本文關鍵詞：IL-17在骨髓干細胞促進肝損傷修復中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《第四軍醫(yī)大學》 2013年

IL-17在骨髓干細胞促進肝損傷修復中的作用研究

鄭林華  

【摘要】：【背景】 肝硬化是由各種慢性肝臟損害所導致的肝臟疾病晚期階段。對于失代償期肝硬化，內科常規(guī)的保肝和對癥治療不能延長患者生存期，原位肝移植是唯一有效的治療手段，，但受供肝缺乏、費用高昂等因素的嚴重限制。近年來，隨著干細胞相關研究的不斷深入，自體骨髓源干細胞（Bone marrow-derived stem cells, BMSCs）用于人類多種疾病的治療取得了重要進展。越來越多的臨床探索性研究發(fā)現(xiàn)，自體BMSCs移植能有效地提升失代償期肝硬化患者的肝功能。有關干細胞促進肝功能恢復的機理，大多數(shù)學者認為，除了轉分化為肝細胞或與內源肝細胞融合外，干細胞主要通過調控機體免疫狀態(tài)或肝臟免疫微環(huán)境而發(fā)揮作用。然而，自體BMSCs移植使機體免疫狀態(tài)發(fā)生了什么樣的變化仍未見報道。 本課題組前期進行了自體干細胞移植治療失代償期肝硬化的臨床探索性研究。我們利用粒細胞集落刺激因子（granulocyte colony-stimulating factor, G-CSF）將BMSCs動員到外周血中，再從外周血中分離出干細胞，最后將獲得的干細胞通過血管介入回輸至患者肝動脈。針對失代償期肝硬化患者的臨床隨機對照研究表明，與僅接受G-SCF處理的患者相比，接受自體干細胞移植的患者肝功能顯著提高。至2012年12月，我們對416例失代償期肝硬化患者進行了自體干細胞移植治療，隨訪結果表明，干細胞治療顯著提高了患者的3年生存率（87%，對照組為29%）。我們對42例接受干細胞移植治療的患者進行了免疫相關指標的檢測，結果發(fā)現(xiàn)：在干細胞治療后第1、3、6、9、12月，患者外周血IL-17水平呈持續(xù)下降趨勢，并與患者肝功能指標的變化呈正相關。提示IL-17可能與BMSCs促進肝功能恢復有關。 本研究將采用四氯化碳（Carbon tetrachloride, CCl_4）制備小鼠肝損傷模型，并對肝損傷小鼠進行同源BMSCs移植治療。利用這一模型，探討IL-17在CCl_4誘導小鼠肝損傷和BMSCs改善肝損傷過程中的作用，為闡明BMSCs促進肝病患者肝功能恢復的機理提供理論依據(jù)。 【目的】 1.明確IL-17在CCl_4誘導小鼠肝損傷中的作用； 2.闡明IL-17在BMSCs促進小鼠肝損傷修復中的作用。 【方法】 1.采用CCl_4腹腔注射誘導小鼠肝損傷。在肝損傷誘導過程中，HE和天狼星紅染色檢測小鼠肝臟炎癥和纖維化程度，血漿生化檢測丙氨酸轉移酶（alanineaminotransferase, ALT）、白蛋白（albumin, ALB），同時采用ELISA檢測小鼠外周血IL-17水平，Real-time PCR檢測小鼠肝組織表達促炎因子IL-6、IL-8、TNF-、IFN-γ、IL-17A、IL-17F以及IL-17RA和IL-17RC的水平，流式細胞術檢測肝內單核細胞中Th17細胞的百分比； 2.給予特異性抗小鼠IL-17抗體（Anti-IL-17mAb）或重組小鼠（Rm）IL-17干預CCl_4誘導小鼠肝損傷過程，HE和天狼星紅染色檢測小鼠肝臟炎癥和纖維化程度，血漿生化檢測ALT、ALB，Real-time PCR檢測肝纖維化相關因子基質金屬蛋白酶3（Matrix metalloproteinase3, MMP3）、金屬蛋白酶組織抑制劑1（Tissueinhibitor of metalloproteinase1, TIMP1）和TGF-β1的表達，免疫組化、Real-time PCR和Western blot檢測肝組織表達-SMA的情況； 3.