【摘要】：目的:通過研究重癥急性胰腺炎動物模型中自噬的表達(dá)及變化情況,探討自噬與重癥急性胰腺炎的關(guān)系,為臨床上重癥急性胰腺炎的治療提供潛在靶點(diǎn)。方法:將48只健康清潔級雄性SD大鼠,隨機(jī)分配為兩組,即對照組(SO)和急性壞死性胰腺炎組(ANP),每組24只大鼠。ANP組采用經(jīng)胰膽管逆行注射5%�；悄懰徕c方法制造急性壞死性胰腺炎動物模型。對照組僅翻動胰腺組織,不注射藥物。每組大鼠按照3h、6h和12h三個時相點(diǎn)再分為3個亞組,每亞組8只大鼠,分別于手術(shù)造模后不同時間點(diǎn)收集血清及胰腺組織,血清用于淀粉酶的檢測;胰腺組織一部分用4%甲醛固定,行HE染色和免疫組化測定LC3B、Beclin1及P62的表達(dá);另一部分用2.5%戊二醛固定行電鏡觀察。結(jié)果:1、造模情況及胰腺組織HE染色病理學(xué)評分:(1)大體觀察:SO組胰腺無結(jié)構(gòu)異常,周圍網(wǎng)膜清晰,未見腹水形成;ANP 3h亞組可見胰腺組織腫脹;6h亞組胰腺組織腫脹明顯加重,可見胰腺組織有散在出血點(diǎn),有少量腹水出現(xiàn);12h亞組胰腺組織及周圍網(wǎng)膜有片狀出血性壞死,可見中等量血性腹水。(2)胰腺組織病理學(xué)評分:根據(jù)Schmidt評分標(biāo)準(zhǔn):(1)ANP組與SO組對應(yīng)時間點(diǎn)各亞組比較病理學(xué)評分具有顯著性差異(P0.05);(2)ANP 12h亞組的病理學(xué)評分顯著增加,且胰腺組織損傷程度亦增加,與ANP 3h亞組相比具有顯著性差異(P0.05)。2、大鼠血清淀粉酶測定:(1)SO組的各亞組血清淀粉酶值均無明顯差異(P0.05);(2)ANP組與SO組相比,對應(yīng)時間點(diǎn)各亞組之間血清淀粉酶值顯著升高,且有顯著性差異(P0.05)。3、透射電鏡觀察胰腺組織:(1)SO組電鏡下胰腺細(xì)胞核膜結(jié)構(gòu)完整,胞質(zhì)中細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)基本正常,少見自噬小體;(2)ANP 3h亞組可見有呈“C”形雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬小體;6h亞組見線粒體明顯腫脹,自噬小體增多,部分自噬小體與溶酶體融合;12亞組可見自噬小體及自噬溶酶體進(jìn)一步增多,并存在溶酶體內(nèi)降解內(nèi)容物現(xiàn)象;4、免疫組化方法檢測胰腺組織LC3B、Beclin1及P62:(1)SO組中LC3B有少量表達(dá),各亞組間評分無明顯差異(P0.05);ANP組相較SO組,各亞組LC3B評分均有明顯增加(P0.05);ANP組中隨造模時間的延長,LC3B陽性細(xì)胞表達(dá)增多,評分增加,且各亞組間評分具有明顯差異(P0.05);(2)SO組Beclin1呈低表達(dá),且各亞組間評分無明顯差別(P0.05);與SO組比較,ANP組中各亞組Beclin1表達(dá)顯著增加(P0.05);其中,ANP 6h亞組和12h亞組細(xì)胞胞漿著色明顯變深,陽性細(xì)胞表達(dá)明顯增加,與3h亞組比較均具有顯著性差異(P0.05);(3)SO組P62有少量表達(dá),各亞組間評分無明顯差異(P0.05);與SO組比較,ANP組各亞組P62表達(dá)均有明顯增高,具有顯著性差異(P0.05);ANP組中各亞組間評分無明顯差異(P0.05)。結(jié)論:1、采用5%�；悄懰徕c經(jīng)胰膽管逆行注射法,成功建立了急性壞死性胰腺炎(ANP)的動物模型;2、與SO組相比,ANP組中自噬的表達(dá)顯著增加,并且自噬的表達(dá)隨胰腺病理損傷程度的加重而增加;3、與SO組相比,ANP組中P62的表達(dá)顯著增加,表明自噬的降解功能明顯下降;4、自噬的功能受損可能參與到急性胰腺炎腺泡細(xì)胞損傷的過程中。
[Abstract]:Objective: To study the expression and changes of autophagy in the animal model of severe acute pancreatitis (SAP), and to explore the relationship between autophagy and severe acute pancreatitis (SAP) and provide potential targets for the treatment of severe acute pancreatitis. Methods: 48 healthy and clean male SD rats were randomly assigned to two groups, that is, the control group (SO) and the acute necrotizing pancreatitis. The.ANP group of 24 rats in each group was used to produce acute necrotizing pancreatitis by retrograde injection of 5% sodium taurocholate to the group of 24 rats. The control group only turned the pancreas tissue and did not injecting drugs. The rats in each group were divided into 3 subgroups according to the three phase points of 3H, 6H and 12h, and 8 rats in each subgroup were different at the same time after the operation. The serum and pancreatic tissue were collected at the interval, and the serum was used for the detection of amylase. The pancreas tissue was fixed with 4% formaldehyde, HE staining and immunohistochemistry were used to determine the expression of LC3B, Beclin1 and P62. The other part was fixed with 2.5% glutaraldehyde for electron microscopy. Results: 1, the modeling situation and the HE staining of pancreatic gland pathology score: (1) gross observation: SO group pancreas No abnormal structure of the glands, clear surrounding omentum, no ascites formation, ANP 3H subgroup can see the swelling of the pancreas tissue, 6h subgroup of pancreatic tissue swelling obviously aggravated, the pancreatic tissue has scattered bleeding point, a small amount of ascites appear, the pancreas tissue and peripheral omentum in the 12h subgroup are hemorrhagic necrotic, and the pancreatic tissue disease is visible. (2) pancreatic tissue disease Science score: according to the Schmidt score standard: (1) the comparative pathological score of each group in group ANP and group SO had significant difference (P0.05); (2) the pathological score of the ANP 12h subgroup increased significantly, and the degree of pancreatic tissue injury increased, and the ratio of the ANP 3H subgroup was significantly different (P0.05).2, the serum amylase determination in the rat: (1) SO. There was no significant difference in serum amylase between the subgroups of the group (P0.05). (2) compared with the SO group, the serum amylase value of the ANP group was significantly higher than that of the SO group, and there was a significant difference (P0.05).3. The transmission electron microscope was used to observe the pancreatic tissue: (1) the nuclear membrane structure of the pancreatic cells in the SO group was intact and the structure of the organelle in the cytoplasm was basically normal. See autophagic corpuscle; (2) ANP 3H subgroup can see autophagic body with "C" bilayer structure; 6h subgroup can see obvious mitochondria swelling, autophagosome increasing, partial autophagosome and lysosome fusion; the 12 subgroup can see autophagosome and autophagosome further increase, coexist in dissolve enzyme to degrade content phenomenon; 4, immunohistochemical method inspection There was a small amount of expression of LC3B in group LC3B, Beclin1 and P62: (1) SO group, and there was no significant difference between the sub groups (P0.05). The LC3B scores in each subgroup were significantly increased in the ANP group than in the SO group (P0.05), and the expression of the LC3B positive cells increased with the prolongation of the model time in the ANP group, and the score of the subgroups increased, and the scores of each subgroup were significantly different (2) Group Beclin1 showed low expression and no significant difference in scores between subgroups (P0.05). Compared with group SO, Beclin1 expression in each group of group ANP increased significantly (P0.05); in ANP 6h subgroup and 12h subgroup, the cytoplasmic staining was obviously deeper, the expression of positive cells increased obviously, and there was significant difference (P0.05) compared with the 3H subgroup (P0.05); (3) SO group had a small number of tables. There was no significant difference in scores between subgroups of each group (P0.05). Compared with group SO, the expression of P62 in each subgroup of group ANP was significantly higher (P0.05), and there was no significant difference between the sub groups in group ANP (P0.05). Conclusion: 1, the animal model of acute necrotizing pancreatitis (ANP) was successfully established by using 5% sodium taurocholate through the retrograde injection of pancreatic bile duct. 2, compared with group SO, the expression of autophagy increased significantly in group ANP, and the expression of autophagy increased with the severity of pancreatic pathological damage; 3, compared with group SO, the expression of P62 increased significantly in group ANP, indicating that the degradation function of autophagy decreased obviously; 4, the impairment of autophagy may be involved in the process of acinar cell injury in acute pancreatitis.
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R576

