up-regulated the expression of HNF1 偽 in liver cells and inhibited the levels of COL1A1 and 偽 -SMA in fibrotic liver (P0.01). Upregulating the expression of HNF1 偽 had no significant effect on the expression of E-cadherin and Vimentin in the fibrotic liver (P0.05), nor did it affect the proliferation and apoptosis of hepatocytes (P0.05). Conclusion the specific up-regulation of HNF1 偽 expression in hepatocytes can significantly improve the liver fibrosis induced by CCl4 in mice.
【作者單位】： 第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)征醫(yī)院消化內(nèi)科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目(81230011)~~
【分類號(hào)】：R575.2

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本文編號(hào)：2185413