本文選題：肝硬化 + 骨髓間充質(zhì)干細胞��； 參考：《蘭州大學》2017年碩士論文

【摘要】：背景:干細胞移植治療肝硬化在動物實驗、臨床研究已被廣泛研究,堿性成纖維細胞生長因子體外條件下可以促進干細胞增殖,利用bFGF培養(yǎng)后的干細胞治療肝硬化的體內(nèi)療效目前尚不確定。目的:探索bFGF對BMSC生長和增殖的影響。加入0.1%bFGF培養(yǎng)后的骨髓間充質(zhì)干細胞通過小鼠尾靜脈注射后肝功能ALT、AST、ALB水平、組織病理學改變及膠原沉積變化情況。方法:全骨髓貼壁法提取雄性SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞;流式細胞檢測BMSC。雌性昆明小鼠46只隨機分為分為5組:A組(CCl4+PBS)、B組(CCl4+bFGF)、C組(CCl4+bFGF-BMSC)、D組(CCl4+bFGF+BMSC)、E組(CCl4+bFGF+BMSC3次移植)。小鼠CCl4造模10周后分別尾靜脈注射bFGF+或bFGF-培養(yǎng)的BMSC,酶聯(lián)免疫法檢測肝功能,HE染色檢測組織病理學改變情況;Masson三色染色法檢測肝組織膠原沉積情況。結(jié)果:(1)BMSC生長情況:觀察各組傳代細胞的生長情況,bFGF-、bFGF+組細胞24h完全貼壁,貼壁細胞初期呈梭形或不規(guī)則形,細胞形態(tài)無明顯異常,主要以梭形為主,bFGF+組細胞增殖較快,于第4天鋪滿瓶底。bFGF-組較bFGF+細胞生長相對緩慢,第6-7天時基本完全鋪滿細胞培養(yǎng)瓶。(2)細胞生長:10ng/ml bFGF體外培養(yǎng)條件下,BMSC生長速率顯著高于無bFGF培養(yǎng)。(3)流式檢測:CD29、CD44陽性表達,CD45呈陰性表達。(4)化學法檢測肝臟功能:ALT水平在模型對照組(A組)與B組比較無顯著性差異(P0.05),C組、D組、E組ALT水平與A組、B組比較均有下降(兩兩比較具有顯著性差異,P0.05);ALT水平在D組、E組均較C組下降(P0.05);E組較D組下降(P0.05)。AST水平在A組與B組間無顯著性差異(P0.05);C組、D組、E組兩兩之間無顯著性差異(P0.05);而C組、D組、E組較A組或B組具有明顯下降(P0.05)。(5)HE染色結(jié)果:A組、B組HE染色見肝細胞明顯水腫、脂肪變性、橋接壞死,肝索排列紊亂,假小葉廣泛形成。C組肝細胞水腫、脂肪變性,炎性細胞浸潤,但程度較模型組有所減輕,匯管區(qū)纖維沉積,可見假小葉結(jié)構(gòu);D組、E組肝細胞水腫情況、炎性細胞浸潤程度較BMSC組明顯改善,假小葉結(jié)構(gòu)可見,匯管區(qū)可見纖維沉積。(6)Masson結(jié)果顯示,A組、B組肝門脈區(qū)大量綠染纖維沉積,肝實質(zhì)內(nèi)綠色纖維浸潤,纖細的纖維間隔從匯管區(qū)延伸至肝實質(zhì),分隔肝小葉形成假小葉。A組纖維面積較B組無顯著性差異(P0.05);與A組、B組相比,C組、D組、E組纖維量減少,較A組、B組明顯改善,差異有統(tǒng)計學意義(p值均0.05);C組、D組匯管區(qū)、肝實質(zhì)有可見纖維沉積,但兩組纖維面積無顯著性差異(P0.05);E組較C組、D組面積均有顯著降低(P0.05)。結(jié)論:體外培養(yǎng)加入bFGF后BMSC生長速度較無bFGF時顯著提高,細胞形態(tài)大致相同,流式檢測細胞表面標志物CD29、CD44、CD45表達與無bFGF時相同。BMSC移植能夠改善肝硬化小鼠肝功能、肝硬化程度、膠原纖維沉積,培養(yǎng)中加入bFGF的BMSC更為顯著地改善肝損傷程度和纖維化程度,重復細胞移植后肝纖維化程度改善更為顯著。
[Abstract]:Background: stem cell transplantation in the treatment of liver cirrhosis in animal experiments, clinical research has been widely studied, basic fibroblast growth factor can promote stem cell proliferation in vitro. The in vivo efficacy of stem cells cultured with bFGF in the treatment of liver cirrhosis is uncertain. Objective: to explore the effect of bFGF on the growth and proliferation of BMSC. Bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) cultured with 0.1GF were injected through caudal vein in mice. The level of ALB, histopathological changes and collagen deposition in liver function were observed. Methods: bone marrow mesenchymal stem cells from male SD rats were extracted by whole bone marrow adherent method, and BMSCs were detected by flow cytometry. 46 female Kunming mice were randomly divided into 5 groups: group B: CCl4 bFGF group B group CCl4 bFGF group B group (group C): CCl4 bFGF group B group (group D): CCl4 bFGF group B group (group E): CCl4 bFGF BMSC3 transplants. After 10 weeks of mouse CCl4 model, bFGF or bFGF- cultured BMSCs were injected into tail vein respectively. Liver function was detected by enzyme-linked immunosorbent assay (Elisa) to detect histopathological changes. Masson trichrome staining was used to detect collagen deposition in liver tissue. Results the growth of BMSC: the growth of BMSCs in each group was observed. The cells in the bFGF-bFGF group were completely adhered to the wall for 24 hours. The adherent cells were fusiform or irregular at the initial stage, and the morphology of the cells was not obviously abnormal. The proliferation of the cells in the main fusiform group was faster than that in the bFGF group. On the 4th day, the growth of bFGF cells was slower than that of BFGF- group. After 6-7 days, the cell growth rate of bFGF was significantly higher than that of bFGF free culture.) flow cytometry showed negative expression of CD44 + CD44 and negative expression of CD45. 