將同品系小鼠BMSCs經尾靜脈移植給CCl_4誘導的肝損傷小鼠（5×106BMSCs/只），采用ELISA檢測小鼠外周血IL-17水平，Real-time PCR檢測小鼠肝組織IL-17A、IL-17F、IL-17RA、IL-17RC及IL-23p19的表達水平，流式細胞術檢測肝內單核細胞中Th17細胞的百分比； 4.給予Anti-IL-17mAb和RmIL-17因子干預BMSCs治療CCl_4誘導小鼠肝損傷的過程，HE和天狼星紅染色檢測肝組織炎癥和纖維化程度，Real-time PCR檢測肝內膠原層蛋白collagen-1的表達，血清生化檢測小鼠肝功能（ALT和ALB水平）�！窘Y果】 1. IL-17與小鼠肝損傷過程密切相關 HE、天狼星紅染色和血清生化檢測結果顯示，連續(xù)6周CCl_4腹腔注射成功誘導出小鼠肝損傷模型，表現(xiàn)為肝組織內大量炎性細胞浸潤、纖維化形成，外周血ALT升高而ALB水平顯著降低。ELISA、Real-time PCR和流式細胞術檢測發(fā)現(xiàn)，在CCl_4誘導肝損傷過程中，外周血IL-17水平和肝組織內IL-17A、IL-17F、IL-17RA、IL-17RC、IL-6、IL-8、TNF-的表達水平逐漸升高，而肝組織內Th17細胞百分比和IFN-γ的表達水平無明顯變化。當撤除CCl_4后，小鼠肝損傷逐漸恢復，外周血IL-17水平和肝組織內IL-17A、IL-17F、IL-17RA、IL-17RC、IL-6、IL-8、TNF-的表達水平也逐漸恢復至幾乎正常。 2. IL-17促進CCl_4誘導小鼠肝損傷 在用CCl_4制備小鼠肝損傷過程中，和僅給予CCl_4腹腔注射組相比，聯(lián)合注射RmIL-17能顯著加重小鼠肝損傷，而聯(lián)合注射Anti-IL-17mAb卻顯著減輕CCl_4誘導的肝損傷。Real-time PCR、免疫組化和Western blot結果顯示，與單純使用CCl_4相比，聯(lián)合使用CCl_4和RmIL-17顯著增加了肝組織內MMP3、TIMP1、TGF-β1、-SMA的表達，而聯(lián)合使用CCl_4和Anti-IL-17mAb卻抑制了MMP3、TIMP1、TGF-β1、-SMA的表達。 3.同源BMSCs下調小鼠IL-17表達水平 同源BMSCs移植治療能有效改善CCl_4誘導的小鼠肝損傷。在BMSCs促進肝損傷恢復的同時，小鼠外周血IL-17水平也明顯下降，逐漸恢復至幾乎正常水平；肝組織內IL-23p19、IL-17A、IL-17F、IL-17RA和IL-17RC的表達也顯著下降；但是肝內Th17細胞百分比無明顯變化。 4. IL-17在BMSCs促進CCl_4誘導的小鼠肝損傷修復過程中起重要作用 在BMSCs移植治療CCl_4誘導的小鼠肝損傷過程中，加入外源性RmIL-17顯著減弱了BMSCs的治療效果。與BMSCs治療組相比，BMSCs聯(lián)合RmIL-17組小鼠的肝組織炎癥和纖維化顯著加重。采用Anti-IL-17mAb對肝損傷小鼠治療，結果發(fā)現(xiàn)其能顯著減輕肝組織炎癥和纖維化程度，且與BMSCs移植治療組無明顯差異。 【結論】 本研究表明，IL-17參與了CCl_4誘導小鼠肝損傷的病理過程，BMSCs可能通過下調IL-17發(fā)揮促進小鼠肝損傷恢復的作用。BMSCs下調IL-17和IL-17促進肝損傷的機制值得下一步深入研究。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R575.2
【目錄】：

