本文關(guān)鍵詞：Tim-1信號通路在小鼠實驗性結(jié)腸炎中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《南昌大學》 2012年

Tim-1信號通路在小鼠實驗性結(jié)腸炎中的作用

王萍  

【摘要】：背景與目的: 炎癥性腸�。↖BD）的發(fā)病機制和病因非常復雜，我們的前期研究和文獻報道發(fā)現(xiàn)TLR信號通路和Th免疫反應的異常在其中起著十分重要的作用，并且這些異常在不同類型的IBD（CD和UC）中有所不同，但是其發(fā)生機制尚不明確。為何不同類型的IBD會出現(xiàn)不同的Th優(yōu)勢反應，，它們的調(diào)控機制不清楚。Tim-1信號通路是最新發(fā)現(xiàn)的調(diào)節(jié)Th免疫反應的核心環(huán)節(jié)，并且與TLR信號通路有著密切的關(guān)系。然而Tim-1信號通路在IBD發(fā)生發(fā)展中的作用，及它與IBD的Th免疫反應和TLR信號通路變化的關(guān)系國內(nèi)外尚未見報道。為此，本文研究不同類型的小鼠實驗性結(jié)腸炎（分別類似人類的UC和CD的動物模型）Tim-1信號通路的變化及其與調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）和TLR信號通路的關(guān)系，并以此為干預靶點，分別觀察Tim-1信號通路對不同類型小鼠實驗性結(jié)腸炎的Treg細胞和TLR信號通路的影響，及其與疾病的的關(guān)系，從這一新的角度來探討IBD的發(fā)病機制，為IBD的防治提供新的靶點和方向。 方法: 1．實驗分組 (1) Tim-1抗體未處理小鼠組；(2)Tim-1抗體預處理小鼠組； 每組內(nèi)再分為：①正常對照組；②D SS模型組；③TNBS模型組。 2．小鼠實驗性結(jié)腸炎模型的建立 (1)DSS誘導小鼠實驗性結(jié)腸炎模型的建立：BALB/c小鼠自由飲用5%DSS溶液7天，建立小鼠急性結(jié)腸炎模型。 (2)TNBS誘導小鼠實驗性結(jié)腸炎模型的建立：BALB/C小鼠禁食、不禁飲24小時后，乙醚麻醉，用3.5F導管從肛門插入腸道深約5.5cm處，灌注TNBS/50%乙醇溶液100μ1(含2mg TNBS的50%乙醇溶液)，之后將小鼠倒置60秒。從造模第一天開始，每日觀察并記錄各組小鼠體重、大便性狀，7天后處死小鼠。 (3)小鼠Tim-1信號通路的干預：小鼠建模前12h，腹腔內(nèi)注射100μg抗-Fc抗體消除非特異性吸附后，再給予250μg抗-Tim-1Ab腹腔注射，對照小鼠給予同等劑量的IgG2a。 3.觀察以下各項指標： (1)各組小鼠每天的體重變化、結(jié)腸炎疾病活動指數(shù)（DAI積分）； (2)肉眼觀察小鼠結(jié)腸大體形態(tài)改變，HE染色觀察小鼠結(jié)腸炎病理組織學損傷程度； (3)Western blot法檢測小鼠結(jié)腸組織中Foxp3、MyD88、SIGIRR、Tim-1蛋白的表達； (4)免疫組織化學染色檢測小鼠結(jié)腸組織中Foxp3、MyD88、SIGIRR、NF-κBp65蛋白的表達。結(jié)果： 1.各組小鼠體重變化及DAI積分 實驗第5、7天，各模型組小鼠體重下降百分比均顯著高于相應的對照組(P0.01)。在Tim-1抗體預處理組中，DSS組小鼠體重下降百分比顯著高于TNBS組(P0.01)。小鼠體重變化在Tim-1抗體未處理組和預處理組之間有差異，僅實驗第7天DSS組間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)，其余組間差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。 在實驗第5、7天，無論是Tim-1抗體未處理組還是預處理組中，模型組小鼠DAI積分均顯著高于相應對照組(P0.01)。Tim-1抗體預處理的各組小鼠DAI積分均高于未處理組，但都無統(tǒng)計學意義（P0.05）。 2.小鼠腸黏膜大體形態(tài)和結(jié)腸組織病理變化 (1)無論是Tim-1抗體未處理組還是預處理組，對照組小鼠結(jié)腸黏膜呈淡紅色、光滑完整，未見充血、水腫、糜爛、潰瘍，DSS組和TNBS組小鼠結(jié)腸黏膜可見充血、水腫、糜爛。 (2)無論是在Tim-1抗體未處理組還是預處理組，模型組小鼠的結(jié)腸炎癥程度、病變深度、隱窩破壞均顯著高于對照組(P0.01)。Tim-1抗體預處理的各組小鼠病理組織學損傷程度均高于未處理組，但只有DSS組間差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 3.