4) the liver function was detected by chemical method. There was no significant difference between group A and group B (P 0.05). The level of ALT in group D was significantly lower than that in group A (P 0.05) and the level of alt in group B (P 0.05) was significantly lower than that in group C (P 0.05). There was no significant difference between group A and group B in the level of P0.05A. There was no significant difference between group D and group E, while group C had a significant decrease in P0.05. 5HE staining results showed that the liver cells were edema in group A and group B compared with those in group A or group B, while in group C, there was no significant difference between group A and group B in the level of P0.05A, and there was no significant difference between group D and group B in the levels of P0.05A and P0.05.The results showed that there was no significant difference between group D and group B. Fatty degeneration, bridging necrosis, disordered arrangement of hepatic cord, edema of hepatocytes, steatosis and infiltration of inflammatory cells were widely formed in group .C, but the degree was less than that in the model group. The edema of hepatocytes, the degree of inflammatory cell infiltration and the structure of pseudolobules were obviously improved in group D and group E, and the fibrous deposition was observed in portal area of group A and B. The results showed that a large number of green stained fibers were deposited in portal vein of group A and B. Green fiber infiltration in hepatic parenchyma, fine fibrous septum extending from catchment area to hepatic parenchyma, no significant difference in fiber area between group A and group B in the formation of pseudolobules, and decrease in fiber content in group C and group D in comparison with group A and group B. Compared with group A, group B, the difference was statistically significant (P < 0.05). There was significant difference between group C and group C (P < 0.05), but there was no significant difference in fiber area between group A and group C (P 0.05), but the area of fiber in group E was significantly lower than that in group C (P 0.05), but there was no significant difference in fiber area between group C and group C (P 0.05). Conclusion: the growth rate of BMSC in vitro was significantly higher than that without bFGF, and the cell morphology was approximately the same. The expression of CD29, CD4, CD4, CD45, a marker on cell surface, could improve liver function and degree of liver cirrhosis in cirrhotic mice as compared with those without bFGF. The degree of liver injury and fibrosis was significantly improved by adding bFGF to BMSC and the degree of liver fibrosis was improved after repeated cell transplantation.
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R575.2