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【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 唐永明;梁立敏;余建華;胡峻;;檢測IL-17和IL-18水平在纖維增生性疾病中的意義[J];檢驗醫(yī)學與臨床;2007年02期

2 趙志海,辛紹杰,趙景民,王松山,劉平,尹鐵勇,周光德;MMP-2、MT-MMP-2在實驗性肝纖維化形成和逆轉過程中表達的動態(tài)研究[J];中華實驗和臨床病毒學雜志;2004年04期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 謝莉;朱平;;IL-22在疾病中的最新研究進展[J];廣東醫(yī)學;2013年18期

2 黃淑婷;徐建華;丁長海;;炎癥細胞因子及力學因素在膝骨關節(jié)炎發(fā)病機制和關節(jié)結構改變中的作用[J];安徽醫(yī)學;2013年09期

3 于立友;汪龍德;張晶;劉俊宏;;化纖保肝方治療氣滯血瘀型肝纖維化的臨床研究[J];西部中醫(yī)藥;2013年10期

4 石峰;黃江河;李淑華;黃玉蓮;李君梅;;2002-2011年中國公共服務場所從業(yè)人員HBsAg陽性情況分析[J];中國公共衛(wèi)生管理;2013年05期

5 范公忍;李樹玲;;骨髓干細胞移植治療肝硬化的研究進展[J];國際消化病雜志;2013年04期

6 李榮富;王志紅;;干細胞與消化系統(tǒng)疾病的治療[J];國際消化病雜志;2013年04期

7 王發(fā)選;楊婷;張洋;黃程君;崔鸝;蘭亞佳;張勤;;矽肺模型大鼠肺組織中IL-17A的表達[J];工業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病;2013年06期

8 郭美姿;陳曉琳;尹震宇;;Th17/Treg失衡在消化道腫瘤中的研究進展[J];國際消化病雜志;2013年05期

9 伍松姣;梁景云;張以昆;莫云秋;;急性冠狀動脈綜合征患者IL-18和hs-CRP的檢測意義[J];檢驗醫(yī)學與臨床;2008年18期

10 申建剛;安君艷;桑榮霞;魏娟;霍曉霞;張曉嵐;;膜型基質金屬蛋白酶1在黏著斑激酶相關非激酶誘導肝星狀細胞凋亡中的作用[J];臨床薈萃;2009年15期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 何飛;Notch信號對小鼠肝纖維化作用的研究[D];第四軍醫(yī)大學;2011年

2 黃加權;熱休克蛋白47在日本血吸蟲肝纖維化中的作用及機制研究[D];華中科技大學;2012年

3 吳艷艷;蘆薈大黃素和吡喹酮對小鼠日本血吸蟲病肝纖維化模型的影響[D];華中科技大學;2009年

4 胡志亮;HBx基因缺失突變體（HBx-d382）對L02細胞增殖的影響及其相關機制探討[D];中南大學;2010年

5 薛文達;小鼠肝核苷酸池、核酸池的特征及其與纖維化的作用關系[D];南京師范大學;2012年

6 劉涵生;骨髓間充質干細胞增加大鼠黃疸肝臟選擇性門靜脈結扎后肝功能儲備的研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2013年

7 劉躍均;IL-35在急性移植物抗宿主病中的作用研究[D];蘇州大學;2013年

8 楊磊;TNF-α和IFN-γ及含有五種細胞因子的奶牛乳汁對奶牛乳腺纖維化影響的研究[D];內蒙古農業(yè)大學;2013年

9 康良;“濁毒”立論組方經相關信號通路抑制DMN致肝纖維化及HSC活化的作用研究[D];河北醫(yī)科大學;2013年

10 茍麗娟;人骨髓間充質干細胞誘導分化為軟骨細胞過程中microRNA作用機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 尹旭;海鞘醇類似物LQC-X6抗實驗性肝纖維化的研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2011年

