本文關(guān)鍵詞：BCL-2，NF-kB，血管緊張素I I-I受體在大鼠非酒精性脂肪肝病中的作用及其機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《瀘州醫(yī)學(xué)院》 2013年

BCL-2，NF-kB，血管緊張素I I-I受體在大鼠非酒精性脂肪肝病中的作用及其機制研究

石海燕  

【摘要】：目的：非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)近年來發(fā)病率逐年增高,是一種嚴重威脅著人類健康的常見疾病，是在患者無過量飲酒史的情況下，發(fā)生的與酒精性肝病(ALD)相似的肝臟病理學(xué)變化，其病理生理改變主要是肝細胞發(fā)生炎癥、壞死和凋亡,病程逐漸向脂肪性肝炎、肝纖維化，肝硬化發(fā)展�，F(xiàn)有研究認為非酒精性肝病,是一種與遺傳基因易感性以及胰島素抵抗密切相關(guān)的應(yīng)激性代謝性肝損傷。本研究通過建立非酒精性脂肪性肝病大鼠模型，隨著其病變進展在不同時間點觀察肝細胞凋亡，炎癥，纖維化，以及相關(guān)的蛋白BCL-2、NF-KB、血管緊素Ⅱ-1受體的表達情況，從而探討以上三種相關(guān)蛋白在非酒精性肝病中的作用及其機制，并研究通過抑制NF-KB表達后，所致的肝臟病理形態(tài)變化及BCL-2,血管緊素ΙΙ-1受體的表達改變情況，為研究NAFLD發(fā)病機制及治療方案提供新的研究佐證。方法：健康成年雄性Spague-Dawlay(SD)大鼠42只按隨機表為三組3組：正常組18只（普通飼料喂養(yǎng)），模型組18只（高脂飲食喂養(yǎng)），干預(yù)組6只（高脂飲食飼養(yǎng)10周后PDTC腹腔注射4周），分別于6,10,14周末處死各組大鼠6只，每組大鼠處死后以心臟采血，并測定各組大鼠血脂和轉(zhuǎn)氨酶值，取肝組織標本測定肝指數(shù)（處死大鼠開腹后迅速取出肝臟，稱肝濕重，（計算方法:肝濕質(zhì)量/體質(zhì)量×100%），固定并切片后蘇木精-伊紅（HE）染色觀察肝組織病理改變（脂肪變，炎癥，纖維化等）；采用TUNEL法測肝細胞凋亡百分數(shù)法測肝細胞凋亡百分數(shù)；免疫組織化學(xué)法檢測Bcl-2，NF-KB在肝組織中表達情況；RT-PCR法(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)檢測肝臟血管緊張素二-1受體（AT1R）的表達。計量資料用均數(shù)±標準差（ˉx±S）表示，P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。不同時間段正常組與模型組組間比較，模型組與正常組組間比較，14周干預(yù)組，模型組，正常組三組比較采用方差分析，并進行方差齊性檢驗，齊者采用單因素方差分析。結(jié)果：進行實驗的42只大鼠全部存活，都進入結(jié)果進行分析。⑴隨著時間的延長，6周末及10周末均成功構(gòu)建非酒精性脂肪肝及非酒精性肝炎模型，14周末模型組出現(xiàn)4只大鼠肝纖維化，干預(yù)組出現(xiàn)1只大鼠纖維化。（2）6、10、14周模型組大鼠在肝濕變數(shù)、血脂、血清轉(zhuǎn)氨酶水平等方面逐步增高，肝組織脂肪變、炎癥程度逐漸加重，后期出現(xiàn)纖維化表現(xiàn)；而干預(yù)組在上述方面亦有增高。（3）HE染色提示模型組6、10、14周動物肝組織出現(xiàn)脂肪變性并隨造模時間的延長而加重，，都明顯高于正常組(P0.01);10組大鼠肝臟可見少許氣球樣肝細胞及程度不等的肝細胞壞死和小葉內(nèi)炎癥、腺泡內(nèi)散在個別點灶狀壞死，部分可見點灶狀壞死增多，門管區(qū)輕中度炎癥。模型組6,10周大鼠未見肝組織纖維化，但造模14周及干預(yù)組14周分別有4/6、1/6只大鼠出現(xiàn)肝細胞竇周纖維化。6,10,14周模型組大鼠的肝臟活動度積分均高于正常組(P0.01），14周末時，干預(yù)組肝組織的活動度積分低于模型組(P0.05）。(4)肝細胞凋亡百分數(shù)隨著造模時間的延長而增加,模型組6周、10周、14周分別為11.15±0.82、16.19±1.23、19.23±2.31，正常組6周、10周、14周分別為1.11±0.15、1.26±0.11、1.15±0.20,其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；⑷蛋白免疫組化顯示：BCL-2蛋白在模型組的細胞漿，細胞膜呈棕色表達，并隨著造模時間的延長，染色程度加深，面積增大；Bcl-2在正常組的表達均為散在弱陽性，模型組組6、10、14周陽性細胞數(shù)漸增加，干預(yù)組Bcl-2表達低于14周模型組(P0.05),NF-КB細胞染色呈黃色或綜黃色為陽性，定位于細胞質(zhì)和（或）細胞核，模型組6、10、14周大鼠肝細胞內(nèi)可見NF-КB明顯活化，相對于同時間段正常組表達之間差別有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)，而且隨造模時間延長，其表達隨之增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)，14周干預(yù)組表達受較14周造模組受到抑制，但是較正常組比較其表達也是明顯增高的(P0.05)。(5)RT-PCR法檢測肝臟AT1RmRNA顯示：AT1RmRNA表達量在造模組中隨著造模時間的延長，表達量逐漸增加，且每兩組模型組組間都存在統(tǒng)計學(xué)差異（p0.05）造模組AT1RmRNA表達量均明顯高于同時間段正常組（p0.01），14周末，模型組，正常組，干預(yù)組三組間AT1RmRNA表達量存在差異（p0.05）。結(jié)論：1.在非酒精性脂肪性肝病大鼠模型中，隨著肝臟病變的加重,其細胞凋亡,炎癥及纖維化愈加明顯,其表現(xiàn)為Bcl-2,NF-KB,血管緊素ΙΙ-1受體的表達增加。2在NAFLD發(fā)生發(fā)展過程中對NF-KB進行抑制調(diào)控后,NAFLD肝細胞炎癥,纖維化也受到抑制,同時也出現(xiàn)Bcl-2,血管緊素ΙΙ-1受體表達的降低,NF-KB可能通過調(diào)節(jié)Bcl-2,血管緊素ΙΙ-1受體,的表達在NAFLD病程中發(fā)揮作用。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R575.5
【目錄】：

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8 許黎忠;螺內(nèi)酯對百草枯中毒大鼠肺纖維化的干預(yù)作用及其作用機制的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

9 詹增土;慢性全腦低灌注大鼠側(cè)腦室旁白質(zhì)改變及MMP-2，3和7的表達[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

10 向永紅;慢性間斷性低氧大鼠氧化應(yīng)激狀態(tài)與RAS相關(guān)性研究及NAC干預(yù)作用[D];中南大學(xué);2010年

  本文關(guān)鍵詞：BCL-2，NF-kB，血管緊張素I I-I受體在大鼠非酒精性脂肪肝病中的作用及其機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：211267