小鼠結(jié)腸組織中Foxp3的表達 (1)免疫印跡檢測發(fā)現(xiàn)，在Tim-1抗體未處理組中，模型組Foxp3蛋白的表達低于對照組，但無統(tǒng)計學意義（P0.05）。在Tim-1抗體預處理組中，對照組Foxp3蛋白的表達顯著高于兩個模型組（P0.01）。Foxp3蛋白表達在Tim-1抗體未處理組和預處理組之間的差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。 (2)免疫組化染色發(fā)現(xiàn)，無論是在Tim-1抗體未處理組還是預處理組中，對照組Foxp3陽性炎細胞數(shù)顯著高于模型組（P0.01）。Tim-1抗體預處理的各模型組Foxp3陽性細胞數(shù)均低于未處理小鼠，但只有DSS組間差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 4.小鼠結(jié)腸組織中SIGIRR的表達 (1)免疫印跡檢測發(fā)現(xiàn)，在Tim-1抗體未處理組中，對照組SIGIRR蛋白表達高于模型組（P0.01，0.05），DSS組高于TNBS組（P0.05）。在Tim-1抗體預處理組中，對照組顯著高于DSS組（P0.01）。SIGIRR蛋白的表達在Tim-1抗體未處理組和預處理組之間的差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。 (2)免疫組化染色發(fā)現(xiàn)，無論是在Tim-1抗體未處理組還是預處理組中，對照組SIGIRR蛋白的表達顯著高于模型組（P0.01）。SIGIRR蛋白的表達在Tim-1抗體未處理組和預處理組之間的差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。 5.小鼠結(jié)腸組織中Myd88的表達 (1)免疫印跡檢測發(fā)現(xiàn)，無論是在Tim-1抗體未處理組還是預處理組中，對照組Myd88蛋白的表達顯著低于模型組（P0.01），DSS顯著組高于TNBS組（P0.01）。Myd88蛋白的表達在Tim-1抗體未處理組和預處理組之間的差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。 (2)免疫組化染色發(fā)現(xiàn)，無論是在Tim-1抗體未處理組還是預處理組中，對照組Myd88蛋白的表達顯著低于模型組（P0.01），在Tim-1抗體預處理組中，DSS組還顯著高于TNBS組（P0.01）。同時Tim-1抗體預處理的各模型組MyD88的表達高于未處理組，但只有DSS組間差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 6.小鼠結(jié)腸組織中Tim-1的表達 免疫印跡檢測發(fā)現(xiàn)，在Tim-1抗體未處理組中，對照組Tim-1蛋白的表達顯著高于模型組（P0.01）；在Tim-1抗體預處理組中，對照組Tim-1蛋白表達均高于模型組，對照組和TNBS組之間有顯著差異（P0.01），但對照組和DSS組之間差異無統(tǒng)計學意義（P0.05），DSS組顯著高于TNBS組（P0.05）。在對照組和DSS組中，Tim-1抗體未處理組的Tim-1蛋白表達均顯著低于預處理組（P0.01）。 7.小鼠結(jié)腸組織中NF-κB p65的表達 免疫組化染色發(fā)現(xiàn)，無論是在Tim-1抗體未處理組還是預處理組中，對照組NF-κB p65蛋白表達顯著低于兩個模型組（P0.01）；在Tim-1抗體預處理組中，DSS組的表達還顯著高于TNBS組（P0.05）。Tim-1抗體預處理的各模型組NF-κB p65表達均高于未處理組，但只有DSS組間差異有統(tǒng)計學意義（P0.01）。結(jié)論： 1.本研究成功的建立了DSS及TNBS誘導的實驗性結(jié)腸炎小鼠模型，并且Tim-1抗體預處理可加劇小鼠實驗性結(jié)腸炎的腸黏膜病變，提示了Tim-1信號通路參與了小鼠實驗性結(jié)腸炎的發(fā)病。 2. Tim-1抗體預處理后小鼠實驗性結(jié)腸炎腸黏膜中Foxp3蛋白表達降低，提示Tim-1抗體可能通過調(diào)控Treg細胞反應來影響小鼠結(jié)腸炎的發(fā)生。 3. Tim-1抗體預處理后小鼠實驗性結(jié)腸炎腸黏膜中NF-κB p65、MyD88蛋白表達上升，提示Tim-1抗體可能通過激活TLRs/NF-κB信號通路來影響小鼠實驗性結(jié)腸炎的發(fā)生。

【關(guān)鍵詞】：
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R574.62
【目錄】：

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本文編號：211651