2 鄭人源;p38MAPK信號傳導通路對乙醛刺激的鼠肝星狀細胞增殖的影響[D];重慶醫(yī)科大學;2011年

3 周旭;靶向COX-2shRNA對大鼠肝星狀細胞α-SMA、Ⅰ型膠原、TGF-β_1基因表達的影響[D];南華大學;2011年

4 曾兆清;白細胞介素-17對肝星狀細胞的增殖及細胞周期的影響[D];山東大學;2011年

5 殷亮;羥基喜樹堿對PDGF刺激的大鼠肝星狀細胞膠原基因表達及ERK信號通路的影響[D];南昌大學;2011年

6 段惠春;HBV感染性肝病免疫細胞和細胞因子變化的基礎與臨床研究[D];青海大學;2011年

7 周柏華;和絡舒肝膠囊對肝星狀細胞絲裂原活化蛋白激酶的影響[D];華中科技大學;2011年

8 陳妍;NF-κB MMP-1和VEGF在肝硬化中的表達及其意義[D];新疆醫(yī)科大學;2008年

9 秦來英;慢性乙型肝炎病毒感染者肝內IL-17的表達及意義[D];山東大學;2008年

10 許君君;抗IGFBPrP1對硫代乙酰胺誘導的小鼠肝纖維化保護作用的研究[D];山西醫(yī)科大學;2009年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 游紹莉,趙景民,辛紹杰,王松山,劉平,尹鐵勇;實驗性肝纖維化形成及逆轉過程中膜性基質金屬蛋白酶1mRNA表達的動態(tài)研究[J];解放軍醫(yī)學雜志;2001年06期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 姜玲,王華,吳成義,張勝義,魏偉;吲哚硒對免疫性肝損傷小鼠一氧化氮和炎性細胞因子的影響[J];中國藥理學通報;2005年04期

2 劉小偉,盧放根,張廣森,游宇,吳小平,歐陽春暉,羊東曄;脂多糖時間依從性肝損傷的蛋白質組學研究[J];中華消化雜志;2004年03期

3 鐘曉明;毛慶秋;黃真;魏佳平;;三葉青提取物對四氯化碳致急性肝損傷小鼠的保護作用及急性毒性實驗[J];中成藥;2006年03期

4 丁煒,朱荃,李曉冬,孫小玉,彭國平;G-9312對CCl_4誘發(fā)小鼠肝損傷的影響[J];南京中醫(yī)藥大學學報(自然科學版);1998年06期

5 邊綸,沈新生,!王燕蓉,郭鳳英;枸杞多糖對四氯化碳所致小鼠肝損傷修復作用的形態(tài)學研究[J];寧夏醫(yī)學雜志;1996年04期

6 賈因棠,王守義;腫瘤壞死因子在肝損傷中的作用及機理[J];中國病理生理雜志;1997年06期

7 肖志勇;李曄;張華;黃宗銹;鄭碧榕;;復方靈芝制劑防治化學性肝損傷實驗研究[J];北京中醫(yī)藥大學學報(中醫(yī)臨床版);2006年06期

8 王新華;何紅梅;張延霞;趙如同;金東嶺;時志民;蘇縣輝;;黃芩苷對異煙肼和利福霉素鈉肝損傷小鼠的保護作用研究[J];中國藥房;2007年28期

9 李敏;仇雯倩;黃金華;;靈芝三萜對小鼠肝損傷的預防和保護作用研究[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志;2009年32期

10 朱良;趙冠欣;沈耀威;陳震;;橄欖總黃酮對小鼠急性酒精性肝損傷的保護作用[J];食品與機械;2010年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 寧康健;;當歸水煎醇沉液對四氯化碳致小鼠肝損傷的保護作用[A];中國畜牧獸醫(yī)學會獸醫(yī)藥理毒理學分會第十次研討會論文摘要集[C];2009年

2 李常青;李鋼;李小翚;;解毒化瘀湯對D-氨基半乳糖氨所致小鼠肝損傷的保護作用[A];肝臟病防治學術研討會及新進展學習班�？痆C];2005年

3 郭菁菁;楊秀芬;;燈盞乙素對異煙肼和利福平合用所致小鼠肝損傷的保護作用[A];中國毒理學會第二屆全國中青年學者科技論壇會議論文集[C];2007年

4 陸顯峰;韓松濤;劉磊巖;;本文肝外傷62例診治體會[A];第七屆全國創(chuàng)傷學術會議暨2009海峽兩岸創(chuàng)傷醫(yī)學論壇論文匯編[C];2009年

5 方承康;劉南英;吳銳;;土鱉四逆散對肝纖維化大鼠透明質酸及肝損傷的影響[A];第二十三屆全國中西醫(yī)結合消化系統(tǒng)疾病學術會議暨消化疾病診治進展學習班論文匯編[C];2011年