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 葉青;鄭民華;;自噬的分子機(jī)制與病理生理意義[J];國際病理科學(xué)與臨床雜志;2007年04期

2 何韜;王海杰;譚玉珍;;自噬在細(xì)胞存活和死亡中的作用[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2008年01期

3 張志才;邵增務(wù);;自噬分子機(jī)制的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2008年01期

4 趙勇;師長宏;伍靜;張海;;自噬的形態(tài)特征及分子調(diào)控機(jī)制[J];中國比較醫(yī)學(xué)雜志;2010年10期

5 王梅;李慶林;;自噬與癌癥的治療[J];安徽醫(yī)藥;2010年08期

6 伍靜;趙勇;師長宏;張海;;自噬的形態(tài)特征及分子調(diào)控[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年20期

7 王雄;譚璐;;自噬研究進(jìn)展[J];亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥;2010年10期

8 卞龍艷;;運(yùn)動與自噬的關(guān)系進(jìn)展研究[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2011年07期

9 王偉;徐忠東;陶瑞松;;腫瘤發(fā)生過程中自噬與凋亡關(guān)系的研究[J];合肥師范學(xué)院學(xué)報;2011年06期

10 王光輝;;自噬與疾病[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2012年03期

相關(guān)會議論文 前10條

1 韋雪;漆永梅;張迎梅;;鎘、活性氧自由基與自噬發(fā)生的分子機(jī)制[A];中國活性氧生物學(xué)效應(yīng)學(xué)術(shù)會議論文集（第一冊）[C];2011年