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張利潮;梁國棟;;癌細胞表面標志研究進展[J];中國腫瘤臨床;1989年01期

2 周鎮(zhèn);陳悅書;;淋巴細胞表面標志分析人類淋巴細胞亞型和意義[J];國外醫(yī)學(內(nèi)科學分冊);1981年02期

3 譚子興,張德芳,白炎;急性淋巴細胞性白血病細胞的表面標志[J];上海免疫學雜志;1986年02期

4 譚友健;;急性淋巴性白血病中的細胞表面標志[J];國外醫(yī)學情報;1980年20期

5 洪錦心;人體淋巴細胞亞群研究進展[J];腫瘤;1984年01期

6 沈關(guān)心,朱慧芬,蘇娜,王曉林,孫蓓,張悅,張東華,唐錦治;骨髓瘤白血病患者外周血細胞表面標志的表達[J];免疫學雜志;1991年03期

7 沈柏均,嚴志,傅曾矩;冷凍保存對淋巴細胞表面標志的影響[J];山東醫(yī)藥;1994年07期

8 黃瑾,韓淑華,劉明蘭,李淑芳;利用酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)檢測細胞表面標志的初步探討[J];白求恩醫(yī)科大學學報;1999年02期

9 劉航;足細胞表面標志及尿中足細胞的檢測[J];國外醫(yī)學.泌尿系統(tǒng)分冊;2003年04期

10 吳長有;劉杰;;利用多種表面標志鑒別正常人外周血初始和記憶T細胞亞群[J];免疫學雜志;2006年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 楊怡;郭寧;施巍;艾輝勝;;細胞表面標志及髓過氧化物酶的電鏡雙重定位[A];第八次全國電子顯微學會議論文摘要集（Ⅰ）[C];1994年

2 李革飛;李劍平;;應用流式細胞術(shù)檢測神經(jīng)干細胞表面標志物-Nestin[A];中國輸血協(xié)會第五屆輸血大會論文專集（摘要篇）[C];2010年

3 王新國;;硫化氫影響肝硬化膠原蛋白生成[A];第四屆中國醫(yī)師協(xié)會感染科醫(yī)師大會暨傳染病診治高峰論壇、浙江省醫(yī)學會肝病、感染病學學術(shù)年會論文匯編[C];2011年

4 鄒薇;吳南屏;沃健兒;;人類免疫缺陷病毒(HIV)感染中白介素—7(IL—7)與T細胞表面標志研究[A];第十二次全國中西醫(yī)結(jié)合肝病學術(shù)會議論文匯編[C];2003年

5 王敏;時永全;周新民;韓英;;以膠原水凝膠為支架體外構(gòu)建肝細胞三維共培養(yǎng)系統(tǒng)[A];中華醫(yī)學會第十六次全國病毒性肝炎及肝病學術(shù)會議論文匯編[C];2013年

6 楊英;李建州;潘小平;周鵬程;虞曉鵬;曹紅翠;王英杰;李蘭娟;;基于微囊懸浮流化床式反應器的肝細胞培養(yǎng)模式的研究[A];第二屆全國病毒性肝炎慢性化重癥化基礎與臨床研究進展學術(shù)會議論文匯編[C];2012年

7 李善高;斯淑英;俞蕾敏;孟立娜;呂賓;;瘦素及功能性受體表達與大鼠肝纖維化/肝硬化關(guān)系的研究[A];中華醫(yī)學會第七次全國消化病學術(shù)會議論文匯編（上冊）[C];2007年

8 李善高;斯淑英;俞蕾敏;孟立娜;呂賓;;瘦素及功能性受體表達與大鼠肝纖維化/肝硬化關(guān)系的研究[A];浙江省中西醫(yī)結(jié)合學會消化專業(yè)第八次學術(shù)年會暨省中西醫(yī)結(jié)合消化系疾病新進展學習班論文匯編[C];2007年

9 鄭明華;林海龍;陳永平;;肝細胞與異種細胞混合共微囊化的研究進展[A];傳染病診治高峰論壇暨2007年浙江省感染病學、肝病學學術(shù)年會論文匯編[C];2007年