6 廖瓊;周蓉;胡勁松;張平;陳作紅;;靈芝對鵝膏毒肽所致肝損傷的保護作用研究[A];海峽兩岸第十屆菌物學暨第三屆食藥用菌學術研討會論文摘要集[C];2011年

7 蔡黔;袁建成;肖光夏;吳軍;周立新;;腸源性內毒素在燒傷后誘導肝損傷中的作用[A];中華醫(yī)學會第五次全國燒傷外科學術會議論文匯編[C];1997年

8 聶曉光;張燕齊;鄭瑞峰;姜如同;楊玲;;中藥對肝癌立體定向放射治療所致肝損傷療效觀察[A];第八屆全國中西醫(yī)結合腫瘤學術會議論文集[C];2000年

9 周娟;陳龍;潘道東;高偉;蔣英子;;乳酸菌源有機硒干預肝損傷小鼠的巨噬細胞吞噬功能活動及肝組織脂質過氧化反應變化[A];中國生理學會第六屆應用生理學委員會全國學術會議論文摘要匯編[C];2003年

10 戎茜;安利國;袁金鐸;邢維賢;;庫拉索蘆薈多糖對小鼠急性肝損傷的保護作用[A];中國細胞生物學學會第八屆會員代表大會暨學術大會論文摘要集[C];2003年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 盛文;[N];中國醫(yī)藥報;2008年

2 易奕;[N];醫(yī)藥經濟報;2009年

3 遼寧 主任醫(yī)師 王振坤;[N];家庭醫(yī)生報;2009年

4 葉石;[N];中國醫(yī)藥報;2000年

5 韓冰;[N];健康報;2009年

6 黃海敏 劉翔;[N];中國醫(yī)藥報;2005年

7 馮友根;[N];中國中醫(yī)藥報;2004年

8 曙光醫(yī)院 王靈臺 教授;[N];上海中醫(yī)藥報;2005年

9 段雪飛;[N];健康報;2007年

10 楊春;[N];科技日報;2001年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 于昉;激活素A-卵泡抑素系統(tǒng)在肝損傷中的作用研究[D];吉林大學;2011年

2 陳鵬;生理節(jié)律與一種新型功能型葡聚糖對哺乳動物肝損傷保護作用的研究[D];南京理工大學;2011年

3 李強;骨髓間充質干細胞和造血干細胞的體內示蹤及其促進肝損傷修復的對比研究[D];第四軍醫(yī)大學;2013年

4 王東輝;激活素A在四氯化碳誘導的小鼠急慢性肝損傷中的作用[D];吉林大學;2013年

5 陳杰;IL-33/ST2L通路參與Con A所致小鼠肝損傷的作用及其機制[D];華中科技大學;2012年

6 唐淑紅;五味子標準提取物對應激性肝損傷和肝癌轉移的作用研究[D];大連醫(yī)科大學;2010年

7 王曉源;復方胡黃連膠囊治療肝損傷的藥效學研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學;2010年

8 劉小偉;脂多糖誘發(fā)肝損傷的分子機理和蛋白質組學研究[D];中南大學;2003年

9 袁萍;脂氧素受體激動劑BML-111對ConA所致小鼠肝損傷的保護效應及其機制[D];華中科技大學;2010年

10 李有貴;竹節(jié)人參皂苷對乙醇性肝損傷的保護機理研究[D];浙江大學;2011年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 姜玲;吲哚硒對急性肝損傷的保護作用及其可能機制[D];安徽醫(yī)科大學;2003年

2 鄭林華;IL-17在骨髓干細胞促進肝損傷修復中的作用研究[D];第四軍醫(yī)大學;2013年

3 汪厚祥;復方柴胡郁湯對小鼠免疫性肝損傷的影響的實驗研究[D];湖北中醫(yī)學院;2005年

4 路景濤;復方黃芪提取物的保肝作用及其機理研究[D];安徽醫(yī)科大學;2003年

5 詹可順;白芍總苷對急性肝損傷的保護作用及其可能機制[D];安徽醫(yī)科大學;2003年

6 林都;雙花顆粒對小鼠實驗性肝損傷的保護作用[D];西南大學;2010年

7 王慧晶;對酒精性肝損傷具有保護作用的乳酸菌的篩選[D];揚州大學;2008年

8 方士英;蟲草多糖對實驗性肝損傷的作用及部分作用機制研究[D];安徽醫(yī)科大學;2004年

9 沈剛;MG132調控Nrf2/Keap1-ARE通路對腸缺血再灌注肝損傷的影響[D];大連醫(yī)科大學;2010年

10 鄒宇宏;BJ-JN抗肝纖維化作用及其機理的研究[D];安徽醫(yī)科大學;2003年

  本文關鍵詞：IL-17在骨髓干細胞促進肝損傷修復中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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