2 秦正紅;粱中琴;陶陸陽;黃強(qiáng);劉春風(fēng);蔣星紅;倪宏;邢春根;;自噬在細(xì)胞生存與死亡中的作用[A];中國藥理學(xué)會第九次全國會員代表大會暨全國藥理學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

3 秦正紅;;自噬與腫瘤和神經(jīng)細(xì)胞生存——藥物作用的新靶位[A];全國生化與分子藥理學(xué)藥物靶點(diǎn)研討會論文摘要集[C];2008年

4 李芹;丁壯;;自噬功能研究進(jìn)展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

5 胡晨;張璇;滕衍斌;胡海汐;周叢照;;家蠶中自噬相關(guān)蛋白Atg8的結(jié)構(gòu)研究[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會2009年學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2009年

6 陳希;李民;Xiao-Ming Yin;李林潔;;通過不同途徑誘導(dǎo)自噬的化合物對Atg9的依賴性不同[A];細(xì)胞—生命的基礎(chǔ)——中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會2013年全國學(xué)術(shù)大會·武漢論文摘要集[C];2013年

7 陳涓涓;敬靜;蔡元博;張俊龍;;針對活體細(xì)胞自噬行為的發(fā)光金屬配合物的設(shè)計[A];中國化學(xué)會第28屆學(xué)術(shù)年會第8分會場摘要集[C];2012年

8 寧曉潔;鐘自彪;王彥峰;付貞;葉啟發(fā);;缺血再灌注誘導(dǎo)小鼠肝細(xì)胞自噬[A];2013中國器官移植大會論文匯編[C];2013年

9 吳曉琦;李丹丹;鄧蓉;江山;楊芬;馮公侃;朱孝峰;;CaMKKβ磷酸化Beclin 1調(diào)控自噬及其在腫瘤治療中的作用[A];2011醫(yī)學(xué)科學(xué)前沿論壇第十二屆全國腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

10 周鴻雁;裴中;陳杰;申存周;錢浩;劉妍梅;冼文彪;鄭一帆;陳玲;;線粒體動力改變參與了LRRK2突變導(dǎo)致的自噬[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

相關(guān)重要報紙文章 前3條

1 生命學(xué)院;俞立課題組在《科學(xué)》發(fā)文揭示自噬調(diào)控的重要機(jī)制[N];新清華;2012年

2 周飛 張粹蘭;花櫚木“自噬”可抗癌[N];廣東科技報;2011年

3 張明永;水稻自噬基因研究取得新進(jìn)展[N];廣東科技報;2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 賈盛楠;轉(zhuǎn)錄因子p8調(diào)控自噬的功能研究[D];浙江大學(xué);2015年

2 皮會豐;DNM1L蛋白介導(dǎo)的線粒體自噬在鎘致肝臟毒性中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 李倩;miRNAs介導(dǎo)的自噬抑制在類鼻疽桿菌感染免疫逃逸中的作用機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 黎炳護(hù);激活TRPV1誘導(dǎo)自噬在血管平滑肌細(xì)胞泡沫化中作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 陳江偉;自噬在椎間盤退變中的作用及機(jī)制研究[D];上海交通大學(xué);2014年

6 李榮榮;自噬在布比卡因肌毒性中的作用及機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

7 王維;NF-κB信號通路參與介導(dǎo)的自噬在高血壓大鼠心血管重構(gòu)的作用研究[D];山東大學(xué);2015年

8 劉春朋;日糧硒缺乏對雞肝臟蛋白質(zhì)組學(xué)及自噬變化的影響[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

9 梁蓓蓓;P53凋亡刺激蛋白ASPP2調(diào)控細(xì)胞自噬的研究[D];上海交通大學(xué);2012年

10 李少瑩;自噬在LPS誘導(dǎo)的肺泡上皮細(xì)胞死亡中的作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 匡紅;Jnk2通過smARF的降解來調(diào)控壓力誘導(dǎo)的線粒體自噬及組織損傷[D];浙江理工大學(xué);2015年

2 洪永桃;自噬在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞中的作用及甲氨蝶呤對自噬的影響[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

3 李寧;自噬在嗎啡心肌保護(hù)中的作用及機(jī)制研究[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

4 劉冰;腦缺血預(yù)處理對大鼠局灶性腦缺血再灌注后自噬及凋亡的影響[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

5 王存凱;microRNA-30a-5p通過抑制自噬阻止肝星狀細(xì)胞激活[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 張宇程;泛素連接酶HOIL-1L在線粒體自噬中的功能與機(jī)制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

7 唐芙蓉;自噬對奶山羊雄性生殖干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

8 陳軍童;腎損傷分子1對高糖誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞自噬作用的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

9 包勇;Kap1在LBH589誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞MCF-7自噬形成中的作用[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

10 魏園玉;P53缺失型HL-60白血病細(xì)胞內(nèi)Nucleostemin下調(diào)對mTOR通路介導(dǎo)的自噬活性的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

，

本文編號：2173660