10 劉耀文;韋佼君;嚴仕力;李孝紅;;體外共培養(yǎng)肝細胞作為藥物篩選模型的研究[A];第十一屆全國博士生學術(shù)年會（生物醫(yī)藥專題）論文集（下冊，，墻報P25-P48）[C];2013年

相關(guān)重要報紙文章 前5條

1 清華大學第一附屬醫(yī)院 稅朝祥;干細胞治心衰：孕育中的希望[N];健康報;2007年

2 特約記者 王姿英;肝硬化古方劑有了病理證據(jù)[N];健康報;2013年

3 記者 馮衛(wèi)東;一種分子能使移植干細胞增殖10倍[N];科技日報;2014年

4 趙文;“古藺肝蘇”可改善肝細胞功能[N];中國醫(yī)藥報;2007年

5 黎彬;可維持干細胞增殖能力的蛋白[N];中國醫(yī)藥報;2003年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 王學翔;果蠅干細胞表面標志物CD133/prominin-like和CD117/PVR的互作蛋白鑒定及功能研究[D];浙江大學;2016年

2 吳艷;雌激素對血管壁內(nèi)CD34~+干細胞/前體細胞增殖及向平滑肌細胞分化的影響[D];武漢大學;2015年

3 劉敬華;腺病毒介導的MMP-8截短體融合HGF雙突變體1K1促進肝細胞增殖及緩解肝硬化的體內(nèi)外研究[D];浙江大學;2016年

4 陳燕飛;肝硬化患者腸道微生態(tài)研究[D];浙江大學;2013年

5 孫松;肝移植骨髓間充質(zhì)干細胞的體內(nèi)外實驗研究[D];復旦大學;2014年

6 魯燕華;肝細胞組織化反應器的構(gòu)建及應用研究[D];浙江大學;2012年

7 蔡磊;基于微囊化豬肝細胞的生物人工肝治療食蟹猴急性肝衰竭的實驗研究[D];南方醫(yī)科大學;2017年

8 劉杰;肝硬化模型比較蛋白質(zhì)組學研究及扶正化瘀方對血漿蛋白質(zhì)組影響[D];復旦大學;2007年

9 安偉德;骨髓間充質(zhì)干細胞定向分化肝細胞并肝內(nèi)移植及軟肝煎應用對肝纖維化形成大鼠肝功能影響的研究[D];大連醫(yī)科大學;2005年

10 顧勁揚;骨髓間充質(zhì)干細胞與肝細胞共培養(yǎng)的實驗研究[D];南京醫(yī)科大學;2009年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 趙福平;堿性成纖維細胞生長因子在骨髓間充質(zhì)干細胞治療小鼠肝硬化中的作用[D];蘭州大學;2017年

2 尚玉攀;人退變椎間盤髓核組織來源干細胞表面標志物的低表達對其生物學特性的影響[D];暨南大學;2017年

3 趙琳;白血病的細胞表面標志及染色體檢查的臨床意義[D];重慶醫(yī)科大學;2008年

4 王建梅;氟對小鼠B淋巴細胞表面標志、內(nèi)吞、凋亡和周期的影響[D];山西農(nóng)業(yè)大學;2013年

5 黎業(yè)娟;趨化軸CXCL12-CXCR4/CXCR7在肝硬化脾亢大鼠脾臟組織中的表達及意義[D];海南大學;2016年

6 牛艷君;小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞對肝硬化模型作用的研究[D];蘭州大學;2016年

7 劉麗莉;肝硬化患者心肌損傷及炎性標志物的水平變化及臨床意義[D];吉林大學;2016年

8 趙劍成;肝硬化患者QT間期延長與“母病及子”理論的臨床觀察性研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學;2016年

9 段明;過氧化氫在肝硬化門靜脈高壓癥高動力循環(huán)中的作用[D];上海交通大學;2015年

10 張俊晶;四氯化碳輔以營養(yǎng)調(diào)控制備豬肝硬化模型的實驗研究[D];內(nèi)蒙古醫(yī)學院;2006年

本文編號：1922203