本文選題：胰高血糖素樣肽-1 + 非酒精性脂肪肝�。� 參考：《鄭州大學》2014年碩士論文

【摘要】：背景 非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD）是指除外酒精和其他明確的損肝因素所致的，以肝臟過量脂肪積聚為特征的疾病，目前被認為是代謝綜合征在肝臟的表現。胰島素抵抗（insulin resistance，IR）和氧化應激（oxidative stress）是NAFLD發(fā)病的主要病理生理基礎。脂肪量和肥胖相關基因(fat mass and obesity associated gene，FTO)是通過全基因組關聯分析發(fā)現的與肥胖密切相關的一個基因。研究顯示，FTO參與體重調節(jié)并與胰島素抵抗、糖脂代謝明顯相關。郭劍津等研究發(fā)現FTO通過增加肝細胞氧化應激水平促進脂質沉積，是NAFLD形成的機制之一[1]。本課題組前期研究發(fā)現，用高脂飲食制備SD大鼠NAFLD模型時，隨著造模時間的延長，大鼠肝臟中FTO的表達水平也相應升高，加重了脂質代謝紊亂。胰高血糖素樣肽1（glucagon-like peptide-1，GLP-1）作為一類新型治療糖尿病的藥物應用于臨床時發(fā)現其具有改善胰島素抵抗、降低體重的作用，近年來越來越多地被用于NAFLD的治療研究中。ShaniBen-Shlomo等研究發(fā)現GLP-1可抑制肝臟脂肪生成和脂質沉積，減輕肝臟炎癥反應[2]。磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路是細胞內一條重要的信號傳導通路，研究發(fā)現GLP-1可通過PI3K/Akt通路調節(jié)細胞的代謝與增殖凋亡。GLP-1受體激動劑艾塞那肽是否通過PI3K/Akt通路調節(jié)FTO基因的表達，進而改善脂代謝紊亂，治療NAFLD，目前尚無這方面的文獻報道。 目的 探討胰高血糖素樣肽1（GLP-1）受體激動劑艾塞那肽對高脂誘導的人正常肝細胞L02細胞脂肪變性中FTO基因表達的影響，探索GLP-1治療非酒精性脂肪肝的機制。 方法 體外用含10%胎牛血清（FBS）的RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng)人正常肝細胞L02細胞，采用含50%FBS的RPMI1640培養(yǎng)液誘導L02細胞脂肪變性，實驗共分為5組：①正常對照組：培養(yǎng)液FBS的濃度為10%；②高脂組：培養(yǎng)液FBS的濃度為50%；③高脂+艾塞那肽組：高脂培養(yǎng)液中加入濃度為10nmol/L艾塞那肽；④正常+艾塞那肽組：正常培養(yǎng)液中加入濃度為10nmol/L艾塞那肽；⑤高脂+艾塞那肽+PI3K抑制劑組：高脂培養(yǎng)液中加入濃度為10nmol/L的艾塞那肽和濃度為50umol/L的PI3K抑制劑LY294002。各組分別干預48h，應用全自動生化儀檢測細胞內甘油三酯（Triglyceride，TG）的含量及上清中丙氨酸氨基轉移酶(Alanine Aminotransferase, ALT)、天冬氨酸氨基轉移酶(AspartateAminotransferase, AST)、乳酸脫氫酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)、堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)的水平，油紅“O”染色測定細胞內脂滴情況，逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）測FTO mRNA的表達水平，Western blotting檢測FTO蛋白的表達情況。 結果 1．艾塞那肽對正常L02細胞的TG、ALT、AST、LDH、ALP水平、FTO mRNA和蛋白表達無明顯影響（P＞0.05）。 2．與正常對照組比較，高脂組細胞內脂滴明顯增多，TG、ALT、AST、LDH、ALP水平升高，FTO mRNA和蛋白表達均增高，差異均有顯著性（P＜0.01）。 3．與高脂組比較，高脂+艾塞那肽組細胞內脂滴明顯減少，TG、ALT、AST、LDH、ALP水平下降，FTOmRNA和蛋白表達均下降，差異均有顯著性（P＜0.01）。 4．與高脂+艾塞那肽組比較，，高脂+艾塞那肽+PI3K抑制劑組細胞內脂滴增多，TG、ALT、AST、LDH、ALP水平升高，FTO mRNA和蛋白表達均增高，差異均有顯著性（P＜0.01）。 結論 1．GLP-1受體激動劑艾塞那肽可減輕肝細胞內脂質沉積，改善肝細胞功能。 2．GLP-1受體激動劑艾塞那肽可能通過PI3k/Akt信號通路抑制FTO基因表達，進而改善肝細胞內脂代謝紊亂，對非酒精性脂肪肝起到治療作用。
[Abstract]:Background

Non - alcoholic fatty liver disease , which is a disease characterized by alcohol and other clear liver factors , is characterized by excess fat accumulation in the liver . Insulin resistance ( IR ) and oxidative stress are the main pathological physiological bases of the pathogenesis . The study shows that FTO is involved in body weight regulation and is related to insulin resistance and glycolipid metabolism . The study found that the expression level of FTO in the liver of SD rats was increased with the prolonging of the model time , and the lipid metabolism disorder was aggravated . The glucagon - like peptide - 1 ( GLP - 1 ) was used as a new type of drug for the treatment of diabetes . In this study , it is found that GLP - 1 can regulate the metabolism and proliferation of the cells through the 3 - 3 / 3 - 3 - 3 - kinase / 3 - kinase pathway .

Purpose

To investigate the effect of glucagon - like peptide 1 ( GLP - 1 ) receptor agonist exenan on the expression of FTO gene in human normal human hepatocytes L02 cells induced by high fat , and to explore the mechanism of GLP - 1 in the treatment of non - alcoholic fatty liver .

method

L02 cells were cultured with RPMI1640 medium containing 10 % FBS in vitro . L02 cells were induced by RPMI1640 medium containing 50 % FBS . The experiment was divided into 5 groups : 鈶

本文編號：1907770